miR-223-3p或miR-885-5p模擬物在制備治療急性痛風性關節炎藥物中的應用
【專利說明】m i R-223-3p或m i R-885-5p模擬物在制備治療急性痛風性關節炎藥物中的應用
技術領域
[0001]本發明涉及生物醫藥工程及痛風疾病治療技術領域，尤其涉及一種內源性非編碼小RNA模擬物的新用途，具體涉及miR-223-3p和miR-885-5p模擬物及其用途，具體為制備治療急性痛風性關節炎藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]痛風是嘌呤代謝障礙、血尿酸升高引起的單鈉尿酸鹽結晶在關節或組織內沉積所致的痛風性關節炎和慢性痛風石等疾病，與高尿酸血癥直接相關。痛風不僅能夠引起關節腫脹及組織損傷，而且可增加心腦血管、腎臟等疾病風險。HUA也與多種疾病存在密切關系，如房顫等。急性痛風性關節炎是痛風的主要臨床表現，也是原發性痛風的常見首發癥狀。流行病學研究顯示全球痛風的患病率正在逐年增加，目前在1%_2%左右。
[0003]急性痛風性關節炎作為痛風發病的一個重要階段，也是一個重要的治療階段，如果能夠及時控制其發作癥狀，減少發作次數，不但可以減輕患者的痛苦，而且能夠有效延緩疾病的進程;但目前對于急性痛風性關節炎尚缺乏有效治療。目前，臨床上治療急性痛風性關節炎的常用藥物仍是秋水仙堿、非留體類抗炎藥及糖皮質激素等。但上述藥物不能明顯緩解病情和減輕患者的痛苦，而且長期應用不良反應明顯。最近研發的靶向藥物IL-Ιβ拮抗劑(如Canakinumab、Anakinra等)雖較傳統藥物有較好效果，但其副作用亦明顯增多。因此，尋找一種安全、有效的急性痛風性關節炎治療藥物，是當今醫學界亟待解決的問題。
[0004]在急性痛風性關節炎發病機制中，NLRP3炎性體和趨化因子有重要作用;前者激活后可導致IL-Ιβ的釋放，而趨化因子可以趨化更多中性粒細胞及單核巨噬細胞到病灶部位引發炎癥級聯放大反應。見1^3炎癥體是由11^3(1111(31601^(16-13；[11(1;[1^ oligomerizat1ndomain(NOD)-1ike receptor containing pyrin domain 3)、ASC(apoptosis-associatedspeck-like protein containing CARD)和procaspase-1 組成的蛋白復合物，參與多種炎癥性疾病的發病過程。趨化因子是一類可誘導的、分泌型的前炎癥細胞因子，對白細胞及淋巴細胞起特異性趨化吸引作用。趨化因子受體通過與相應配體結合對多種炎癥細胞進行趨化和激活，引起一系列生物學效應。目前研究已發現了許多趨化因子參與了急性痛風性關節炎的發病過程，其中CCL2(Chemokine ligand 2)，亦稱為單核細胞趨化蛋白I (Monocytechemotactic protein-1，MCP_1)，是痛風性關節炎中研究最多的一種趨化因子，其在急性痛風性關節炎中的作用已被廣泛認可。
[0005]MicroRNAs(miRNAs)是一類非編碼的RNA，長約18-25nt，高度保守，主要通過與特SmRNA 3 ’ -UTR結合在轉錄后水平調節靶基因的表達，從而參與細胞分化、生長、凋亡、代謝等功能。目如已發現有5000多種mi RNAs，而且編碼表達蛋白的基因中60%以上是受各種miRNAs調控的。miRNAs在很多疾病中有重要作用，例如腫瘤、炎癥性疾病等。miRNAs具有高度的保守性和表達的時空特異性，不同的疾病會有不同的mi RNAs特異性表達譜。機體內組織、器官的代謝異常或器質性病變可能導致特定疾病狀態下某些血清miRNAs表達水平特異性地升高或降低。雖然miRNAs是當前學術界的研究熱點，其在炎癥性疾病中的關鍵調控作用也已被很多研究證實，但目前有關miRNAs在痛風發病機制中作用的研究甚少，也沒有研究對miRNAs在痛風治療中的作用進行研究分析。在miRNAs層面調控關鍵因子(如NLRP3和趨化因子等)的表達，緩解炎癥反應，極有可能為治療急性痛風性關節炎提供一種新思路和新方法。目前國內外文獻及專利數據庫均無用miRNA抑制物或模擬物治療急性痛風性關節炎的報道。
【發明內容】
[0006]本發明的目的在于克服現有技術存在的缺點，尋求設計提供一種有效治療急性痛風性關節炎的新藥物，該組合藥物以miR-223-3p和miR-885-5p模擬物為核心原料，具有治療痛風的作用，可抑制關鍵炎癥因子表達，抑制關節液及血清中IL-Ιβ等炎癥因子的分泌，從而達到治療急性痛風性關節炎的效果。
[0007]為了實現上述目的，本發明涉及的藥物以miR-223-3p和miR-885-5p模擬物二者中的一種為核心原料，以海藻酸鈉納米級微囊為載體。
[0008]本發明采用如下技術方案:
[0009]本發明的miR-223-3p或miR-885-5p模擬物在制備治療急性痛風性關節炎藥物中的應用。
[0010]所述的miR-223-3p模擬物的核苷酸序列為:5，-UGUCAGUUUGUCAAAUACCCCA-3，。
[0011 ]所述的miR-885-5p模擬物的核苷酸序列為:5，-UCCAUUACACUACCCUGCCUCU-3，。
[0012]制備該藥物的過程如下:
[0013]首先采用常規的公知工藝方法合成miR-223-3p和miR-885-5p模擬物；
[0014]然后采用常規的公知工藝方法合成海藻酸鈉納米級微囊，將上述miR-223_3p或miR-885-5p模擬物二者中的一種合成到海藻酸鈉納米級微囊中；
[0015]最后采用常規的公知工藝方法將上述miR納米微囊物進一步制成穩定的液體制劑或粉狀制劑，再加工成形即可。
[0016]本發明的積極效果如下:
[0017]本發明與現有技術相比，miR-223-3p和miR-885-5p模擬物納米微囊具有療效快、靶向性強、副作用少、安全性高等優點，是治療急性痛風性關節炎的新型靶向藥物，將極大的造福于社會大眾。
【附圖說明】
[0018]圖1關節腔內注射miR-223-3p模擬物納米微囊可明顯改變滑膜細胞中miR-223-3p的表達水平的不意圖(*，〈0.05versus the Control group；#,<0.05versus the Controlgroup)o
[0019]圖2關節腔內注射miR-885-5p模擬物納米微囊可明顯改變滑膜細胞中miR-885-5p的表達水平的不意圖(*，〈0.05versus the Control group；#,<0.05versus the Controlgroup)o
[0020]圖3miR-223-3p mimic納米微囊可有效減輕關節腫脹程度的示意圖(Blankcontrol,空白對照組;miRNA inhibitor ,miRNA抑制物組;miRNA mimic ,miRNA模擬物組；Model group,痛風性關節炎模型組;Colchicine,秋水仙堿組)。
[0021 ] 圖4 miR-223-3p模擬物和miR-885-5p模擬物納米微囊可明顯降低IL-Ιβ表達水平的示意圖。
[0022]圖5miR-223-3p模擬物和miR-885-5p模擬物納米微囊對急性痛風性關節炎大鼠滑膜組織病理學的影響的示意圖(HE染色，10 X 20倍光鏡下(A，空白對照組;B ,miRNA抑制物組;C，miR-223-3p模擬物組;D，痛風性關節炎模型組;E，秋水仙堿組;F，miR-885_5p模擬物組)。
【具體實施方式】
[0023]下面的實施例是對本發明的進一步詳細描述。
[0024]實施例l:miR-223-3p模擬物和miR-885-5p模擬物納米微囊對急性痛風性關節炎大鼠模型的治療作用
[0025]1.SD大鼠急性痛風性關節炎分組及造模方法
[0026]實驗動物為6-8周齡，SPF級SD大鼠，體重180_220g，105只，均為雄性。使用前適應性喂養I周，自由攝食飲水，飲食、飲水、活動正常即開始實驗。將105只SD雄性大鼠隨機分為7組，分別為miRNA模擬物組、miRNA抑制物組、白藜蘆醇組(200mg/kg,Sigma)、mmiRNA模擬物+白藜蘆醇組，秋水仙堿組、空白對照組、陰性對照組，每組15只大鼠，各組大鼠在相同條件下攝水飲食。
[0027]2.藥品與試劑:選用白藜蘆醇(Sigma公司，HPLC法測定純度均2 98% )，大鼠用藥劑量參照人鼠體表面積轉換換算公式;秋水仙堿組用秋水仙堿，用注射用水配制成10%溶液備用；首先采用常規的公知工藝方法合成miR-223-3p和miR-885-5p模擬物，具體miRNA核苷酸序