一種氨酸酶抑制劑的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明公開了一種氨酸酶抑制劑的制備方法，屬于氨酸酶抑制劑制備技術領域。
【背景技術】
[0002]酪氨酸酶又稱酚氧化酶、多酚氧化酶、兒茶酚氧化酶，是結構復雜的多亞基的含銅氧化還原酶，廣泛存在于微生物、動植物及人體中。它是生物體內催化黑色素生成的關鍵限速酶，而且與果蔬褐化、人體色素沉著性疾病(如雀斑、黃褐斑、老年斑等)及黑色素瘤的發生與治療有重要關系。酪氨酸酶抑制劑可通過抑制酪氨酸酶的活性來切斷黑色素的生物合成反應鏈，以此達到阻礙黑色素生成、防止果蔬褐變等目的。目前酪氨酸酶抑制劑已廣泛應用于美白護膚化妝品、害蟲調控劑以及食品添加劑等各個方面。因此，對醫藥、化妝品和食品工業等多個領域而言，酪氨酸酶抑制成分的研究與開發均具有廣闊的應用前景。
[0003]酪氨酸酶抑制劑可以抑制酪氨酸酶的活性，從而降低酪氨酸酶引起的不利影響。到目前為止，人們從低等菌類到高等植物中發現了許多天然酪氨酸酶抑制劑，如曲酸和壬二酸;從高等植物中獲得的酪氨酸酶抑制劑多數屬于多酚類物質，主要分為黃酮類和二苯乙烯類。
[0004]當前，酪氨酸酶抑制劑的來源以有機合成、商品化合物篩選以及天然植物或微生物次級代謝產物的分離提取三個途徑為主;化學合成產物具有毒副作用強、成本較高、操作難度大等弊端，尋求天然來源的酪氨酸酶抑制劑仍然是引起食品科學家和藥物化學家高度興趣的研究課題，但是從天然植物中雖然可以提取得到一些具有很強活性的酪氨酸酶制劑，但是由于它幾乎不溶或難溶于水等缺點，難于廣泛得到應用。
【發明內容】
[0005]本發明主要解決的技術問題:針對目前傳統化學合成法合成酪氨酸酶抑制劑時毒副作用強，成本高，操作難度大，而天然植物分離提取雖可以得到具有很強活性的酪氨酸酶制劑，無毒副作用，但是由于其幾乎不溶或難溶于水，難于廣泛得到應用的現狀，提供了一種將茶葉籽柏脫脂后利用乙醇提取，并將提取物與餐后廢氣食用油混合，每天淋洗風干后的茶果皮，使得茶果皮長菌，之后再用雙氧水對長菌的茶果皮進行滅菌，最后將滅菌后出現黑色霉菌的茶果皮再次利用乙醇水溶液進行提取，提取液濃縮后，即可得到氨酸酶抑制劑的制備方法。該方法操作簡單易行，原料天然易得，不僅制得的氨酸酶抑制劑活性強，1(:50值為42.5yg/mL，而且大大提高了氨酸酶抑制劑的提取效率，增強了氨酸酶抑制劑的溶解性和有效性，用于美白化妝品、預防和治療人體黑色素過多導致的沉著性疾病，具有極好的商業前景。
[0006]為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是:
(1)稱取500?100g茶果皮，放入清水中反復沖洗，去除表面殘留污物后，倒入鋼篩中，在陽光下暴曬，直至完全曬干為止，備用；
(2)稱取100?150g茶葉籽柏，放入粉碎機中，粉碎后過100?105目篩，得茶葉籽柏粉末，置于2L的燒杯中，并向燒杯中以20?30mL/min的速率滴加正乙烷，滴加22?25min后停止滴加，在30?45°C下浸提I?1.5h，待浸提結束，將浸提物取出移入高速離心機中，在1200?1500r/min的轉速下離心處理15?20min，去液留渣，置于烘箱中，在105?110°C下烘干至恒重；
(3)將上述烘干至恒重后的茶葉籽柏渣放入IL的燒杯中，并向其中加入500?600mL質量濃度為85%的乙醇溶液，混合均勻后，放置在超聲振蕩儀中，在超聲頻率為25?28KHz，超聲功率為100?120W下振蕩反應I?2h，待反應結束，過濾去渣，得到濾液，之后將得到的濾液放入索式抽提器中，抽提40?50min，收集濾液抽提液，隨后將得到的濾液抽提液移入蒸餾裝置，在65?75°C下加熱30?35min，蒸餾去除乙醇，得到茶葉籽柏提取液；
(4)在上述得到的茶葉籽柏提取液中加入茶葉籽柏提取物質量I?2倍的餐廳廢棄食用油，充分攪拌均勻，調節PH值為5.5?6.2后，每隔一天對上述步驟(I)曬干的茶果皮進行淋洗，淋洗3?5天，使得茶果皮變質長出霉菌，隨后再次調節淋洗液pH值為5.7?6.3，每隔3h對已變質長出霉菌的茶果皮進行淋洗，直至茶果皮表面生長出3?5cm的白色菌絲時，停止淋洗，選取質量濃度為30%的雙氧水對長出的白色菌絲進行均勻噴灑，每天噴灑3?5次，直至白色菌絲完全消失，出現黑色霉菌；
(5)將上述長出黑色霉菌的茶果皮放入攪拌器中，并向其中加入質量濃度為80%的乙醇溶液，直至完全浸沒茶果皮為止，之后啟動攪拌器，以200?250r/min的轉速對混合物進行攪拌，攪拌1?15min，使其完全混合，待攪拌結束，靜置1?12h，過濾，去渣，得濾液；
(6)將上述得到的濾液放入濃縮罐中，降低罐內壓力為1000?llOOPa，減壓濃縮至濃縮罐內濾液體積為原有體積的1/3?1/2時，停止濃縮，即可得到一種氨酸酶抑制劑。
[0007]本發明的應用方法是:將本發明制得的氨酸酶抑制劑放入化妝品乳液中，其中加入量為8?1mL化妝品乳液中加入0.5?0.8mL氨酸酶抑制劑，充分混合均勻，在每天早晚潔面后，取2?3mL混合液均勻涂抹在臉部，輕輕拍打直至完全吸收為止，堅持連續使用10?15天，可以明顯感覺皮膚變得細膩柔嫩，臉部的色斑明顯淡化，且美白程度比未添加氨酸酶抑制劑的化妝品的美白程度高70%以上，對皮膚沒有任何危害，適合大規模生產使用。
[0008]本發明的有益效果是:
(1)本發明以茶果皮和茶葉籽柏為原料，天然無毒，避免了化學合成的毒副作用強、成本較高的弊端；
(2)本發明方法獨特新穎，不僅提高了氨酸酶抑制劑的提取效率，而且增強了氨酸酶抑制劑溶解性和有效性，可廣泛進行應用，具有極好的商業前景。
【具體實施方式】
[0009]首先稱取500?100g茶果皮，放入清水中反復沖洗，去除表面殘留污物后，倒入鋼篩中，在陽光下暴曬，直至完全曬干為止，備用；然后稱取100?150g茶葉籽柏，放入粉碎機中，粉碎后過100?105目篩，得茶葉籽柏粉末，置于2L的燒杯中，并向燒杯中以20?30mL/min的速率滴加正乙烷，滴加22?25min后停止滴加，在30?45°C下浸提I?1.5h，待浸提結束，將浸提物取出移入高速離心機中，在1200?1500r/min的轉速下離心處理15?20min，去液留渣，置于烘箱中，在105?110°C下烘干至恒重;接下來將上述烘干至恒重后的茶葉籽柏渣放入IL的燒杯中，并向其中加入500?600mL質量濃度為85 %的乙醇溶液，混合均勻后，放置在超聲振蕩儀中，在超聲頻率為25?28KHz，超聲功率為100?120W下振蕩反應I?2h，待反應結束，過濾去渣，得到濾液，之后將得到的濾液放入索式抽提器中，抽提40?50min，收集濾液抽提液，隨后將得到的濾液抽提液移入蒸餾裝置，在65?75 °C下加熱30?35min，蒸餾去除乙醇，得到茶葉籽柏提取液;在上述得到的茶葉籽柏提取液中加入茶葉籽柏提取物質量I?2倍的餐廳廢棄食用油，充分攪拌均勻，調節pH值為5.5?6.2后，每隔一天對上述曬干的茶果皮進行淋洗，淋洗3?5天，使得茶果皮變質長出霉菌，隨后再次調節淋洗液pH值為5.7?6.3，每隔3h對已變質長出霉菌的茶果皮進行淋洗，直至茶果皮表面生長出3?5cm的白色菌絲時，停止淋洗，選取質量濃度為30 %的雙氧水對長出的白色菌絲進行均勻噴灑，每天噴灑3?5次，直至白色菌絲完全消失，出現黑色霉菌;隨后將上述長出黑色霉菌的茶果皮放入攪拌器中，并向其中加入質量濃度為80 %的乙醇溶液，直至完全浸沒茶果皮為止，之后啟動攪拌器，以200?250r/min的轉速對混合物進行攪拌，攪拌10?15min，使其完全混合，待攪拌結束，靜置10?12h，過濾，去渣，得濾液;最后將上述得到的濾液放入濃縮罐中，降低罐內壓力為1000?11OOPa，減壓濃縮至濃縮罐內濾液體積為原有體積的I /3?I/2時，停止濃縮，即可得到一種氨酸酶抑制劑。
[0010]實例I
首先稱取500g茶果皮，放入清水中反復沖洗，去除表面殘留污物后，倒入鋼篩中，在陽光下暴曬，直至完全曬干為止，備用;然后稱取10g茶葉籽柏，放入粉碎機中，粉碎后過100目篩，得茶葉籽柏粉末，置于2L的燒杯中，并向燒杯中以20mL/min的速率滴加正乙烷，滴加22min后停止滴加，在30°C下浸提I h，待浸提結束，將浸提物取出移入高速離心機中，在1200r/min的轉速下離心處理15min，去液留渣，置于烘箱中，在105°C下烘干至恒重;接下來將上述烘干至恒重后的茶葉籽柏渣放入IL的燒杯中，并向其中加入500mL質量濃度為85%的乙醇溶液，混合均勻后，放置在超聲振蕩儀中，在超聲頻率為25KHz，超聲功率為100W下振蕩反應lh，待反應結束，過濾去渣，得到濾液，之后將得到的濾液放入索式抽提器中，抽提40min，收集濾液抽提液，隨后將得到的濾液抽提液移入蒸餾裝置，在65 °C下加熱30min，蒸餾去除乙醇，得到茶葉籽柏提取液;在上述得到的茶葉籽柏提取液中加入茶葉籽柏提取物質量I倍的餐廳廢棄食用油，充分攪拌均勻，調節PH值為5.5后，每隔一天對上述曬干的茶果皮進行淋洗，淋洗3天，使得茶果皮變質長出霉菌，隨后再次調節淋洗液pH值為5.7，每隔3h對已變質長出霉菌的茶果皮進行淋洗，直至茶果皮表面生長出3cm的白色菌絲時，停止淋洗，選取質量濃度為30%的雙氧