脆弱擬桿菌在抗水產(chǎn)病原菌中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物技術領域，特別是脆弱擬桿菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應用，具體為脆 弱擬桿菌在抗水產(chǎn)病原菌中的應用。
【背景技術】
[0002] 隨著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展。工廠化、高密度養(yǎng)殖造成的病害問題日益突出。 每年因水產(chǎn)病害造成的損失多達數(shù)百億元。而治療水產(chǎn)動物的疾病，常規(guī)仍廣泛采用化學 治療法，抗生素的濫用使水體細菌產(chǎn)生抗藥性及藥物殘留，間接危害了人類的健康。因此， 越來越多的專家開始關注利用自然環(huán)境中有益微生物對水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境的生物修復，以此來 取代抗生素的使用，這樣不僅節(jié)約了費用，還不會產(chǎn)生二次污染，而且還能將剩余餌料、排 泄物及其他有害物質分解轉化，使水質保持良好的狀態(tài)，使養(yǎng)殖生物處于健康水平。
[0003] 因此，有益微生物對水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境的生物修復技術的研究和開發(fā)具有極其廣闊的 前景，在水產(chǎn)養(yǎng)殖領域的應用也會越來越廣泛，同時帶來更大的經(jīng)濟效益和社會效益。隨著 規(guī)?；⒓s化水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，水產(chǎn)養(yǎng)殖病害頻繁發(fā)生，為了控制疾病，一些抗生 素藥物在水產(chǎn)養(yǎng)殖中被廣泛使用和濫用，不僅造成環(huán)境中藥物殘留、細菌耐藥性增加，而且 由于水體環(huán)境的流動性，耐藥基因更容易水平轉移，造成更多耐藥株的出現(xiàn)。為了應對耐藥 性，養(yǎng)殖中不得不加大用量并不斷更換藥物種類，進而造成惡性循環(huán)。另一方面藥物的大量 使用，藥物在水產(chǎn)動物體內(nèi)殘留造成的食品安全問題也日益引起關注。為了應對這些問題， 采用替代的生物防治措施成為當前水產(chǎn)養(yǎng)殖的熱點，其中益生菌的應用在水產(chǎn)養(yǎng)殖中越來 越受到重視，它們不僅具有抑制細菌性病原的作用，還具有促進水產(chǎn)養(yǎng)殖動物生長、改善免 疫等作用。
[0004] 益生菌（Probiotics)是一類對宿主有益的活性微生物，是定植于人體或動物腸 道、生殖系統(tǒng)內(nèi)，能產(chǎn)生確切健康功效從而改善宿主微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用的活性有益 微生物的總稱。其主要通過改善宿主腸道微生物菌群的平衡而發(fā)揮作用。它具有改善腸道 菌群結構，抑制病原菌，生成營養(yǎng)物質，提高機體免疫力，消除致癌因子，降低膽固醇和血 壓，改善乳糖消化性等功能。FulIer于1989年首次給益生菌下定義："益生菌是通過改善腸 道菌群平衡而對宿主健康產(chǎn)生有益作用的活菌添加劑"。
[0005] 人類生活中早已廣泛應用的益生菌包括醋酸梭菌、乳酸菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿 菌、放線菌、酵母菌等。隨著微生物防害方法的發(fā)展，特別是益生菌在取代傳統(tǒng)抗生素的使 用的前景，使得益生菌及其制劑越來越多地被應用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。目前水產(chǎn)養(yǎng)殖類的益生 菌及其制劑主要分為兩類：
[0006] 1、單一制劑，如酵母菌、光合細菌、乳酸菌、乳酸桿菌、乳酸乳球菌、熒光假單胞菌、 芽抱桿菌等；
[0007] 2、復合制劑，如美菌方、復合型活性生物凈水劑等，主要有硝化細菌和反硝化細 菌、枯草桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌、假單胞菌、糞鏈球菌、酵母菌等菌株組成。該類益生菌群 由定向篩選的有益菌株配合而成，能夠改善水產(chǎn)動物體內(nèi)的微生態(tài)平衡，刺激機體的免疫 系統(tǒng)，拮抗致病微生物，降解有機廢物，從而減少疾病發(fā)生，促進水產(chǎn)動物生長發(fā)育，改善養(yǎng) 殖生態(tài)環(huán)境。
[0008] 大量研究與實踐證明，益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖的應用中起到了良好的效果，如從蝦等 動物體內(nèi)分離得到的多株益生菌，從而制成的微生物復合菌液可以改良底質，穩(wěn)定水質，是 保證養(yǎng)殖成功的重要技術。由于沒有再施用化學藥劑，因而生產(chǎn)出來的水產(chǎn)品是比較完全 和無污染的綠色食品，并可避免水產(chǎn)品產(chǎn)生抗藥性。多年連續(xù)使用菌液的水體必定能形成 有效微生物菌群的生態(tài)優(yōu)勢，達到水環(huán)境的良性循環(huán)，保證對水產(chǎn)品養(yǎng)殖的持續(xù)發(fā)展。
[0009] 脆弱擬桿菌是一種專性厭氧細菌，依培養(yǎng)基的不同和生長階段的不同，菌體形態(tài) 呈現(xiàn)多形性，一般條件下菌體為桿狀、兩端鈍圓、著色深，中間色淺且不均勻，有莢膜、無芽 胞、無動力，有些有空泡，菌體長短不一。脆弱擬桿菌作為人及動物腸道正常菌群的一部分， 主要存在于結腸中。此外，呼吸道、胃腸道及泌尿生殖道粘膜也可定植生長。脆弱擬桿菌作 為一種條件致病菌，當宿主粘膜受損時，可侵犯粘膜下層，引起感染，也可經(jīng)血液流動，引起 身體其它器官，如腸道、腹腔、肝、肺、腦組織、軟組織、骨髓等的化膿性感染并伴發(fā)膿腫。
[0010] 本領域已經(jīng)對脆弱擬桿菌進行了大量研究。張季階從發(fā)育良好的嬰兒或低齡動 物腸道中分離出一種擬桿菌菌株BF839,將其制成活菌制劑后能夠增加兒童生長發(fā)育，對防 治急慢性腸炎、菌群失調(diào)、上呼吸道感染和神經(jīng)官能癥等較好療效（參見公開號為 CN1056314A的中國發(fā)明專利申請；及:張季階，等.脆弱擬桿菌(BF839)菌液的臨床應用研 究.中國生物制品學雜志，1995年，第8卷，第2期，第63-65頁）。智發(fā)朝等在2012年從嬰兒糞 便中分離出一種具有益生菌特性的脆弱擬桿菌菌株(保藏號為CGMCC NO.7280)，可用于治 療炎癥性腸病、腹瀉等（參見公開號為CN103146620A，CN103142658A及CN103156888A的中國 發(fā)明專利申請）；此外，經(jīng)對該菌株的進一步鑒定，發(fā)現(xiàn)該菌株(稱為Bd312)在細菌形態(tài)、培 養(yǎng)特性、生理生化反應結果與脆弱擬桿菌相似，經(jīng)BLASTN序列比對，所分離菌株與脆弱擬桿 菌標準株ATCC25285同源性達99%，藥敏實驗提示，菌株Bd312對頭孢拉定、阿莫西林、慶大 霉素、磺胺甲嗯唑、甲氧芐啶不敏感，急慢性毒性試驗提示無毒性(參見:劉洋洋，等.健康嬰 兒體內(nèi)的無毒脆弱擬桿菌的分離及鑒定.中華醫(yī)學雜志，2014年，第94卷，第30期，第2372-2374頁）。但是目前尚無脆弱擬桿菌應用于水產(chǎn)病原菌防治的報道。
[0011] 市場上水產(chǎn)用益生菌產(chǎn)品，名目繁多，層出無窮，但是概括起來存在以下問題：
[0012] (1)水產(chǎn)益生菌產(chǎn)品以枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌為常見，少見 其它類型細菌，有待增加不同種屬益生菌；
[0013] (2)常見水產(chǎn)益生菌產(chǎn)品中菌株抑菌效果不明確，而抑菌效果是評價益生菌的核 心指標。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0014] 本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種脆弱擬桿菌在抗水產(chǎn)病原菌中的應用，包 括脆弱擬桿菌在制備用于水產(chǎn)病原菌的抗菌藥物中的應用及含有該脆弱擬桿菌的藥物組 合物及飼料添加劑。
[0015] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種脆弱擬桿菌在制備用于水產(chǎn)病原菌的抗菌 藥物中的應用。
[0016] 上述的應用，其中，所述脆弱擬桿菌包括脆弱擬桿菌活菌體、滅活脆弱擬桿菌、脆 弱擬桿菌裂解物和/或脆弱擬桿菌培養(yǎng)上清液。
[0017] 上述的應用，其中，所述水產(chǎn)病原菌為副溶血弧菌、燦爛弧菌、哈氏弧菌、鰻弧菌或 銅綠假單胞菌。
[0018] 上述的應用，其中，所述脆弱擬桿菌為保藏號為CGMCC No. 10685的脆弱擬桿菌ZY-312、保藏號為CGMCC從).7280的脆弱擬桿菌8(1312或脆弱擬桿菌標準株4了〇：25285。
[0019] 為了更好地實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明還提供了一種用于抗水產(chǎn)病原菌的藥物組合 物，其中，所述藥物組合物含有藥學有效劑量的脆弱擬桿菌。
[0020] 上述的藥物組合物，其中，所述脆弱擬桿菌包括脆弱擬桿菌活菌體、滅活脆弱擬桿 菌、脆弱擬桿菌裂解物和/或脆弱擬桿菌培養(yǎng)上清液。
[0021] 上述的藥物組合物，其中，所述脆弱擬桿菌為保藏號為CGMCC No. 10685的脆弱擬 桿菌ZY-312、保藏號為CGMCC從).7280的脆弱擬桿菌8(1312或脆弱擬桿菌標準株4了〇：25285。
[0022] 為了更好地實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明還提供了一種用于抗水產(chǎn)病原菌的飼料添加 劑，其中，所述飼料添加劑含有脆弱擬桿菌。
[0023]上述的飼料添加劑，其中，所述脆弱擬桿菌包括脆弱擬桿菌活菌體、滅活脆弱擬桿 菌、脆弱擬桿菌裂解物和/或脆弱擬桿菌培養(yǎng)上清液。
[0024]上述的飼料添加劑，其中，所述脆弱擬桿菌為保藏號為CGMCC No. 10685的脆弱擬 桿菌ZY-312、保藏號為CGMCC從).7280的脆弱擬桿菌8(1312或脆弱擬桿菌標準株4了〇：25285。 [0025]本發(fā)明的技術效果在于：
[0026]本發(fā)明通過在多種疾病模型中對脆弱擬桿菌的作用進行檢測和鑒定，證明脆弱擬 桿菌對水產(chǎn)病原菌具有較強的抑制效果。脆弱擬桿菌對水產(chǎn)病原菌如副溶血弧菌、燦爛弧 菌、哈氏弧菌、鰻弧菌或銅綠假單胞菌均具有較強的抑制效果，不產(chǎn)生耐藥性，且安全無毒。 本發(fā)明為抑制水產(chǎn)病原菌提供了新的選擇，具有廣闊的應用前景。
[0027] 以下結合附圖和具體實施例對本發(fā)明進行詳細描述，但不作為對本發(fā)明的限定。
【附圖說明】
[0028] 圖1為本發(fā)明一實施例的脆弱擬桿菌形態(tài)圖（油鏡、1000X )。
[0029] 脆弱擬桿菌(Bacteroides fragiIis)ZY_312于2015年4月2日保藏于中國微生物 菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，其保藏編號為CGMCC No. 10685，保藏地址為 北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。
[0030] 脆弱擬桿菌（Bacteroides fragiIis)Bd312于2013年3月12日保藏于中國微生物 菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，其保藏編號為CGMCC NO. 7280,保藏地址為 北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。
【具體實施方式】
[0031] 下面結合附圖對本發(fā)明的結構原理和工作原理作具體的描述：
[0032] 參見圖1，圖1為本發(fā)明一實施例的脆弱擬桿菌形態(tài)圖（油鏡、1000 X )。本發(fā)明提供 一種脆弱擬桿菌在制備用于水產(chǎn)病原菌的抗菌藥物中的應用。其中，所述脆弱擬桿菌包括 脆弱擬桿菌活菌體、滅活脆弱擬桿菌、脆弱擬桿菌裂解物和/或脆弱擬桿菌培養(yǎng)上清液等。 所述水產(chǎn)病原菌為副溶血弧菌、燦爛弧菌、哈氏弧菌、鰻弧菌或銅綠假單胞菌。本實施例中， 所述脆弱擬桿菌優(yōu)選為保藏號為CGMCC No . 10685的脆弱擬桿菌ZY-312，也可為保藏號為 CGMCC腸.7280的脆弱擬桿菌8(1312或脆弱擬桿菌標準株41'(^25 285。脆弱擬桿菌 (Bacteroides fragiIis)ΖΥ_312于2015年4月2日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中 心(CGMCC)，其保藏編號為CGMCC No. 10685,保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。 脆弱擬桿菌(Bacteroides fragilis)Bd312于2013年3月12日保藏于中國普通微生物菌種 保藏管理中心(CGMCC)，其保藏編號為CGMCC NO. 7280，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1 號院3號。
[0033] 本發(fā)明還提供了一種用于抗水產(chǎn)病原菌的藥物組合物