Il-22二聚體在制備用于治療胰腺炎的藥物中的用圖
【專利說明】IL-22二聚體在制備用于治療胰腺炎的藥物中的用途
[0001] 相關申請
[0002] 本申請要求中國專利申請No. 201310549648. X的優先權，所述申請全部內容通過 援引并入本文。 發明領域
[0003] 本發明涉及生物和醫藥技術領域。更具體地，本發明涉及IL-22二聚體在制備用于 治療胰腺炎的藥物中的用途。
[0004] 發明背景
[0005] 胰腺炎通常被認為是由于胰蛋白酶原被轉化成胰蛋白酶，接著是胰腺泡細胞的自 我消化引起的。根據病程，胰腺炎可分為急性胰腺炎(AP)和慢性胰腺炎(CP)兩種形式。
[0006] 急性胰腺炎的主要病因是膽石癥(包括膽道微結石）、高甘油三酯血癥和酒精等。 其他原因包括暴食、休克、妊娠、寄生蟲感染、高脂血癥、高鈣血癥、腮腺炎等。而且，如腹部 手術、內窺鏡逆行膽管胰造影(ERCP)、內窺鏡超聲檢查(EUS)等醫源性因素，以及如氫氯噻 唑、依他尼酸、吲哚美辛、口服避孕藥等藥物性因素也與AP有關。另外，有許多患者病因不 明，稱為特發性胰腺炎。
[0007] 急性胰腺炎是一種臨床常見的疾病，急性胰腺炎的基本病變包括水腫、出血和壞 死。據報道，總體上，85%的患者具有間質性胰腺炎，15% (范圍4-47%)具有壞死性胰腺炎。 在具有間質性胰腺炎的患者中，大約10%經歷器官衰竭，但是在大多數中，它是瞬時的，死 亡率很低。在具有壞死性胰腺炎的患者中，33% (范圍16-47%)具有感染性壞死（infected necrosis)，壞死性胰腺炎中器官衰竭的中值流行率為54% (范圍29-78% )。與無菌性壞死 中器官衰竭的流行率(45-73%)相比，感染性壞死中器官衰竭的流行率(34-89%)相同或略 高。急性胰腺炎的總體死亡率為大約5%，間質性胰腺炎的死亡率為大約3%，壞死性胰腺炎 的死亡率為大約17% (感染性壞死中大約30%，無菌性壞死中大約12% )。在器官衰竭缺失 下的死亡率為〇,有單一器官衰竭為3% (范圍0-8% )，有多系統器官衰竭為47% (范圍28-69%)(Peter A.Banks等，Am J Gastroenterol, 101:2379-2400,2006)。目前，急性膜腺炎 的治療是支持性的，而且由液體和鹽置換及疼痛處理組成，臨床上仍沒有特異有效的治療 藥物。
[0008] 慢性胰腺炎是由各種致病因素引起的局限性或彌漫性胰腺炎癥。復發性嚴重急性 胰腺炎可發展成慢性胰腺炎（廠/0)?/疋/6，]\^1；[116丨13.!16口31:08381：1'0611丨61'01087,38(5): 408-12，1991)。慢性胰腺炎發病的根本機制尚未完全闡明。目前的治療主要包括補充胰蛋 白酶的替代療法和治療并發癥(如疼痛處理）。
[0009] Feng等報道了 IL-22減輕小鼠中由娃皮素（cerulean)誘發的胰腺炎 (Int.J.Biol.Sci,8(2),249-257,2012)。
[0010] 本文中提到的所有出版物、專利、專利申請和已公布專利申請的全部公開內容在 此通過援引并入本文。
[0011] 發明概述
[0012] 本發明的一個目的是提供IL-22二聚體在制備用于預防和/或治療胰腺炎的藥物 中的用途。
[0013] 在本發明的一個方面中，提供了白介素-22(IL_22)二聚體在制備用于治療和/或 預防胰腺炎的藥物中的用途。
[0014] 在一些實施方式中，所述胰腺炎選自由急性胰腺炎、慢性胰腺炎、酒精性胰腺炎、 復發性胰腺炎、膽汁返流性胰腺炎、間質性胰腺炎、壞死性胰腺炎、和ERCP后胰腺炎組成的 組。
[0015] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體如式I所示：
[0016] M1-L-M2 I
[0017] 式中，
[0018] Ml是IL-22的第一單體，
[0019] M2是IL-22的第二單體，且
[0020] L是位于所述第一單體和所述第二單體之間的，連接所述第一單體和所述第二單 體的接頭。
[0021] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體保持了IL-22的生物學活性，并且具有比所 述第一單體或所述第二單體任一的血清半衰期的2倍要長的血清半衰期。
[0022] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體的血清半衰期比所述第一單體和/或所述第 二單體的血清半衰期的3倍、5倍或10倍要長。
[0023] 在一個優選的實施方式中，所述接頭L選自由下述各項組成的組：
[0024] (i)3至50個氨基酸的短肽;和
[0025] (ii)式 II 的多肽：
[0026] -Z-Y-Z- II
[0027] 式中，
[0028] Y為載體蛋白，
[0029] Z為無、或1至30個氨基酸的短肽，且
[0030] 為化學鍵或共價鍵。
[0031]在一些實施方式中，為肽鍵。
[0032]在一些實施方式中，Z的長度是5-50個氨基酸殘基。
[0033] 在一些實施方式中，Z包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 10的序列。
[0034] 在一些實施方式中，Z具有SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 10的序列。
[0035] 在一些實施方式中，所述載體蛋白包含至少兩個能形成分子間二硫鍵的半胱氨 酸。
[0036] 在一些實施方式中，所述載體蛋白在IL-22單體的N端。
[0037] 在一些實施方式中，所述載體蛋白在IL-22單體的C端。
[0038] 在一些實施方式中，所述載體蛋白是清蛋白或人IgG的Fc片段。
[0039] 在一些實施方式中，Fc片段包含CH2和CH3域。
[0040] 在一些實施方式中，Fc片段包含SEQ ID N0:2或SEQ ID N0:9的序列。
[0041 ] 在一些實施方式中，Fc片段具有SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:9的序列。
[0042] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體由兩個單體亞基形成，其中每一個單體亞基 包含一個IL-22域、一個二聚化域和一個任選的連接所述IL-22域和所述二聚化域的接頭。
[0043] 在一些實施方式中，所述IL-22域為IL-22單體，所述二聚化域包含人免疫球蛋白 (如1861、1862、1863、或以64)的？(3片段，所述任選的接頭為連接所述11^22單體和所述?(3片 段的肽，且所述二聚體通過兩個二聚化域(如Fc片段)經由一個或多個二硫鍵連接而形成。
[0044] 在一些實施方式中，所述二硫鍵的數目為2至4。
[0045] 在一些實施方式中，每一個IL-22二聚體的所述單體亞基包含選自SEQ ID N0:4和 SEQ ID NO:6-8的氨基酸序列。
[0046] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體的所述第一單體和所述第二單體是相同的。
[0047] 在一些實施方式中，所述第一單體和所述第二單體是不同的。
[0048] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體的生物學活性選自由下述各項組成的組中 的一種或多種生物學活性：
[0049] (a)在體內降低淀粉酶和/或脂肪酶的水平，
[0050] (b)在體內減輕胰腺水腫，
[0051] (C)在體內抑制胰腺中腺泡細胞和/或脂肪細胞的壞死，
[0052] (d)在體內減輕制胰腺中炎癥細胞的浸潤。
[0053] 在本發明的另一個方面中，提供了一種用于預防和/或治療胰腺炎的藥物組合物， 所述藥物組合物含有藥學可接受載劑和式I的IL-22二聚體：
[0054] M1-L-M2 I
[0055] 式中，
[0056] Ml是IL-22的第一單體；
[0057] M2是IL-22的第二單體;且
[0058] L是位于所述第一單體和所述第二單體之間的，連接所述第一單體和所述第二單 體的接頭。
[0059] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體保持了IL-22的生物學活性，并且具有比所 述第一單體或所述第二單體任一的血清半衰期的2倍要長的血清半衰期。
[0060] 在本發明的另一個方面中，提供了 IL-22二聚體在制備用于提高淀粉樣蛋白A蛋白 (SAA)和/或C反應蛋白（CRP)的血清水平，和/或降低甘油三酯(TG)的血清水平的藥物中的 用途。
[0061] 在本發明的另一個方面中，提供了一種治療個體中的胰腺炎的方法，包含對個體 施用(如靜脈內施用)有效量的IL-22二聚體。
[0062] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體包含兩個單體亞基，其中每個單體亞基包含 一個IL-22域和一個二聚化域。
[0063] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體的每個單體亞基包含通過任選的接頭序列 連接于一個二聚化域的一個IL-22域。
[0064]在一些實施方式中，所述接頭序列是大約5至大約50個氨基酸。
[0065] 在一些實施方式中，所述接頭序列包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 10的序列。
[0066] 在一些實施方式中，所述接頭序列具有SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 10的序列。
[0067]在一些實施方式中，所述二聚化域包含至少兩個能形成分子間二硫鍵的半胱氨 酸。
[0068]在一些實施方式中，所述二聚化域至少包含Fe片段的一部分。
[0069] 在一些實施方式中，所述Fe片段包含CH2和CH3域。
[0070] 在一些實施方式中，所述Fe片段包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:9的序列。
[0071] 在一些實施方式中，所述Fe片段具有SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:9的序列。
[0072] 在一些實施方式中，每個單體亞基的所述IL-22域具有SEQ ID N0:3的序列。
[0073] 在一些實施方式中，每個所述單體亞基具有選自SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6-8的 序列。
[0074] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體靜脈內施用。
[0075] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體的施用量為大約2yg/kg至大約200yg/kg。
[0076] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體的施用量為大約5yg/kg至大約80yg/kg。
[0077] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體的施用量為大約10yg/kg至大約45yg/kg。
[0078] 在一些實施方式中，所述胰腺炎為急性胰腺炎。
[0079] 在一些實施方式中，所述胰腺炎為慢性胰腺炎。
[0080]在一些實施方式中，所述胰腺炎為間質性胰腺炎。
[0081 ]在一些實施方式中，所述胰腺炎為壞死性胰腺炎。
[0082]在一些實施方式中，所述胰腺炎為酒精誘發的胰腺炎。
[0083]在一些實施方式中，所述胰腺炎為復發性胰腺炎。
[0084]在一些實施方式中，所述胰腺炎為膽汁返流性胰腺炎。
[0085]在一些實施方式中，所述胰腺炎為ERCP誘發的胰腺炎。
[0086] 在一些實施方式中，所述個體具有升高的血清淀粉酶、升高的血清脂肪酶、升高的 尿液淀粉酶、或升高的C反應蛋白。
[0087] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體的施用不多于大約每周一次。
[0088] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體的施用不多于大約每月一次。
[0089] 在一些實施方式中，所述IL-22二聚體的施用不多于大約每三個月一次。
[0090] 在一些實施方式中，所述有效量的IL-22二聚體導致升高個體中血清淀粉樣蛋白A 蛋白或C反應蛋白的水平。
[0091] 在一些實施方式中，所述有效量的IL-22二聚體導致抑制個體中甘油三酯。
[0092] 在一些實施方式中，所述有效量的IL-22二聚體未導致升高炎性細胞因子的水平。
[0093] 在一些實施方式中，所述炎性細胞因子選自TNF-a、IL-6、IL-10jPIL_8。
[0094] 在一些實施方式中，所述有效量的IL-22二聚體導致在體內降低淀粉酶和/或脂肪 酶的水平。
[0095] 在一些實施方式中，所述有效量的IL-22二聚體在體內減輕胰腺水腫。
[0096]在一些實施方式中，所述有效量的IL-22二聚體在體內抑制胰腺中腺泡細胞和/或 脂肪細胞的壞死。
[0097]在一些實施方式中，所述有效量的IL-22二聚體在體內減輕胰腺中炎癥細胞浸潤。 [0098] 在一些實施方式中，所述二聚化域在IL-22二聚體亞基的N端。
[0099] 在一些實施方式中，所述二聚化域在IL-22二聚體亞基的C端。
[0100]本領域技術人員清楚的是，本發明上文描述的和下文實施例中討論的各技術特征 可以彼此組合，構成新的或甚至更好的技術方案。因此，本發明不應解讀為限于本文中列出 的實施方式。
[0101] 附圖簡述
[0102] 圖1是依照本發明的一種示例性的IL-22二聚體的示意圖。圖中，表示接頭以及 標記為"IL-22"的橢圓形表示IL-22單體。
[0103]圖2A和圖2B是依照本發明的示例性IL-22二聚體的示意圖。圖中，表示氨基酸 接頭以及標記為"IL-22"的橢圓形表示IL-22單體。圖2A中，標記為"C"的橢圓形表示載體蛋 白，其中IL-22位于載體蛋白的N-末端。圖2B中，標記為"Fc"的半橢圓形表示Fc片段(一種二 聚化域），顯示通過兩個Fc