一種由側孢芽孢桿菌制備的微生物肥料及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種由新的側抱芽抱桿菌制備的微生物肥料W及其制備方法，屬于微 生物肥料領域。
【背景技術】
[0002] 我國人口多、耕地少，且隨著人口增長、工業和城市的發展耕地逐年遞減。為此，我 國增加農產品產量的唯一可行途徑是提高單位面積產量。才能滿足工業發展和人口增加對 農產品的需求，化肥也就順理成章的得到了廣泛應用。長期W來不合理使用化學肥料帶來 的±壤板結、地力下降、生態破壞、環境污染W及農副產品品質下降問題，已經受到國 家有關部口和農業科技界的高度重視。近幾十年來，我國一直努力探索合理施肥、克服化肥 的弊端及提高化肥利用率的有效途徑。
[0003] 農業肥料包括化學肥料和生物肥料，是我國農業生產不可替代的重要生產資料。
[0004] 其中，生物肥料作為農業生物工程學科的重要分支和±壤肥料學的重要組成部 分，近十年無論在基礎研究和應用研究方面都得到了迅速發展。近幾年來我國微生物肥料 發展很快，有多家企業從事生產經營，品種不斷增加，同時也有一些國外產品打入國內市 場。由于菌種等原因，目前市場的產品質量參差不齊，生產應用上出現了一些問題。據最近 幾年農業部監督抽查、跟蹤抽查，國家統檢的情況看，抽查合格率不到60%，產品質量問題主 要是有效菌數不達標，保質期過短。微生物肥料中有效活菌數是產品質量的重要指標，有效 活菌數不達標，產品質量就得不到保證，反映出來的是應用效果不穩定，其中原因主要是菌 種問題，菌種在制備為微生物菌種劑后，在保藏過程中的存活能力下降，存活時間變短。運 個問題實際上是由于運些微生物菌種劑所使用的菌種要么不能產生芽抱，要么產生芽抱的 能力比較弱，或者產生的芽抱萌發能力差，不能很好渡過微生物菌種劑生產過程中的脅迫 條件和庫存、保藏過程，在生產使用過程中表現為菌種活性下降，生產性能減弱，繁殖速度 變慢，抗逆性差。因此，菌種問題一直困擾我國微生物肥料的生產和發展。
[0005] 中國專利公開了一種保藏號為CGMCCNo. 5090的微生物菌種，但是經過實驗發 現，其中的培養方法有缺陷，產量低，價格高，為提高產量，本發明人對培養方法進行了改 進，意外的得到一種高產的保藏號為CGMCCNo. 5090的微生物菌種培養物，大大降低了肥料 的價格，有利于大規模生產。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種由CGMCCNo. 5090的微生物菌種培養物制備而成的微生 物肥料及其制備方法。
[0007] 為了達到上述目的，本發明提供如下技術方案： 一種培養高產的側抱芽抱桿菌（BacillusIaterosporus)的方法，所述側抱芽抱桿菌 保藏號為CGMCCNo. 5090的微生物菌種。
[0008] 該菌種被命名為"新側芽抱桿菌1號"，該菌種分離自高產農田，并經馴化，長期W 來性狀穩定。
[0009] 新側芽抱桿菌1號菌株在2010年7月22日提交中國微生物菌種保藏管理委員 會普通微生物中屯、保藏，保藏編號為CGMCCNo. 5090,生物學命名Bacilluslaterosporus， 保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所。
[0010] 該菌種的生物學特性為菌體桿狀，屬于芽抱桿菌屬，其細胞大小為0.15~ 0.18X215~510um，革蘭氏染色陽性，可變為陰性，芽抱為楠圓形，側生、中生或近中 生，抱囊膨大，游離芽抱一邊比另一邊厚(獨木舟形)。能利用多種氮源、碳源，生長溫度 20-55°C，最佳生長溫度37°C，最適PH7. 2。在不良條件下，菌體轉化產生芽抱，芽抱對不良 環境抗逆性強，可耐受l〇〇°C高溫20分鐘和干燥等惡劣條件。
[0011] 本發明的菌種的保存用斜面保存，培養時先自斜面取種后，劃線接入斜面培養基， 30-38°C培養箱靜置黑暗條件下培養18小時；用無菌水沖洗斜面，形成菌懸液，作為原始 菌液。
[0012] 本發明的保藏編號為CGMCCNo. 5090的微生物菌種培養物，其培養方法是：W上 述菌懸液為原始菌液，對菌種進行擴增培養，W達到生產培養物的目的，具體培養方法步驟 如下： 1) 將1體積菌懸液接入20倍體積的1號培養基中，30-38°C有氧培養8小時； 2) 將步驟1)得到的培養液加入到約20倍體積的2號培養基中，30-38°C有氧培養8 小時； 3) 將步驟2)得到的培養液加入到約20倍體積的3號培養基中，35-38°C培養8小時， 即得可生產用的培養物。
[0013] 本發明進一步提供微生物菌種劑，所述菌種劑的制備方法如下： 將草炭粉進行干熱滅菌后冷卻，加入到本發明得到的培養物中進行充分攬拌，用造粒 機造粒，低溫烘干獲得微生物菌種劑。粒機造粒，低溫烘干獲得微生物菌種劑，其中草炭粉 和培養物的重量比例為3-5:1。
[0014] 優選的，草炭粉和培養物的重量比例為4:1。
[0015] 本發明所述的制備方法，其中微生物菌種劑與常規肥料的重量比例為1 :9 - 11， 優選的，微生物菌種劑與常規肥料的重量比例為1 :1〇。
[0016] 本發明在于提供新的菌種培養方法，本發明的重點在于改進了培養基的配方，本 發明通過加入海藻酸鋼獲得了W下培養基： 培養過程中所用的斜面培養基配方為：海藻酸鋼5g/l，蛋白腺5g/l，氯化鋼5g/l，牛肉 膏 5g/L，瓊脂 1. 5%-2. 0%，PH調至 6. 5-7. 8。
[0017] 1號培養基配方為：海藻酸鋼5g/l，蛋白腺5g/l，氯化鋼5g/l，牛肉膏5g/L，PH調 至 6. 5-7. 8。
[0018] 2號培養基：海藻酸鋼5g/l，淀粉5g/l，薦糖IgA,酵母浸出汁0. 2g/l，蛋白腺 5邑/1，牛肉膏5g/l，硫酸錠Ig/l，憐酸二氨鐘0. 5g/l，硫酸儀0. 2g/L,氯化鋼5g/L，PH調 至 6. 5-7. 8。
[0019] 3號培養基配方為：海藻酸鋼5g/l，淀粉lOg/l，薦糖5g/l，酵母浸出汁0.Ig/L， 蛋白腺0. 5g/L，豆餅粉lOg/l，硫酸錠Ig/l，憐酸二氨鐘0. 5g/l，氯化鋼5g/L，PH調至 6. 5-7. 8〇
[0020] W上所有培養基均在使用前經高壓蒸汽滅菌（12rc，l.Ikg/cm3,30分鐘)，冷卻。
[0021] 海藻酸鋼，是一種天然多糖，1881年，英國化學家E.C.Stan化rd首先對褐色海藻 中的海藻酸鹽提取物進行科學研究。他發現該褐藻酸的提取物具有幾種很有趣的特性，它 具有濃縮溶液、形成凝膠和成膜的能力，可用于食品工業作乳化穩定劑和增稠劑。
[0022] 本發明通過在培養基中加入海藻酸鋼，意外的發現培養時間大大縮短，培養效率， 菌種的存活率和肥效大大提高。
[0023]W下為本發明的培養方法和現有技術的參數比較：
現有技術培養方法1為中國專利201110260431. 8中實施例2的培養方法。
[0024] 現有技術培養方法2為中國專利201110260431. 8中實施例1的培養方法。
[00巧]菌數檢測方法 按照常規的稀釋平板記數法檢測微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克 (庫存半個月），用無菌水溶解，用無菌水稀釋至菌體數為20-100個/ml,然后移取Iml稀 釋液到無菌培養皿中，加入適量新1培養基(斜面培養基)，充分混合后凝固，在37°C保溫箱 中倒置培養48小時，統計平板上的菌落，重復=次W上，W平均值乘W該一克微生物 菌種劑稀釋為菌體濃度為20-100個/ml時的毫升數即為每克微