山蠟梅葉片在制備抑制黑色素瘤細胞b16細胞增殖藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于中藥技術領域，具體涉及一種山蠟梅葉片在制備抑制黑色素瘤細胞 B16細胞增殖藥物中的應用及山蠟梅葉片的制備方法。
【背景技術】
[0002] 山蠟梅葉片標準號WS-11310(ZD-1310)-2002,記載于國家中成藥標準匯編內科內 科肺系(一)分冊。由山蠟梅葉1500g作為原料藥制成，具有辛涼解表，清熱解毒的功效。用于 風熱感冒，發熱，惡寒，咽痛。
[0003] 現有技術中，尚未有山蠟梅葉片在在制備抑制小鼠黑色素瘤細胞B16細胞增殖藥 物中的應用的報道，也未見有山蠟梅葉片提取制備方面采用超臨界萃取的報道，而水煎煮、 水蒸氣蒸餾法提取揮發油的方法，工藝粗糙、落后，雜質多，導致患者用量過大，不方便服 用，嚴重影響了本品在臨床上應用。
【發明內容】
[0004] 發明目的：本發明的目的在于提供一種山蠟梅葉片在制備抑制黑色素瘤細胞B16 細胞增殖藥物中的應用。
[0005] 本發明的另一個目的在于提供一種山蠟梅葉片的制備方法。
[0006] 本發明的目的是通過如下的方案實現的： 山蠟梅葉片在制備抑制黑色素瘤細胞B16細胞增殖藥物中的應用，所述山蠟梅葉片由 山錯梅葉1500g作為原料藥制成，所述山錯梅葉片的制備方法由下列步驟組成：取山錯梅 葉，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，C〇2流量l_3ml/g生藥· min，萃取時間700-800min，得 超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成500片，每片重 0 · 35g〇
[0007] 優選的，上述的山蠟梅葉片在制備抑制黑色素瘤細胞B16細胞增殖藥物中的應用， 所述山蠟梅葉片的制備方法由下列步驟組成:取山蠟梅葉，加入到CO 2超臨界萃取器中，乙 醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力25MPa，溫度40°C，C0 2流 量2ml/g生藥· min，萃取時間750min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇 制顆粒，干燥，壓片，制成500片，每片重0.35g。
[0008] 現有技術中，山蠟梅葉片口服，一次6~7片，一日3次。山蠟梅葉片服藥量大。采用 本發明方法制備成的山蠟梅葉片每片重〇.35g，每次僅需3片，一日服用3次。在具有更多活 性成分的條件下大大減少了服用量。此結論可以通過下述試驗證明。
[0009] 試驗一、不同方法制備的山蠟梅葉片中槲皮素和山柰素含量的比較 1、儀器及試藥本發明山蠟梅葉片:按實施例1方法制備，使用1500g原料藥，經提取制成 500片，每片重0.35g。原山蠟梅葉片，按照WS-11310 (ZD-1310) -2002標準方法制備。 Agilentl200高效液相色譜儀;METTLER AE240電子分析天平;槲皮素和山柰素對照品（中國 藥品生物制品檢定所）。
[0010] 2、方法 照高效液相色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定。
[0011]色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.5%磷 酸溶液(45: 55)為流動相;檢測波長為365nm。理論板數分別按槲皮素、山柰素峰計算均應不 低于1500。
[0012]對照品溶液的制備精密稱取槲皮素、山柰素對照品適量，分別加甲醇制成每1ml 含6μ g、8μ g的溶液，即得。
[0013 ]供試品溶液的制備取本發明山蠟梅葉片10片，精密稱定，研細，取0.60g，精密稱 定，加甲醇加熱回流2次(50ml、50ml )，每次1小時，濾過，合并濾液，殘渣加甲醇適量洗滌，濾 過，洗液并入濾液中，蒸干，殘渣加水30ml使溶解，用冰醋酸調節pH值至3~4,加醋酸乙酯振 搖提取5次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，轉移至IOml量瓶中， 加甲醇至刻度，搖勻，即得。
[0014] 對照產品供試品溶液的制備取對照的山蠟梅葉片20片，精密稱定，研細，取 1.2g，精密稱定，加甲醇加熱回流2次(50ml、50ml)，每次1小時，濾過，合并濾液，殘渣加甲醇 適量洗滌，濾過，洗液并入濾液中，蒸干，殘渣加水30ml使溶解，用冰醋酸調節pH值至3~4， 加醋酸乙酯振搖提取5次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，轉移 至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
[0015] 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液、對照產品供試品溶液各5μ1，注 入液相色譜儀，測定，即得。
[0016] 3、結果 結果表明，本發明山蠟梅葉片中槲皮素和山柰素的含量為220-362^^ /片;而原山蠟梅 葉片中槲皮素和山柰素的含量為36μ8 /粒，每次服用量3片的槲皮素和山柰素含量為原片 劑6粒含量的3-5倍，在服用量減少的情況下，槲皮素和山柰素含量有很大提高。
[0017] 上述研究表明，采用本發明制備方法制備的山蠟梅葉片，有效成分含量遠遠高于 WS-11310 (ZD-1310) -2002標準記載的方法制備的山蠟梅葉片。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合具體實施例對本發明作更進一步的說明，以便本領域的技術人員更了解 本發明，但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發明上述 內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。
[0019] 實施例1 取山蠟梅葉1500g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑 的體積百分比為5%，萃取壓力25MPa，溫度40°C，C02流量2ml/g生藥· min，萃取時間750min， 得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成500片，每片 重0.35g。
[0020] 經檢測，成品中槲皮素和山柰素的含量為362μ8 /片。
[0021] 實施例2 取山蠟梅葉1500g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑 的體積百分比為4%，萃取壓力15MPa，溫度30°C，CO2流量lml/g生藥· min，萃取時間800min， 得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成500片，每片 重0.35g。
[0022]經檢測，成品中槲皮素和山柰素的含量為22(?^ /片。
[0023] 實施例3 取山蠟梅葉1500g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑 的體積百分比為6%，萃取壓力30MPa，溫度60°C，C02流量3ml/g生藥