本發明涉及一種釀造型梨酒用復合澄清劑的制備方法，屬于澄清劑制備技術領域。
背景技術：
梨不僅味道鮮美，而且含有多種維生素、微量元素及人體所需必需氨基酸，具有生津止渴、潤肺止咳的功效。以鮮梨為原料發酵而成的釀造型梨酒更是營養豐富、風味獨特，況且開發梨酒具有促進水果產業提升、增加產品附加值的作用，因此大力開發梨酒，具有重要經濟效益和社會效益。但是在加工過程中，容易發生沉淀和混濁等問題，即破壞了梨酒的營養價值又影響梨酒的風味及品質。故加工過程中，在保持梨酒營養和口味的同時避免混濁、沉淀以及提高梨酒的穩定性，是科研工作者和生產者密切關心的問題，亟待解決。
酒液澄清是果酒品質優劣的重要指標之一，如何得到營養破壞少、澄清透明并能長期保存的果酒，是生產的關鍵。不同的果酒，必須依據其特征，經過試驗選擇最佳的澄清方式，在除去可能引起沉淀果膠、蛋白質、鞣質、纖維素等物質，另外，通過先進的技術在減少營養物質損失的情況下，防止上述沉淀析出，是得到營養破壞少、穩定性好果酒的關鍵所在。由于梨酒營養豐富，在加工和存儲中極易發生沉淀和混濁的現象，影響營養、風味及口感，通常添加活性炭、單寧酸、皂土、明膠等單一的澄清劑，存在處理時間長、澄清效果不顯著、影響酒體品質等一系列缺點。殼聚糖是果酒澄清中常用到的澄清劑，澄清效果好，但是處理時間較長。活性炭是在食品中經常用到的吸附劑，吸附能力強，但是對于產品的色澤及風味破壞嚴重。
技術實現要素：
本發明所要解決的技術問題：針對目前澄清劑普遍存在處理時間長、澄清效果不顯著，對產品色澤和風味破壞嚴重的問題，提供了一種用微生物對硅藻土進行改性，其代謝產物與硅藻土、蛋清等復配制備釀造型梨酒用復合澄清劑的方法，本發明首先將紅平紅球菌與硅藻土粉末混合發酵，通過微生物對硅藻土進行改性，增大硅藻土的吸附性和吸附容量，微生物的代謝產物中含有多種活性基團，可與果膠、蛋白質等產生沉淀，再將蛋清、殼聚糖與水混合制成膠體，蛋清可與單寧生成黏糊狀化合物，吸附酒中的混濁微粒形成沉淀，并可除去色素，最后與硫酸鋁配合得到復合澄清劑。本發明制備的澄清劑澄清效果明顯，使用本發明制備的澄清劑處理過的梨酒的透光率達到了98.9～99.4%，并且處理時間短，能最大限度的保持梨酒的風味及營養價值，提高梨酒的穩定性，與現有的澄清劑相比，效果更佳顯著。
為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：
（1）稱取20～30g葡萄糖、10～15g酵母膏、0.3～0.5g磷酸氫二鉀、0.1～0.3g氯化鈉和800～1000mL去離子水，加入到培養皿中，攪拌混合1～2min后，置于滅菌罐中，在95～100℃下滅菌5～8min，得到發酵培養基；
（2）稱取300～400g硅藻土，加入到球磨機中球磨25～30min，過80～100目篩，收集過篩物，得硅藻土粉末，并將其與上述發酵培養基混合均勻后，倒入發酵罐中，再按接種量為6～8%將紅平紅球菌接種到發酵培養基上，隨后以5～7mL/min速率向發酵罐中通入空氣，并在28～32℃、120～150r/min下好氧發酵6～8h后，停止通入空氣，密封發酵罐，發酵3～4天；
（3）發酵結束，收集發酵罐中的物料，并置于離心機中，在4000～5000r/min下離心15～20min，分別收集上層液和沉淀，并將上層液進行噴霧干燥，得到干燥物，備用，再將沉淀用水清洗2～3次，去除表面殘余菌體，得到改性硅藻土，備用；
（4）取雞蛋，并人工將蛋清與蛋白進行分離，收集蛋清，稱取100～200g蛋清加入到盛有300～400mL去離子水的燒杯中，并置于數顯恒溫磁力攪拌機上，控制攪拌機溫度為30～40℃，轉速為200～220r/min，攪拌1～2min后，再加入15～20g殼聚糖，升溫至50～60℃，攪拌混合3～5min，得到膠體；
（5）按重量份數計，稱取10～20份步驟（3）備用的干燥物、8～12份步驟（3）備用的改性硅藻土、15～20份上述膠體和1～3份硫酸鋁，加入到燒杯中，攪拌混合3～5min后，置于真空冷凍機中凍干，將干燥后的物料置于球磨機中球磨25～30min，并過80～100目篩，收集過篩顆粒，裝袋，即可得到釀造型梨酒用復合澄清劑。
本發明的應用方法：將本發明制備的澄清劑與45～50℃熱水按質量比1:10混合均勻，得到澄清劑溶液，隨后按質量比1:130～1:150將澄清劑溶液加入到釀造型梨酒中，攪拌5～10min，然后在常溫下靜置1～2h，再將梨酒加入到布氏漏斗中抽濾，收集濾液，即可。經檢測，使用本發明制備的澄清劑處理過的梨酒的透光率達到了98.9～99.4%，比使用蛋清處理過的梨酒的透光率提高了11.8～12.3%，可溶性固形物的含量比未處理梨酒中降低了0.33～0.41%，可溶性固化物沒有明顯損失，保持了梨酒的營養成分，并且將經本發明制備的澄清劑處理過的梨酒放制在冰柜中，控制冰柜溫度在2～5℃冷凍7天，無混濁和沉淀產生，再將處理后的梨酒進行水浴加熱至80～85℃，保溫15～20min，冷卻后無失光、混濁現象發生，經本發明處理后的梨酒穩定性好。
本發明與其他方法相比，有益技術效果是：
（1）本發明制備的澄清劑能最大限度的保持梨酒的風味及營養價值，提高梨酒的穩定性，與現有的澄清劑相比，效果更佳顯著；
（2）本發明中操作簡單，值得推廣與使用。
具體實施方式
首先稱取20～30g葡萄糖、10～15g酵母膏、0.3～0.5g磷酸氫二鉀、0.1～0.3g氯化鈉和800～1000mL去離子水，加入到培養皿中，攪拌混合1～2min后，置于滅菌罐中，在95～100℃下滅菌5～8min，得到發酵培養基；然后稱取300～400g硅藻土，加入到球磨機中球磨25～30min，過80～100目篩，收集過篩物，得硅藻土粉末，并將其與上述發酵培養基混合均勻后，倒入發酵罐中，再按接種量為6～8%將紅平紅球菌接種到發酵培養基上，隨后以5～7mL/min速率向發酵罐中通入空氣，并在28～32℃、120～150r/min下好氧發酵6～8h后，停止通入空氣，密封發酵罐，發酵3～4天；發酵結束，收集發酵罐中的物料，并置于離心機中，在4000～5000r/min下離心15～20min，分別收集上層液和沉淀，并將上層液進行噴霧干燥，得到干燥物，備用，再將沉淀用水清洗2～3次，去除表面殘余菌體，得到改性硅藻土，備用；取雞蛋，并人工將蛋清與蛋白進行分離，收集蛋清，稱取100～200g蛋清加入到盛有300～400mL去離子水的燒杯中，并置于數顯恒溫磁力攪拌機上，控制攪拌機溫度為30～40℃，轉速為200～220r/min，攪拌1～2min后，再加入15～20g殼聚糖，升溫至50～60℃，攪拌混合3～5min，得到膠體；最后按重量份數計，稱取10～20份備用的干燥物、8～12份備用的改性硅藻土、15～20份上述膠體和1～3份硫酸鋁，加入到燒杯中，攪拌混合3～5min后，置于真空冷凍機中凍干，將干燥后的物料置于球磨機中球磨25～30min，并過80～100目篩，收集過篩顆粒，裝袋，即可得到釀造型梨酒用復合澄清劑。
實例1
首先稱取20g葡萄糖、10g酵母膏、0.3g磷酸氫二鉀、0.1g氯化鈉和800mL去離子水，加入到培養皿中，攪拌混合1min后，置于滅菌罐中，在95℃下滅菌5min，得到發酵培養基；然后稱取300g硅藻土，加入到球磨機中球磨25min，過80目篩，收集過篩物，得硅藻土粉末，并將其與上述發酵培養基混合均勻后，倒入發酵罐中，再按接種量為6%將紅平紅球菌接種到發酵培養基上，隨后以5mL/min速率向發酵罐中通入空氣，并在28℃、120r/min下好氧發酵6h后，停止通入空氣，密封發酵罐，發酵3天；發酵結束，收集發酵罐中的物料，并置于離心機中，在4000r/min下離心15min，分別收集上層液和沉淀，并將上層液進行噴霧干燥，得到干燥物，備用，再將沉淀用水清洗2次，去除表面殘余菌體，得到改性硅藻土，備用；取雞蛋，并人工將蛋清與蛋白進行分離，收集蛋清，稱取100g蛋清加入到盛有300mL去離子水的燒杯中，并置于數顯恒溫磁力攪拌機上，控制攪拌機溫度為30℃，轉速為200r/min，攪拌1min后，再加入15g殼聚糖，升溫至50℃，攪拌混合3min，得到膠體；最后按重量份數計，稱取10份備用的干燥物、8份備用的改性硅藻土、15份上述膠體和1份硫酸鋁，加入到燒杯中，攪拌混合3min后，置于真空冷凍機中凍干，將干燥后的物料置于球磨機中球磨25min，并過80目篩，收集過篩顆粒，裝袋，即可得到釀造型梨酒用復合澄清劑。
將本發明制備的澄清劑與45℃熱水按質量比1:10混合均勻，得到澄清劑溶液，隨后按質量比1:130將澄清劑溶液加入到釀造型梨酒中，攪拌5min，然后在常溫下靜置1h，再將梨酒加入到布氏漏斗中抽濾，收集濾液，即可。經檢測，使用本發明制備的澄清劑處理過的梨酒的透光率達到了98.9%，比使用蛋清處理過的梨酒的透光率提高了11.8%，可溶性固形物的含量比未處理梨酒中降低了0.33%，可溶性固化物沒有明顯損失，保持了梨酒的營養成分，并且將經本發明制備的澄清劑處理過的梨酒放制在冰柜中，控制冰柜溫度在2℃冷凍7天，無混濁和沉淀產生，再將處理后的梨酒進行水浴加熱至80℃，保溫15min，冷卻后無失光、混濁現象發生，經本發明處理后的梨酒穩定性好。
實例2
首先稱取25g葡萄糖、13g酵母膏、0.4g磷酸氫二鉀、0.2g氯化鈉和900mL去離子水，加入到培養皿中，攪拌混合1min后，置于滅菌罐中，在98℃下滅菌6min，得到發酵培養基；然后稱取350g硅藻土，加入到球磨機中球磨28min，過90目篩，收集過篩物，得硅藻土粉末，并將其與上述發酵培養基混合均勻后，倒入發酵罐中，再按接種量為7%將紅平紅球菌接種到發酵培養基上，隨后以6mL/min速率向發酵罐中通入空氣，并在30℃、135r/min下好氧發酵7h后，停止通入空氣，密封發酵罐，發酵3天；發酵結束，收集發酵罐中的物料，并置于離心機中，在4500r/min下離心18min，分別收集上層液和沉淀，并將上層液進行噴霧干燥，得到干燥物，備用，再將沉淀用水清洗2次，去除表面殘余菌體，得到改性硅藻土，備用；取雞蛋，并人工將蛋清與蛋白進行分離，收集蛋清，稱取150g蛋清加入到盛有350mL去離子水的燒杯中，并置于數顯恒溫磁力攪拌機上，控制攪拌機溫度為35℃，轉速為210r/min，攪拌1min后，再加入18g殼聚糖，升溫至55℃，攪拌混合4min，得到膠體；最后按重量份數計，稱取15份備用的干燥物、10份備用的改性硅藻土、18份上述膠體和2份硫酸鋁，加入到燒杯中，攪拌混合4min后，置于真空冷凍機中凍干，將干燥后的物料置于球磨機中球磨28min，并過90目篩，收集過篩顆粒，裝袋，即可得到釀造型梨酒用復合澄清劑。
將本發明制備的澄清劑與48℃熱水按質量比1:10混合均勻，得到澄清劑溶液，隨后按質量比1:140將澄清劑溶液加入到釀造型梨酒中，攪拌8min，然后在常溫下靜置1h，再將梨酒加入到布氏漏斗中抽濾，收集濾液，即可。經檢測，使用本發明制備的澄清劑處理過的梨酒的透光率達到了99.1%，比使用蛋清處理過的梨酒的透光率提高了12.0%，可溶性固形物的含量比未處理梨酒中降低了0.38%，可溶性固化物沒有明顯損失，保持了梨酒的營養成分，并且將經本發明制備的澄清劑處理過的梨酒放制在冰柜中，控制冰柜溫度在4℃冷凍7天，無混濁和沉淀產生，再將處理后的梨酒進行水浴加熱至83℃，保溫18min，冷卻后無失光、混濁現象發生，經本發明處理后的梨酒穩定性好。
實例3
首先稱取30g葡萄糖、15g酵母膏、0.5g磷酸氫二鉀、0.3g氯化鈉和1000mL去離子水，加入到培養皿中，攪拌混合2min后，置于滅菌罐中，在100℃下滅菌8min，得到發酵培養基；然后稱取400g硅藻土，加入到球磨機中球磨30min，過100目篩，收集過篩物，得硅藻土粉末，并將其與上述發酵培養基混合均勻后，倒入發酵罐中，再按接種量為8%將紅平紅球菌接種到發酵培養基上，隨后以7mL/min速率向發酵罐中通入空氣，并在32℃、150r/min下好氧發酵8h后，停止通入空氣，密封發酵罐，發酵4天；發酵結束，收集發酵罐中的物料，并置于離心機中，在5000r/min下離心20min，分別收集上層液和沉淀，并將上層液進行噴霧干燥，得到干燥物，備用，再將沉淀用水清洗3次，去除表面殘余菌體，得到改性硅藻土，備用；取雞蛋，并人工將蛋清與蛋白進行分離，收集蛋清，稱取200g蛋清加入到盛有400mL去離子水的燒杯中，并置于數顯恒溫磁力攪拌機上，控制攪拌機溫度為40℃，轉速為220r/min，攪拌2min后，再加入20g殼聚糖，升溫至60℃，攪拌混合5min，得到膠體；最后按重量份數計，稱取20份備用的干燥物、12份備用的改性硅藻土、20份上述膠體和3份硫酸鋁，加入到燒杯中，攪拌混合5min后，置于真空冷凍機中凍干，將干燥后的物料置于球磨機中球磨30min，并過100目篩，收集過篩顆粒，裝袋，即可得到釀造型梨酒用復合澄清劑。
將本發明制備的澄清劑與50℃熱水按質量比1:10混合均勻，得到澄清劑溶液，隨后按質量比1:150將澄清劑溶液加入到釀造型梨酒中，攪拌10min，然后在常溫下靜置2h，再將梨酒加入到布氏漏斗中抽濾，收集濾液，即可。經檢測，使用本發明制備的澄清劑處理過的梨酒的透光率達到了99.4%，比使用蛋清處理過的梨酒的透光率提高了12.3%，可溶性固形物的含量比未處理梨酒中降低了0.41%，可溶性固化物沒有明顯損失，保持了梨酒的營養成分，并且將經本發明制備的澄清劑處理過的梨酒放制在冰柜中，控制冰柜溫度在5℃冷凍7天，無混濁和沉淀產生，再將處理后的梨酒進行水浴加熱至85℃，保溫20min，冷卻后無失光、混濁現象發生，經本發明處理后的梨酒穩定性好。