一種抗菌用三氯生脂質體及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥物制劑和抗菌材料技術領域，特別涉及一種載抗菌型藥物脂質體，更具體地說，本發明涉及一種抗菌用三氯生脂質體及其制備方法。
【背景技術】
[0002]三氯生，學名稱作“二氯苯氧氯酸”，化學分子式為C12H7C1302，是一種廣譜型的高效抗菌劑，對革蘭氏陽性菌、陰性菌、酵母及病毒均有殺滅和抑制作用，被廣泛應用于肥皂、牙膏等日用化學品之中。但是，三氯生是疏水性抗菌劑且在水基質中容易聚集而失去活性，從而導致生物利用率降低，限制了其應用范圍。因此，如何將疏水的三氯生均勻分散到親水性基質中，是三氯生在實際應用中面臨的難題。目前以三氯生為主要活性成分的產品多是通過添加乙二醇、甘油等有機溶劑增加其溶解性，仍難以解決提高其穩定性和持久作用的目的，而且乙二醇等添加劑也容易產生神經毒性，不利于三氯生水系抗菌產品的廣泛應用。
[0003]脂質體(liposome)是英國學者Bangham和Standish于1965年發現的，并很快被應用于藥物載體領域。脂質體由磷脂及附加劑組成，磷脂為兩性物質，其結構上有親水及親油基團，常用的有蛋黃磷脂、大豆磷脂等。構成雙分子層的類脂的親水性的首部形成膜的內外表面，而親脂性的尾端部分處于膜的中間，膜壁厚度約為5?7nm，而囊的直徑一般在25?50nm之間。脂質體的這種結構使其能夠攜帶各種親水或疏水性物質，特別是可以用于裝載疏水性藥物以提高藥物在水體系中的分散性和活性。同時，脂質體與生物膜結構相似，能與細胞膜有較強的親和力，可以增強活性物的通透能力，提高療效，通過改變脂質體的大小甚至可以控制其在組織內的分布。因此，將水不溶性抗菌藥物三氯生包封成脂質體，可以極大地提高其水溶液中的有效濃度，延長作用時間，有望使三氯生水性抗菌產品的應用得到廣泛擴展。
【發明內容】
[0004]本發明要解決的技術問題是針對目前抗菌劑三氯生自身存在的難溶性，不利于其抗菌產品的廣泛使用，提供一種產品質量高，粒徑均勻，產品穩定性好，載藥量高的抗菌用三氯生脂質體材料，同時提供一種方法簡單，易于生成，成本較低的制備該抗菌用三氯生材料的方法。
[0005]為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是:
[0006]本發明所述的抗菌用三氯生脂質體，它的組分包括三氯生、磷脂、膽固醇，各組分的重量份配比為三氯生6.2?15.3份、磷脂78.5?82.5份、膽固醇4.7?11.5份。作為優選，所述各組分的重量份配比為三氯生9.2份、磷脂82.5份、膽固醇8.3份。
[0007]在所述三氯生脂質體中，三氯生為抗菌藥物活性成分，磷脂和膽固醇為構成脂質體膜結構的基本成分。
[0008]本發明所述的三氯生脂質體屬于小單室脂質體，是以磷脂和膽固醇為膜材構成單室的雙層脂質膜的封閉囊泡，膽固醇分布在脂質膜雙分子層的內部，三氯生同樣被包埋在脂質膜的雙分子層中間。
[0009]該脂質體的抗菌藥物活性成分三氯生包埋在脂質體中，有效提高了三氯生在水中的有效濃度，并且結合脂質體與細胞膜的較強親和力優勢，提高三氯生的生物利用效率。當脂質體在水溶液中與細菌接觸時，脂質體膜可以與細菌相結合，持續釋放抗菌活性成分三氯生，起到殺死細菌的效果，因此該三氯生脂質體具有較好的抗菌性能。
[0010]作為對本發明的限定，所述磷脂為天然蛋黃磷脂、天然大豆磷脂或氫化大豆磷脂。優選地，考慮到脂質體的穩定性，所述磷脂為氫化大豆磷脂。氫化大豆磷脂由天然的大豆磷脂經化學加氫而得，因此具有更高的相變溫度和穩定性，因此制得的脂質體也更加穩定。
[0011]本發明所述抗菌用三氯生脂質體的制備方法，包括如下步驟:
[0012](1)按比例分別稱取三氯生、磷脂、膽固醇，充分溶解于乙醇中配制成混合溶液；
[0013]在步驟(1)中所述的混合溶液中，磷脂的濃度為1.25?5mg/mL。當磷脂的濃度小于1.25mg/mL時，磷脂含量低導致脂質體的藥物裝載能力低；當磷脂濃度大于5mg/mL時，所得脂質體形態不好、穩定性差。優選地，混合溶液中磷脂的濃度為2.5mg/mL。
[0014]在步驟(1)中所述的混合溶液中，磷脂、膽固醇與三氯生的重量份配比為1:0.06?
0.14:0.1?0.4。當膽固醇比例過低時，會導致脂質雙層的流動性降低，影響脂質雙分子層的穩定性；當膽固醇比例過高時，膽固醇會競爭性地結合磷脂的親脂性區域，導致脂質體的載藥率降低，并會使磷脂的脂肪酸鏈僵化，同樣影響脂質體膜的穩定性。當三氯生的比例過低時，脂質體的載藥率不高，藥物有效濃度低，實用意義不大；當三氯生的濃度過高時，所得脂質體的親水性下降，其水溶液的穩定性較差。優選地，混合溶液中磷脂、膽固醇與三氯生的質量配比為1:0.1:0.2。
[0015](2)將步驟(1)中所述的磷脂、膽固醇、三氯生的混合乙醇溶液置于旋轉蒸發儀上，緩慢除去乙醇，在瓶底形成乳白色薄膜；
[0016]所述旋轉蒸發儀的旋轉速度為60?100轉/min，旋轉時間為30min?lh，水浴溫度為40?60°C。當旋轉蒸發儀的旋轉速度低于60轉/min時，形成的脂質膜較厚；當旋轉速度高于100轉/min時，形成的脂質膜不均勻，均影響生成脂質體的均勻性。水浴溫度低于40°C時，達不到氫化大豆磷脂的相變溫度，無法成膜;水溶溫度高于60°C時，乙醇溶液容易暴沸影響成膜。優選地，所述旋轉蒸發儀的旋轉速度為80轉/min，旋轉時間為45min，水浴溫度55°C。
[0017](3)將純水或磷酸鈉緩沖溶液加入到燒瓶中，在搖床上振蕩，得到脂質體混懸液；
[0018]磷酸鈉緩沖溶液的濃度為0.01mol/L，pH為7.4，作為水合介質。
[0019]所述步驟(3)中的振蕩時間為25?40min，可以使薄膜充分溶脹水合。脂質發生溶脹并被一層層洗脫，大多數形成了多層脂質體。優選地，所述振蕩時間為30min。
[0020](4)對步驟(3)中得到的脂質體混懸液在冰水浴中進行探頭超聲，形成透明液體；過濾，收集濾液，得到抗菌用三氯生脂質體的水溶液。
[0021 ] 所述探頭超聲的方法為:設置功率為80?120W;采用循環超聲，每次超聲0.6?Is，間隔0.6?0.8s，超聲時間10?30min，在冰水浴中進行。本發明采用探頭式超聲方法，將粒徑較大的多層脂質體進一步分散為粒徑較小的單層脂質體，使得到的脂質體粒徑較小且較均一，通過冰水浴的降溫防止超聲過程中熱量聚集導致磷脂氧化。優選地，所述探頭超聲的方法為:設置功率為100W;采用循環超聲，每次超聲0.8s，間隔0.8s，超聲時間20min。
[0022]所述步驟(4)中采用0.22μπι孔徑的一次性無菌針式過濾器過濾除菌。既可以控制粒徑，提高均一性，又可以通過過濾去除溶液中的細菌，達到除菌的效果，便于實際應用。
[0023]通過紫外可見吸收光譜計算可以得到，本發明得到的三氯生脂質體中，三氯生的有效裝載率6.2?15.3%，在水溶液中三氯生的有效濃度可以達到0.12?0.3mg/mL，有效改善了三氯生的水溶性，進而可以使其在水系抗菌產品中的應用范圍更加廣泛。
[0024]將本發明得到的抗菌用三氯生脂質體用于制備深層抗菌型皮膚藥劑，具有抗菌作用的織物類醫療器械或其他產品以及在水性抗菌材料中的應用。
[0025]其中優選地，上述三氯生脂質體可以用于針對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌等多種抗菌型藥劑、織物和水性抗菌材料中的應用。
[0026]采用上述技術方案后，本發明得到的有益效果是:本發明所述脂質體采用三氯生、磷脂、膽固醇為原料，并調節各原料的重量份配比，將抗菌活性成分三氯生包埋在脂質體中，藥物產品質量高，粒徑均勻，穩定性好，載藥量高，有效提高了藥物在水中的有效濃度，具有細胞膜親和性，可通過融合進入細胞內，釋放活性藥物，提高了藥物的抗菌效果。同時，本發明所述三氯生脂質體的制備方法提高了產品質量，載藥量大，且方法簡單，易于生成，成本較低。
【附圖說明】
[0027]圖1為三氯生脂質體的結構示意圖，磷脂與膽固醇組成脂質體雙分子膜結構，三氯生分子被包埋在磷脂的雙分子層中間。1是整體結構模型圖，2表示磷脂的疏水鏈，3表示磷脂的親水端，4表示膽固醇，5表示三氯生。
[0028]圖2為通過實施例3制備的三氯生脂質體的粒徑分布圖，脂質體具有較均一的尺寸，平均粒徑為52nm，為小單層脂質體。
[0029]圖3為通過實施例3制備的三氯生脂質體溶液的紫外可見吸收光譜圖，由三氯生在280nm位置處的特征吸收峰可通過其標準曲線計算得三氯生的裝載率為9.2%。
[0030]圖4為通過實施例3制備的三氯生脂質體的抗菌效果:2_a為對照組；2-b為三氯生脂質體組，菌液中三氯生有效濃度為10yg/mL。測試細菌為大腸桿菌。
【具體實施方式】
[0031]為使本發明的上述目的、特征和優點能夠更加明顯易懂，下面結合本發明的【具體實施方式】做詳細的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細節以便于充分理解本發明。但是本發明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實施，本領域技術人員可以在不違背本發明內涵的情況下做類似改進，因此本發明不受下面公開的具體實施的限制。
[0032]下面為具體實施例部分。
[0033]實施例1
[0034]按比例分別稱取天然蛋黃磷脂、膽固醇、三氯生，加入一定量乙醇中，充分溶解得到混合乙醇溶液，其中磷脂濃度為3.5mg/mL，磷脂、膽固醇與三氯生的質量配比為1:0.1:
0.13ο
[0035]將上述磷脂、膽固醇