人uba2基因的用途及其相關藥物的制作方法【
技術領域：
】[0001]本發明涉及生物
技術領域：
，更具體地涉及人UBA2基因的用途及其相關藥物。【
背景技術：
】[0002]RNA干擾（RNAinterference,RNAi)即用核苷酸組成的短的雙鏈RNA(dsRNA)進行轉錄后基因沉默。它可高效、特異地阻斷體內特定基因的表達，導致其降解，從而引起生物體內特異基因的沉默，使細胞表現出某種基因表型的缺失，是近年來新興的一種常用的研究基因功能、尋找疾病治療方法的實驗室技術。研究表明，長度為21-23nt的雙鏈RNA能夠在轉錄和轉錄后水平特異性的引起RNAi(TuschlT，ZamorePD,SharpPA,BartelDP.RNAi:double-strandedRNAdirectstheATP-dependentcleavageofmRNAat21to23nucleotideintervals.Cell2000;101:25-33·)。腫瘤患者雖經化療、放療和綜合治療，但五年生存率仍很低，如能對腫瘤發病和進展有關的基因進行干預，將能為腫瘤的治療開辟新途徑。近年來，RNAi已成為腫瘤的基因治療的有效策略。利用RNAi技術可以抑制原癌基因、突變的抑癌基因、細胞周期相關基因、抗凋亡相關基因等的表達來抑制腫瘤進程(Uprichard,SusanL.ThetherapeuticpotentialofRNAinterference.FEBSLetters2005；579:5996-6007.)〇[0003]UBA2是泛素類修飾激活酶2。UBA2的主要作用是對蛋白進行翻譯后修飾，方式主要分為兩種：一種是通過把SUM0小蛋白加到要修飾的蛋白上，另一種是通過小泛素樣因子修飾，在這其中UBA2和SAE1形成一個異源二聚體后作為SUM0激活酶發揮作用。[OkumaT,HondaR,IchikawaG,TsumagariN,YasudaH:InvitroSUMO-lmodificationrequirestwoenzymaticsteps,ElandE2.BiochemBiophysResCommun.1999Jan27；254(3):693-8.]〇[0004]UBA2能和AP0BEC3G蛋白結合，抑制VIF介導的蛋白酶體降解，從而抑制HIV復制。[AP0BEC3G-UBA2fusionasapotentialstrategyforstableexpressionofAP0BEC3GandinhibitionofHIV-lreplication.Retrovirology.2008Aug4；5:72.doi:10.1186/1742-4690-5-72.]。UBA2與白塞氏病的發生有關。[R印licationstudyconfirmstheassociationbetweenUBAC2andBchfct'sdiseaseintwoindependentChinesesetsofpatientsandcontrols.ArthritisResTher.2012Mar29；14(2):R70.doi:10.1186/ar3789.]UBA2還與肌炎，皮肌炎有關。[Anti-SAEantibodiesinautoimmunemyositis:identificationbyunlabelledproteinimmunoprecipitationinanItalianpatientcohort.JImmunolMethods.20120ct31；384(l-2):128-34.doi:10.1016/j.jim.2012.07.019.Epub2012Aug2.]〇[0005]目前，UBA2在腫瘤中的作用未見報道。為了研究UBA2和腫瘤的相關性，本發明選取結腸癌，以RNAi為手段研究UBA2在結腸癌發生和發展中的作用。【
發明內容】[0006]本發明的目的在于公開與人UBA2基因相關的治療方法及藥物，以RNA干擾（RNAi)為手段研究UBA2基因在腫瘤細胞的存活和凋亡過程中的作用。[0007]本發明第一方面，以RNA干擾為手段，研究了UBA2基因在腫瘤發生和發展中的作用，公開了一種抑制或降低腫瘤細胞生長、增殖、分化和/或存活的方法，該方法包括：向腫瘤細胞施用一種能夠特異性抑制UBA2基因的轉錄或翻譯，或能夠特異性抑制UBA2蛋白的表達或活性的分子，以此來抑制腫瘤細胞的生長、增殖、分化和/或存活。[0008]所述腫瘤細胞選自其生長與UBA2蛋白的表達或活性相關的腫瘤細胞。較優的，所述腫瘤細胞選自結腸癌。[0009]所述抑制或降低腫瘤細胞生長、增殖、分化和/或存活的方法中，所述分子的施用量為足夠降低UBA2基因的轉錄或翻譯，或者足夠降低UBA2蛋白的表達或活性的劑量。進一步的，所述UBA2基因的表達至少被降低50%、80%、90%、95%或99%。[0010]所述分子可選自但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂類、小分子化學藥、抗體藥、多肽、蛋白或干擾慢病毒。[0011]所述核酸包括但不限于：反義寡核苷酸、雙鏈RNA(dsRNA)、核酶、核糖核酸內切酶ΠΙ制備的小干擾RNA(esiRNA)或者短發夾RNA(shRNA)。[0012]所述雙鏈RNA、核酶、esiRNA或者shRNA含有UBA2基因的啟動子序列或UBA2基因的信息序列。[0013]進一步的，所述雙鏈RNA為小干擾RNA(siRNA)。所述小干擾RNA包含第一鏈和第二鏈，所述第一鏈和所述第二鏈互補共同形成RNA二聚體，并且所述第一鏈的序列與UBA2基因中15-27個連續的核苷酸序列基本相同。所述小分子干擾RNA能特異性結合靶序列所編碼的mRNA片段，并特異性沉默人UBA2基因的表達。[0014]進一步的，所述小干擾RNA的第一鏈序列與UBA2基因中的靶序列基本相同。較優的，所述UBA2基因中的靶序列含有SEQIDNO:1所示的序列。[0015]所述UBA2基因中的靶序列即為所述小分子干擾RNA特異性沉默UBA2基因表達時，與所述的小分子干擾RNA互補結合的mRNA片段所對應的UBA2基因中的片段。[0016]較佳的，所述UBA2基因來源于人。[0017]本發明第一方面還公開了一種分離的人UBA2基因在制備或篩選腫瘤治療藥物，或者在制備腫瘤診斷藥物中的用途。[0018]進一步的，所述腫瘤選自結腸癌。[0019]所述將分離的UBA2基因用于制備或篩選腫瘤治療藥物包括兩方面的內容：其一，將UBA2基因作為藥物或制劑針對腫瘤細胞的作用靶標應用于制備腫瘤治療藥物或制劑；其二，將UBA2基因作為藥物或制劑針對腫瘤細胞的作用靶標應用于篩選腫瘤治療藥物或制劑。[0020]所述將UBA2基因作為藥物或制劑針對腫瘤細胞的作用靶標應用于制備腫瘤治療藥物或制劑具體是指：將UBA2基因作為RNA干擾作用的靶標，來研制針對腫瘤細胞的藥物或制劑，從而能降低腫瘤細胞內UBA2基因的表達水平。[0021]所述將UBA2基因作為藥物或制劑針對腫瘤細胞的作用靶標應用于篩選腫瘤治療藥物或制劑具體是指：將UBA2基因作為作用對象，對藥物或制劑進行篩選，以找到可以抑制或促進人UBA2基因表達的藥物作為腫瘤治療備選藥物。如本發明所述的UBA2基因小分子干擾RNA(siRNA)即是以人UBA2基因為作用對象篩選獲得的，可用作具有抑制腫瘤細胞增殖作用的藥物。除此之外，諸如抗體藥物，小分子藥物等也可將UBA2基因及其蛋白作為作用對象。[0022]所述將UBA2基因用于制備腫瘤診斷藥物，是指將UBA2基因表達產物作為一項腫瘤診斷指標應用于腫瘤診斷藥物的制備。[0023]通過免疫組織化學的方法檢測UBA2基因在腫瘤組織、正常組織和腫瘤周圍正常組織中的表達水平。研究發現：UBA2基因在腫瘤組織中的表達量顯著高于正常組織和腫瘤周圍正常組織。提示UBA2基因可能作為一種癌基因，在腫瘤的發生發展中發揮重要作用；[0024]UBA2基因基因的表達水平可能成為腫瘤診斷的標志。[0025]所述腫瘤治療藥物為能夠特異性抑制UBA2基因的轉錄或翻譯，或能夠特異性抑制UBA2蛋白的表達或活性的分子，從而降低腫瘤細胞中UBA2基因的表達水平，達到抑制腫瘤細胞的增殖、生長、分化和/或存活的目的。[0026]所述通過分離的UBA2基因制備或篩選獲得的腫瘤治療藥物或者腫瘤診斷藥物包括但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂類、小分子化學藥、抗體藥、多肽、蛋白或干擾慢病毒。[0027]所述核酸包括但不限于：反義寡核苷酸、雙鏈RNA(dsRNA)、核酶、核糖核酸內切酶ΠΙ制備的小干擾RNA(esiRNA)或者短發夾RNA(shRNA)。[0028]所述腫瘤治療藥物的施用量為足夠降低人UBA2基因的轉錄或翻譯，或者足夠降低人UBA2蛋白的表達或活性的劑量。以使人UBA2基因的表達至少被降低50%、80%、90%、95%或99%。[0029]采用前述腫瘤治療藥物治療腫瘤的方法，主要是當前第1頁1 2 3 4