一種奧沙利鉑和伊立替康類藥物共載脂質體及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及脂質體藥劑技術領域，尤其涉及一種奧沙利鉑和伊立替康類藥物共載 脂質體及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 結直腸癌發病率在各種腫瘤疾病中位列第三位，傳統化學治療藥物仍是目前臨床 結直腸癌治療中不可或缺的手段。由于單一化療藥已不能滿足治療要求，常需采用聯合用 藥或多重治療的方式。其中，奧沙利鉑與鹽酸伊立替康的聯用方案于2011年起被增加至美 國NCCN(National Comprehensive Cancer Network，美國國家癌癥綜合網絡）《結腸癌臨床 治療指南》中，推薦用于治療首次化療失敗后進展性的轉移性結直腸癌。因此，選擇奧沙利 鉑與鹽酸伊立替康兩種藥物的組合，是基于臨床推薦的聯用方案，有著充分的臨床證據支 持，具有特定臨床意義。
[0003] 奧沙利鉑是繼順鉑、卡鉑之后的第三代鉑類抗癌藥，藥物進入細胞后，鉑原子可與 DNA形成Pt-DNA結合物，導致DNA修復和復制受阻，從而誘導細胞凋亡;鹽酸伊立替康是水溶 性的喜樹堿類細胞毒性藥物，作用于DNA拓撲異構酶I，能夠與Topo-DNA復合物共價結合形 成Topo-藥物-DNA復合物，抑制DNA重排，導致DNA鏈斷裂，從而誘導細胞凋亡。兩種藥物聯用 時，能夠以不同作用機制同時作用于細胞DNA，從而產生協同治療效果。
[0004] 但是，奧沙利鉑和鹽酸伊立替康作為傳統化療藥物，均存在一系列的缺點，如:低 的藥物耐受，非特異性，多藥耐藥，非期望的藥代動力學和生物分布，在殺死腫瘤細胞時對 正常組織也會造成嚴重損害，而二者的聯合使用則會進一步加劇對機體的毒副作用。因此， 設計發明新型制劑，使二者聯用在提高治療效果同時降低對機體的毒副作用，顯得尤為重 要。
[0005] 另一方面，研究已證明兩種藥物合適的比例對疾病的治療中起著至關重要的作 用。兩種藥物在不同聯用比例下對疾病可能產生不同的治療效果，如協同、增強甚至是拮抗 作用，影響治療效果。在臨床上使用奧沙利鉑與鹽酸伊立替康聯合治療結直腸癌的傳統方 法中，只是簡單的將兩種藥物聯合使用，但不能控制藥物在體內的釋放，由于每種藥物的藥 代動力學不同，而不同藥物比例對疾病的治療可能起到協同、相加甚至是拮抗作用，必然會 產生治療的不確定性。因此，如何控制兩種藥物在治療部位的比例，使兩種藥物發揮最大的 協同治療效用，具有重要意義。
[0006] 納米載體遞送抗腫瘤藥物能夠有效提高抗腫瘤效果，降低毒副作用等。目前已有 多種載藥納米粒上市或進入臨床試驗階段。其中，脂質體作為新型藥物傳遞系統，具有靶 向、高效和低毒等優點；脂質體內部具有中空的親水核及磷脂雙分子層圍成的疏水殼，可分 別負載親水性及疏水性藥物，因此在共遞送不同藥物時具有獨特的優勢，被認為是最好的 共載載體之一，具有廣闊的應用前景。
[0007] 現有技術中國專利《一種含有抗腫瘤藥物的復合脂質體及其制備方法和用途》（申 請號：201110003570.2)，公開了一種含有抗腫瘤藥物的復合脂質體及其制備方法，旨在實 現脂質體在腫瘤細胞的靶向遞送和細胞穿膜，文中雖然提及該復合脂質體可用于包載抗腫 瘤藥物的一種或幾種，但是必須制備成為復合脂質體才能達到理想的抗腫瘤效果，并且其 方法仍然是針對單一藥物所設計，若包載兩種藥物時，只是將不同藥物混合視為一種混合 藥物，而由于不同藥物的理化性質不同，該方法必然導致不同藥物的包載含量存在差異，因 此無法控制兩種藥物比例。
[0008] 現有技術中國專利《氯喹類藥物和紫杉醇類藥物共載脂質體及其制備方法》（申請 號:201210336602.5)公開了一種氯喹類藥物和紫杉醇類藥物共載脂質體及其制備方法，該 發明采用薄膜分散法結合PH梯度法將兩者順序裝載入脂質體，制備氯喹類藥物和紫杉醇類 藥物共載脂質體。該技術采用PH梯度法包載氯喹藥物，對pH值要求較嚴格，需要加入緩沖鹽 調節PH值(最適宜pH值為7.0的中性條件）；此外，該發明僅控制了兩藥的投料比，而對包載 后的藥物比例未予控制，忽略了藥物比例對治療效果的影響。
[0009] 現有技術中國專利《伊立替康類藥物和氯喹類藥物組合及其共載脂質體和制備》 (【申請號】201510314990.0)，公開了一種伊立替康類藥物和氯喹類藥物組合及其共載脂質 體和制備。發明人首先制備空白脂質體，然后將兩者藥物混合同時加入空白脂質體中孵育 進行載藥。該方法雖然在投藥時可控制加入的比例，但由于不同藥物的包封率不同，同樣無 法控制包裹后藥物的比例，文中也未對脂質體中包裹兩種藥物的含量予以說明。
【發明內容】
[0010]針對上述現有技術，本發明提供了一種奧沙利鉑和伊立替康類藥物共載脂質體， 該脂質體能夠共遞送兩種藥物、控制兩種藥物在體內釋放、提高轉移性結直腸癌的治療效 果、降低毒副作用。本發明還提供了該脂質體的制備方法。
[0011] 本發明是通過以下技術方案實現的：
[0012] -種奧沙利鉑和伊立替康類藥物共載脂質體，包括以下組分:藥物，磷脂、膽固醇、 無機鹽溶液;其中，所述藥物為奧沙利鉑和伊立替康類藥物，奧沙利鉑與伊立替康類藥物質 量比為1:1~5,奧沙利鉑與磷脂質量比為1:5~20,磷脂與膽固醇質量比為2~8:1。
[0013]脂質體中奧沙利鉑濃度0.4~1.5mg/ml，藥物包封率在5~40%;伊立替康類藥物 濃度0.4~7.5mg/ml，包封率在75~95%。所述的奧沙利鉑和伊立替康類藥物共載脂質體的 粒徑范圍在150~250nm。
[0014] 優選的，所述伊立替康類藥物為伊立替康、伊立替康與酸所成的鹽中的一種或多 種。所述的伊立替康與酸所成的鹽可選用鹽酸伊立替康。
[0015] 優選的，所述磷脂可選用天然磷脂如：大豆磷脂、蛋黃磷脂、氫化大豆磷脂的一種 或幾種；也可選用合成磷脂如：二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、磷 脂酰絲氨酸(DOPS)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二棕 櫚酰磷脂酰甘油酯(DPPG)、（2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(DOTAP)等;還可選用在磷脂中加 入部分DSPE-PEG得到具有長循環功能的脂質體。
[0016] 優選的，所述無機鹽溶液為硫酸銨溶液，其濃度為0.1~0.3mol/L。硫酸銨濃度對 脂質體的包封影響較大，經過大量實驗驗證與分析，本發明選取上述濃度，使得奧沙利鉑和 伊立替康類藥物的兩者的包封率都相對較高，尤其是伊立替康類藥物。
[0017] 所述奧沙利鉑和伊立替康類藥物共載脂質體通過次序載藥方式制備，包括如下步 驟：
[0018] (I)首先制備含奧沙利鉑脂質體：
[0019] (2)測定奧沙利鉑藥物含量后，根據奧沙利鉑與伊立替康類藥物設計比例，加入伊 立替康類藥物溶液水化后，過濾膜，即得奧沙利鉑和伊立替康類藥物共載脂質體。
[0020] 步驟(1)中，通過下述A至C任何一種或多種方法制備含奧沙利鉑脂質體：
[0021] A.根據配方選用磷脂、膽固醇溶解于無水乙醇中，奧沙利鉑、硫酸銨溶解于水性介 質中，攪拌下將乙醇滴入水相中并減壓除去無水乙醇，分離出游離藥物后得到含奧沙利鉑 脂質體。
[0022] B.根據配方選用磷脂、膽固醇溶解于有機溶劑中，并減壓除去有機溶劑形成均勻 薄膜，奧沙利鉑、硫酸銨溶解于水性介質中，二者混合水化，分離出游離藥物后得到含奧沙 利鉬脂質體。
[0023] C.根據配方選用磷脂、膽固醇溶解于有機溶劑中，奧沙利鉑、硫酸銨溶解于水性介 質中，二者混合超聲形成反相膠束后，減壓除去有機溶劑形成凝膠，加入水性介質水化，分 離出游離藥物后得到含奧沙利鉑脂質體。
[0024]步驟(1)中，水性介質是質量分數為5%葡萄糖溶液、PBS溶液或純水。
[0025]步驟（I)A制備方法中，奧沙利鉑溶于水性介質后的濃度為1~12mg/ml，無水乙醇 與水相體積比為1:1~5,硫酸銨溶解于水性介質后的濃度為0.1~0.3mol/L;分離出游離藥 物的方法可采用透析法。
[0026] 步驟（I)B制備方法中，奧沙利鉑溶于水性介質后的濃度為1~12mg/ml，有機溶劑 是乙醇、氯仿、乙醚的一種或多種混合，有機溶劑與水相體積比為1:1~5,硫酸銨溶解于水 性介質后的濃度為〇. 1~〇. 3mol/L;分離出游離藥物的方法可采用透析法。。
[0027] 步驟（I)C制備方法中，奧沙利鉑溶于水性介質后的濃度為1~12mg/ml，有機溶劑 是氯仿、乙醚的一種或二者混合物，形成反相膠束時有機溶劑與水相體積比為2~6:1，硫酸 銨溶解于水性介質后的濃度為〇. 1~〇. 3mol/L;分離出游離藥物的方法可采用透析法。 [0028] 步驟(2)中，加入伊立替康類藥物溶液的濃度為1~15mg/ml，水化溫度40~60°C， 水化時間為10~60min。
[0029] 加入伊立替康類藥物溶液的濃度對精確控制兩種藥物的比例比較重要，若是不合 適的藥物溶液濃度使得藥物的包封率低，且不容易控制兩種藥物的添加比例。
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