一種黃芪超微飲片及其制備方法與質量檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及中藥領域，具體涉及一種黃芪超微飲片及其制備方法與質量檢測方 法。
【背景技術】
[0002] 中藥超微飲片是將單味中藥飲片經過科學加工并提取其有效成分制成的中藥飲 片新劑型，具有服用方便、計量準確、安全衛生、便于調配等優點。
[0003] 本發明超微飲片是以黃芪飲片為原料，經水提取、濃縮、干燥、超微粉碎等工藝制 備而成的中藥超微飲片，在此特定的制備工藝下制備的本發明超微飲片對治療子宮內膜異 位能夠發揮意想不到的突出的治療優勢。
[0004] 子宮內膜異位癥是婦科常見疾病之一，育齡婦女中的發病率約百分之十，且發病 率呈上升趨勢。由于子宮內膜異位癥的多發性、復發性及治療的難度大，并且有惡變傾向， 為婦科疾病中的疑難雜癥之一，目前主要采用手術治療和激素治療。子宮內膜異位癥引起 的盆腔痛、痛經和不孕嚴重影響了患者的生活質量和健康，已引起眾多醫家的重視。中醫藥 是治療子宮內膜異位癥的主要方法之一，與西藥相比具有毒性作用小、可長期服、療效穩定 等特點。
[0005] 目前關于本發明超微飲片尚無含量測定方法的報道。羽扇烯酮是黃芪中的活性成 分之一，對其進行含量測定，可以保證臨床用藥的安全、有效。本發明提供了對本發明超微 飲片中羽扇烯酮含量測定的方法。
[0006] 本發明所述黃芪的基原為豆科黃芪屬植物蒙古黃芪和膜莢黃芪的根。
【發明內容】
[0007] 本發明的目的是提供一種黃芪超微飲片。
[0008] 本發明的另一目的是提供該黃芪超微飲片的制備方法。
[0009] 本發明還提供了該黃芪超微飲片的質量檢測方法。
[0010] 本發明還提供了該黃芪超微飲片的制藥用途。
[0011] 本發明的目的是由以下方式實現的： 一種黃芪超微飲片是由以下重量份的原料制成的:黃芪飲片10%~20%重量份的水提取 物、黃芪飲片80%~90%重量份的超微粉碎物。
[0012] 該黃芪超微飲片的制備方法如下： (1) 取黃芪飲片10%~20%重量份，加5~15倍量水，煎煮1~4次，每次0.5~2.5小時，合 并水煎液，濃縮成浸膏，得到黃芪飲片的水提取物； (2) 取黃芪飲片80%~90%重量份，進行超微粉碎，得到黃芪飲片的超微粉碎物； (3) 將上述黃芪飲片的水提取物與黃芪飲片的超微粉碎物合并，制粒，干燥，得黃芪超 微飲片。
[0013] 該黃芪超微飲片中的黃芪飲片的水提取物的優選制備方法如下：取黃芪飲片10% ~20%重量份，加8~12倍量水，煎煮2~3次，每次1~2小時，合并水煎液，濃縮成浸膏，得到 黃芪飲片的水提取物。
[0014] 該黃芪超微飲片中的黃芪飲片的水提取物的更為優選的制備方法如下:取黃芪飲 片，加1 〇倍量水，煎煮2次，每次1小時，合并水煎液，濃縮成浸膏，得到黃芪飲片的水提取物。
[0015] 該黃芪超微飲片中的黃芪飲片的超微粉碎物的制備方法如下：取黃芪飲片80%~ 90%重量份，采用粉碎機對黃芪飲片進行超微粉碎，超微粉碎后，黃芪飲片的超微粉碎物的 粒徑為10~75μπι。
[0016] 該黃芪超微飲片中的黃芪飲片的超微粉碎物的優選制備方法如下:采用氣流粉碎 機對黃芪飲片進行超微粉碎，氣流粉碎機的氣流壓力為1000~1200kPa，進料速度為160~ 200r · min-S分級頻率為30~40Hz，粉碎時間為40~50min，得到黃芪飲片的超微粉碎物。 [0017]該黃芪超微飲片中的黃芪飲片的超微粉碎物的更為優選的制備方法如下:采用氣 流粉碎機對黃芪飲片進行超微粉碎，氣流粉碎機的氣流壓力為1 lOOkPa，進料速度為180r · mirT1，分級頻率為35Hz，粉碎時間為45min，得到黃芪飲片的超微粉碎物。
[0018] 所述的黃芪超微飲片可以采用高效液相色譜法對該黃芪超微飲片中的羽扇烯酮 進行含量測定，測定方法為： (1) 色譜條件：色譜柱：C18柱；流動相：比例為83 :17的乙腈-0.5%磷酸溶液；流速： 1. OmL/min;檢測波長:210nm;柱溫:35°C ;進樣量:20yL;理論板數按羽扇稀酮計算應不低于 5000； (2) 對照品溶液的制備：取羽扇烯酮對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lmL含 0.0773mg的溶液，作為對照品儲備液;再精密吸取對照品儲備液2mL至25mL量瓶中，加甲醇 稀釋至刻度，搖勻，即得； (3) 供試品溶液的制備:取本發明超微飲片，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加 入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量， 搖勻，濾過，取續濾液，即得； (4 )測定:精密量取對照品溶液、供試品溶液各20yL，注入高效液相色譜儀中測定。
[0019] 所述的黃芪超微飲片還可以采用高效液相色譜法對該黃芪超微飲片中的異微凸 劍葉莎醇進行含量測定，測定方法為： (1) 色譜條件:色譜柱為C18柱;流動相：比例為10:90的乙腈-0.1%磷酸;柱溫:30°C ;流 速：1.0 ml/min;檢測波長:207 nm;進樣量:20yL;理論板數按異微凸劍葉莎醇計算應不低 于5000; (2) 對照品溶液的制備:精密稱取異微凸劍葉莎醇對照品10.13 mg，置100 ml量瓶中， 用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取2 ml，置25 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖 勻，則每1 ml含異微凸劍葉莎醇8.1 yg; (3) 供試品溶液的制備:精密稱取黃芪超微飲片約0.2 g至100 ml量瓶中，加甲醇80 ml 超聲15min，冷卻后用甲醇定容至刻度，搖勾，移取1 ml至10 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻 度，搖勻，0.45 μπι濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液； (4 )測定:精密量取對照品溶液、供試品溶液各20yL，注入高效液相色譜儀中測定。
[0020] 所述的黃芪超微飲片可用于制備治療子宮內膜異位癥的藥物。
[0021] 所述的黃芪超微飲片還可用于制備治療膝關節炎的藥物。
[0022] 通過如下實驗研究驗證本發明的技術效果： 實驗一:本發明超微飲片治療子宮內膜異位癥的實驗研究 1實驗材料 1.1動物 健康未交配雌性Wistar大鼠，體重200~250g，購自甘肅中醫藥大學實驗動物中心。
[0023] 1.2藥物 1.2.1本發明黃芪超微飲片:處方:黃芪飲片200g的水提取物、黃芪飲片800g的超微粉 碎物。制法：（1)取黃芪飲片200g，加水2000mL，煎煮2次，每次1小時，合并水煎液，濃縮成浸 膏，得到黃芪飲片的水提取物；（2)取黃芪飲片800g，采用氣流粉碎機對黃芪飲片進行超微 粉碎，氣流粉碎機的氣流壓力為llOOkPa，進料速度為180r · mirT1，分級頻率為35Hz，粉碎時 間為45min，采用激光粒徑儀濕法測定粉體的粒徑分布，細粉的D 5Q，D9Q分別為29.758μπι， 58.376μπι，得到黃芪飲片的超微粉碎物；（3)將黃芪水提取物與黃芪超微粉碎物混合，得到 本發明黃芪超微飲片。配置成〇. 5g/mL藥物混懸液，備用。
[0024] 1.2.2對比黃芪超微飲片A:處方:黃芪飲片200g的水提取物、黃芪飲片800g的超微 粉碎物A。制法：（1)取黃芪飲片200g，加水2000mL，煎煮2次，每次1小時，合并水煎液，濃縮成 浸膏，得到黃芪飲片的水提取物；（2)取黃芪飲片800g，采用氣流粉碎機對黃芪飲片進行超 微粉碎，采氣流粉碎機的氣流壓力為1300kPa，進料速度為150r · mirT1，分級頻率為50Hz，粉 碎時間為60min，采用激光粒徑儀濕法測定粉體的粒徑分布，細粉的D5Q，D9〇分別為4.658μηι， 8.951μπι，得到黃芪飲片的超微粉碎物A;(3)將黃芪水提取物與黃芪超微粉碎物Α混合，得到 對比黃苗超微飲片A。配置成0.5g/mL藥物混懸液，備用。
[0025] 1.2.3對比黃芪粉碎飲片B:處方:黃芪飲片200g的水提取物、黃芪飲片800g的粉碎 物B。制法：（1)取黃芪飲片200g，加水2000mL，煎煮2次，每次1小時，合并水煎液，濃縮成浸 膏，得到黃芪飲片的水提取物；（2)取黃芪飲片800g，采用常規的齒式中藥粉碎機粉碎，過 120目篩，采用激光粒徑儀濕法測定粉體的粒徑分布，細粉的D 5Q，D9Q分別為95.658μπι， 118.95Ιμπι，得到黃芪飲片的粉碎物Β; (3)將黃芪飲片的水提取物與黃芪飲片的粉碎物Β混 合，得到對比黃芪粉碎飲片Β。配置成0.5g/mL藥物混懸液，備用。
[0026] 1.2.4丹那唑膠囊:200 mg/粒，江蘇聯環藥業股份有限公司生產。
[0027] 1.3試劑及儀器 雌二醇(E2)放免藥盒、孕酮(P)放免藥盒，由天津九鼎醫學生物工程有限公司提供。ER、 PR、VEGF、NK細胞免疫組化試劑盒，由武漢博士德生物工程有限公司提供。2008 G/r自動 計數儀。顯微鏡:OLYMPUS，型號1X70。
[0028] 2實驗方法 2.1造模 動物模型建立取成年雌性大鼠陰道涂片檢查動情周期。取動情期大鼠參考文獻方法 (常暖.大鼠子宮內膜異位癥模型的建立及其病理學觀察[J].臨床與實驗病理學雜志， 1998,14(1): 67-69.)，戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射麻醉，于下腹部正中靠左上方做一長 約1.5 cm切口，挑出左側子宮角，結扎子宮系膜血管，再結扎需切除的子宮段的兩端，切取 一段1.5 cm長的子宮。在無菌的戴克隆氏液中分離子宮內膜，然后切取5 mmX5 mm的內膜 組織片段，將上皮層對著腹壁，縫合于腹壁上。建模后3周，擇動情期大鼠，開腹見移植子宮 內膜體積增大，形成內有液體積聚并有血管形成的透明小囊泡，以體積^ 20 mm3，內膜囊泡 可見透明積液為造模成功標準。
[0029] 2.2分組與給藥 分組及給藥取建模成功60只大鼠，按異位內膜體積大小隨機分為6組，即模型組、丹那 唑陽性藥物組、本發明黃芪超微飲片組、對比黃芪超微