金蟬花美白保濕藥妝品及其制備方法_3

>[0086] 表2、酪氨酸酶活性抑制率反應體系

[0088]上面四組反應體系搖勻后分別在紫外分光光度計475nm處測定吸光度值，其抑制 率 T% 計算公式為:T% = {[(B-A)-(D-C)]/(B-A)}X100 [0089 ] c.金蝴花藥妝品保水保濕特性評價
[0090]考察金蟬花藥妝對人永生化表皮細胞(HaCat)的作用，用免疫印跡法分析金蟬花 藥妝作用前后皮膚水通道蛋白_3(AQP3)變化，分析金蟬花藥妝品對水通道蛋白的調節作 用，從分子生物學角度闡述金蟬花藥妝品的保濕效果及機制。
[0091 ]二、金蟬花藥妝品安全性評價 [0092] a.皮膚過敏性試驗
[0093] Draize大白兔模型：將大白兔背部脊柱兩側毛剪掉，不損傷表皮，去毛范圍左、右 各約5cmX 5cm。將受試物0.5g直接涂在左側皮膚上，用紗布覆蓋，最后用膠布加以固定，右 側皮膚作為對照，敷用時間72h，分別觀察皮膚lh，24h，48h，72h反應。按《歐盟化妝品安全性 評價方法》進行皮膚敏感性評價，檢驗是否有紅斑和水腫出現。
[0094]人體皮膚斑貼試驗:在進行動物皮膚刺激性試驗后，繼續進行人體皮膚斑貼試驗。 選取志愿者10人，將受試物〇.5g均勻涂在外用膠貼上，敷于志愿者洗凈的右前臂彎處，觀察 24h內皮膚反應情況。
[0095] b.蟬花藥妝品作用后人體皮膚紋理度及彈性測試
[0096]采用多功能皮膚圖像分析系統、皮膚彈性測試儀、國際照明委員會(CIE)規定的色 度系統(Lab色度系統)分別檢測藥妝品對皮膚紋理度、彈性、保濕性的影響，評價藥妝品對 皮膚的抗皺、彈性、美白、延緩衰老等多種功效。
[0097]女性志愿者16名，平均年齡25-40周歲，每天使用2次，按規定連續使用金蟬花藥妝 品6周。Skin visiometer SV 600在恒溫恒濕(溫度25±2°C，濕度50±2%)的環境下，每次 測5個點，每周一次，以卡波姆(Placebo)做對照，檢測皮膚彈性參數、紋理參數、粗糙度參數 以及美白效果。
[0098]三、金蟬花面霜藥妝品的質量檢測 [0099] a.流變學檢測
[0100]膏霜以3000rpm速度離心15min，觀察是否有分散情況。藥物穩定性試驗箱進行耐 寒(-5~0°C)、耐熱(40-60°C)以及光照測驗。一個月后觀察，考察金蟬花藥妝穩定性、耐熱、 耐溫和光照。
[0101] b.微生物污染檢測
[0102] 按照歐盟藥妝管理委員會規定的方法檢驗微生物，具體規定為:藥妝品菌落總數 不得超過1000cfu/mL，霉菌和酵母菌不得超過lOOcfu/mL，大腸菌群、綠膿桿菌，金黃色葡萄 球菌等有害菌群不得檢出。
[0103] 試驗菌株:大腸桿菌;綠膿桿菌；白色念珠菌;金黃色葡萄球菌;霉菌和酵母菌等6 種指示菌。
[0104] 具體步驟:將培養24h的指示細菌和培養5天的指示酵母菌用50mmol/L PBS配制成 106cfu/mL菌懸液。取待測樣品lg,加入上述菌懸液lmL均勾混合20min。隨后50mmol/L PBS 進行梯度稀釋，分別接種于不同試驗菌株的培養基平板上，37°C培養24h后觀察結果，以無 菌水代替樣品作為空白對照。
[0105] 抑菌率=(對照樣品平均菌落數-試驗樣品平均菌落數)/對照樣品平均菌落數X 100% ；
[0106] 90% 2抑菌率2 50%，表明產品有抑菌作用；
[0107] 抑菌率2 90%，表明產品有較強抑菌作用。
[0108] 本發明的技術優勢為：
[0109] 1、由于目前金蟬花產品多以內服為主，而本發明結合金蟬花的歷史記載和科學研 究理論基礎，來研發金蟬花藥妝品，本發明中的金蟬花藥妝品拓展了金蟬花的應用領域，更 為充分地發揮其價值。
[0110] 2、本發明能盡可能的保留金蟬花有效成分，拓展金蟬花應用領域，充分發揮金蟬 花價值，該金蟬花藥妝品及其制備方法以野生金蟬花為原料進行超聲醇提，有效成分不易 被破壞，所得產品中很好的保持了金蟬花的有效活性成分，并且藥妝品制作完全采用天然 原料，后期對藥妝品的功效和質量檢測進行了研究，使之符合歐美藥妝品的標準，從而開發 對人體健康適合國人的藥妝品。
[0111] 綜上所述，本發明研發的以金蟬花為基本活性成分的藥妝品，分析皮膚問題產生 的原因和機理來設計符合國人膚質的化妝品，同時結合體內外藥理實驗、人體功效評價和 產品安全性檢測，保證產品安全性的同時，具有功效顯著的特點。因此，開展金蟬花藥妝品 研究，充分地發揮其市場應用價值，對金蟬花產業的發展具有重要意義。即，本發明作用于 面部皮膚深層，滋潤保濕美白，具有顯著抗皺功效，可廣泛應用于潤膚霜、膏霜、乳液、面膜 及精華液等護膚藥妝中。
[0112] 本發明的金蟬花美白保濕藥妝品的用法和用量可參照常規美白保濕化妝品的用 法和用量。
【附圖說明】
[0113] 下面結合附圖對本發明的【具體實施方式】作進一步詳細說明。
[0114] 圖1金蟬花有效成分提取工藝圖；
[0115] 圖2為金蟬花藥妝品研發工藝圖；
[0116] 圖3為金蟬花藥妝品對人永生化表皮細胞水通道蛋白-3的調節作用圖；
[0117] 圖4是本發明實施例中金蟬花藥妝品皮膚敏感性檢測結果對比圖（對大白兔進行 敏感性檢測）；
[0118] 圖5是金蟬花藥妝品對人體皮膚敏感性斑貼測驗示意圖。
【具體實施方式】
[0119] 實施例1、一種金蟬花美白保濕藥妝品，依次進行以下步驟：
[0120] -、金蟬花提取液的制備：
[0121] 1)、前處理：
[0122] a.金蝴花原料要求：
[0123] 每年六七月份是金蟬花出土的季節，也是采收金蟬花的最佳時間，采收帶有孢子 粉的金蟬花全株；
[0124] b.殺菌：
[0125] 先要把金蟬花洗干凈，最好把上面的殼剝掉，紫外線殺菌lOmin，低溫烘干(45°C低 溫熱風干燥約24h);得干燥金蟬花原料(含水率< 10% );
[0126] c.粉碎：
[0127] 在常溫下將干燥金蟬花原料粉碎，得到粒度為60目的粗粉;然后采用超微粉碎技 術進行精細粉碎至過500目篩，過篩得到粒徑< 25微米的精細粉料。
[0128] 2)、萃取：
[0129] 將50% (體積％ )酒精和精細粉料(精細粉碎的金蟬花粉末），固液比為lg/6~8ml， 采用綠色超聲(60kHz的頻率)于室溫下提取30分鐘，得到金蟬花萃取液。
[0130] 3)、過濾：
[0131] 對金蟬花萃取液進行真空抽濾，旋轉蒸發儀濃縮(50°C，濃縮至為原體積的1/3)得 到金蟬花浸提液。
[0132] 4)、精濾：
[0133] 將步驟3)所得的金蟬花浸提液，進一步經過微孔過濾器(過濾孔徑為0.22微米)進 行精細過濾，得金蟬花提取液(金蟬花有效活性成分）。
[0134] 具體為:將進料管放至粗濾液內，啟動高速管式離心機(轉速為15000r/min)和蠕 動栗，設定懦動栗的轉速為150~250r/min，開始離心過濾至新的藥液儲存罐;過濾器采用 全密閉式過濾，整個過程都在機體內完成，對環境無無污染，過濾采用微孔濾芯，濾芯可重 復使用，過濾器可以實現濾渣的干排渣，整個過濾過程可實現全自動化操作;經過精濾后得 到的濾液為金蟬花提取液(金蟬花有效活性成分)該金蟬花提取液中含有多糖，蛋白質、氨 基酸、蟲草素，核苷類、蟲草酸、超氧化物歧化酶SOD、維生素類及鈣、鐵、磷、硒等微量元素等 有效活性成分。
[0135] 二、乳化：
[0136] 配方如表3所述。
[0137] 表3、金蟬花面霜藥妝品基本配方(W/W，％ )
[0138]
[0139]
[0140] 按照表3的金蟬花藥妝品基本配方，將A相原料加熱到85°C，攪拌至均勻混合(至完 全溶解）；將B相原料加熱到85°C，中速均勻攪拌（100r/min，20min)，然后迅速加入到上述A 相原料中，均質機保溫攪拌15min，冷卻至60°C，繼續加入C相原料，立即均質機高速保溫攪 拌(600r/min)10min至均勾;待溫度降至35°C加入E相原料，攪拌均質。
[0141 ]本發明中沒有明確告知的攪拌是指的50r/min轉速。
[0142] 三、灌裝包裝：
[0143] 將步驟二所得的乳化物用蘋果