組合物、組合物的用途及制造方法
【專利說明】組合物、組合物的用途及制造方法
[0001] 發明概沐
[0002] 本發明提供包含下述中的至少兩種（例如2、3、4、5或6種）的組合物：（a)海膽 色素 A (2-乙基-3, 5, 6, 7, 8-五羥基-1，4-萘醌）；(b)棘色素 A (2-乙酰基-3, 5, 6, 8-四羥 基-1，4-萘二酮）；（c)棘色素 B (2, 3, 5, 7-四羥基-1，4-萘二酮）；（d)棘色素 C(2-乙酰 基-3, 5, 6, 7, 8-五羥基-1，4-萘二酮）；（e)棘色素 D (2, 3, 5, 6, 8-五羥基-1，4-萘二酮）；以 及（f)棘色素 E (六羥基-1，4-萘二酮）。組合物可包含一種或多種另外的活性成分（如維 生素、維甲酸（全反式視黃酸或ATRA)、糖胺聚糖（GAG)、皮膚填充劑、肉毒桿菌（Botulinum) 毒素等）和/或一種或多種非活性成分（如溶劑、載體、膠凝劑、著色劑等）。組合物可以是 干燥的固體形式（如粉末）或者是液體形式。此外，上文（a) - (f)中的每一組分都可以以 天然來源的形式或以合成制備的形式獨立存在于組合物中。
[0003] 海膽可包含下述中的至少一種：巨紫球海膽（Strongylocentrotus franciscanus)、紫球 海膽(Strongylocentrotus purpuratus)、綠海膽 (Strongylocentrotus droebachiensis)、 Loxechinus albus、 Evechinus Chloroticus、 Strongylocentrotus droebachiensin、 ?!下夷馬 奠海膽(Strongylocentrotus intermedius)、光棘球海膽(Strongylocentrotus nudus)、 Strongylocentrotus pallidas、 Strongylocentrotus polyacanthus、 Paracentrotus lividus、 Lytechinus variegatus、Lytechinus variegatus、紫海膽（Heliocidaris erythrogramma)、長刺海膽 (Centrostephanus rodgersii)以及 Heliocidaris tuberculate。
[0004] 本發明也提供一種方法，包括向患者（如人）施用有效量的本文所述的組合物。所 述施用可以是局部施用或全身施用。
[0005] 本發明也提供一種方法，包括向患者（如人）局部施用有效量的本文所述的組合 物。局部施用組合物以治療以下中的至少一種：與衰老有關的局部狀況（如皺紋和/或光 老化）、痤瘡、局部細菌性感染、局部真菌性感染（如指甲真菌）以及局部病毒性感染（如口 腔潰瘍）。
[0006] 本發明也提供一種方法，包括向患者（如人）口服施用有效量的本文所述的組合 物。
[0007] 本發明也提供抑制患者（如人）內存在的其它分子（如抗氧化酶）的氧化的方法。 所述方法包括向患者施用有效抗氧化量的本文所述的組合物。
[0008] 本發明也提供制備從海膽中獲得的組合物的方法。所述方法包括：（i)將海膽干 燥以提供干燥的海膽；（ii)將干燥的海膽的尺寸減小為粉末；和（iii)任選地，對所述粉 末進行溶劑提取。所述海膽可包含全海膽、海膽殼、海膽棘、海膽軟組織和海膽內骨骼中的 至少一種。可獲得相當高產率（例如至少約〇. Iwt. % )和/或相當高純度（例如至少約 95wt. % )的組合物。可任選地對組合物進行后續純化，可包括，例如高壓液相層析（HPLC)、 結晶化和/或溶劑提取。
[0009] 附圖簡要描休
[0010] 可通過參考下文的描述以及對本文公開的實施方案進行示例性說明的附圖來更 好的理解此類實施方案。
[0011]圖1顯示了描述制備市售為T-Regalus?i的液體提取物的方塊流程圖（圖1)。
[0012] 圖2顯示了描述制備可用作如肥料的組合物的粉末形式的方塊流程圖（圖2)。
[0013] 發明詳沐
[0014] 現在將詳細參考本文公開的某些權利要求，這些權利要求的實例在所附的結構和 配方中進行了示例性說明。雖然本公開的主題將與列舉的權利要求一起描述，但是應當理 解，它們不意圖將本公開的主題限于那些權利要求。相反，本公開的主題意圖覆蓋所有的替 代物、修飾以及等同物，其可以包含于權利要求所限定的本公開的主題的范圍內。
[0015] 本說明書提到的"一個實施方案"、"實施方案"、"示例性實施方案"等顯示所描述 的實施方案可包括具體的特征、結構或特性，但是每一實施方案不一定包含所述的具體特 征、結構或特性。此外，此類短語不一定指相同的實施方案。另外，當結合實施方案描述具 體的特征、結構或特性時，認為在本領域技術人員的知識范圍內可實現與其它實施方案有 關的該特征、結構或特性，無論是否明確描述。
[0016] 本公開的主題涉及組合物及其制備和使用方法。當描述組合物及其制備和使用方 法時，下文的術語具有下述含義，除非另外指明。
[0017] 本文使用的"結晶化"包括從溶液中形成晶體（晶體材料）的過程。
[0018] 本文使用的"尺寸減小"指減小海洋組織（如干燥的具有軟組織的海膽殼/棘）的 尺寸，通常將其變為粉末。這可以通過，例如撕碎、碾磨和/或浸軟來完成。可實施尺寸減 小，以使固體顆粒的平均尺寸至少減小10%，至少減小20%，至少減小30 %或者至少減小 40%。在具體實施方案中，固體顆粒的平均尺寸減小最高至70%，最高至50%，或者最高至 30%〇
[0019] 本文使用的"干燥"包括將其中存在的大部分（如大于90wt. % )有機溶劑和水移 除。例如，可將具有軟組織的海膽殼/棘干燥，以移除其中大量的水分。這可通過例如下述 方法來完成：將海洋組織在環境條件下干燥較長一段時間（如約48小時），然后將其置于 對流烤箱中并加熱至較高的溫度，持續較長一段時間（例如加熱至約116° F，加熱約72小 時）。可進行干燥以使海洋組織中的最終水分含量低于約20wt. % (如約7-12wt. % )。
[0020] 本文使用的"有機溶劑"指在環境條件下是液體的物質，其中化合物被認為是有機 分子（即存在一個或多個碳原子）。有機溶劑可以是極性的或者是非極性的。此外，有機 溶劑可以是質子性的或者是非質子性的。有機溶劑可包含一定量的水。例如，有機溶劑可 包括乙醇，乙醇自身可包含水。具體地，有機溶劑可包含95%的乙醇（即，有機溶劑可含有 95 %的乙醇和5 %的水）。
[0021] 本文使用的"純化"指去除期望的雜質材料的過程。合適的純化方法包括，例如洗 滌、溶劑提取、層析（如HPLC)、再結晶和干燥。
[0022] 本文使用的" μ g"表示微克，"mg"表示毫克，"g"表示克，" μ L"表示微升，"mL" 表示毫升，"L"表示升，"nM"表示納摩爾含量，" μ Μ"表示微摩爾含量，"mM"表示毫摩爾含 量，"M"表示摩爾含量，"nm"表示納米。
[0023] 制誥（加工）方法
[0024] 在本文所述的制備方法中，在不脫離本文所述的原則的情況下，可以以任意順序 來實施步驟，除非對時間程序或操作程序進行明確地敘述。當在權利要求中敘述先實施一 個步驟，隨后實施一些其它步驟時，這應被理解為在任何其它步驟之前實施第一步驟，但是 其它步驟可以按任何合適的順序來實施，除非在其它步驟中進一步敘述了實施順序。例如， 敘述"步驟A、步驟B、步驟C、步驟D和步驟E"的權利要求部分應被解釋為首先實施步驟A， 最后實施步驟E，步驟B、C以及D可以按步驟A和E之間的任何順序來實施，并且所述順序 仍落入要求保護的過程的字面范圍內。
[0025] 此外，可同時實施規定的步驟，除非權利要求語言中明確敘述它們應當分開實施。 例如，可在單次操作中同時實施權利要求中進行X的步驟和權利要求中進行Y的步驟，且產 生的過程將落入要求保護的過程的字面范圍內。
[0026] 關于圖1和圖2,本文描述的加工方法包括：⑴將海膽干燥以提供干燥的海膽， (ii)將干燥的海膽的尺寸減小至粉末，和（iii)任選地，對粉末進行溶劑提取。可實施本文 所述的方法以獲得本文描述的組合物。
[0027] 在加工方法中使用的海膽可包括全海膽或其任何部分。例如，海膽可包括全海膽、 海膽殼、海膽棘、海膽軟組織以及海膽內骨骼中的至少一種。
[0028] 在加工方法中使用的海膽可包括任何合適的海膽種類或種類組合。例如，在 加工方法中使用的海膽可包含下述中的至少一種：巨紫球海膽、紫球海膽、綠球海膽、 Loxechinus albus、 Evechinus Chloroticus、 Strongylocentrotus droebachiensin、 4下夷馬奠海膽、光棘球海膽、Strongylocentrotus pallidas、Strongylocentrotus polyacanthus、 Paracentrotus Iividus、 Lytechinus variegatus、 Lytechinus variegatus、紫海膽、長刺海膽以及 Heliocidaris tuberculate。
[0029] 本文所述的加工方法中的干燥步驟可以以任何合適的以及適當的方式實施。例 如，可使用干燥爐或通過曬干來實施干燥步驟。
[0030] 本文所述的加工方法中的尺寸減小步驟可以以任何合適的以及適當的方式實施。 例如，可使用將干燥的海膽撕碎、覆蓋（mulching)、研磨以及碾磨中的至少一種來實施尺寸 減小步驟。
[0031 ] 本文所述的加工方法中的溶劑提取步驟可以以任何合適的以及適當的方式實施。 例如，可使用有機溶劑（如乙醇和/或二甲醚）來實施溶劑提取步驟。具體而言，可使用索 氏系統來實施溶劑提取步驟。
[0032] 關于圖1中顯示的方法，可將粉末狀的（干燥的）海膽直接用在商業中。可選地， 可將粉末狀的（干燥的）海膽進行溶劑提取（例如95%的乙醇和/或二甲醚）以獲得粉 末狀的（干燥的）海膽的提取物。在具體實施方案中，粉末狀的（干燥的）海膽的提取物 可直接用在商業中。可選地，可配制粉末狀的（干燥的）海膽的提取物（例如與穩定劑和 /或防腐劑混合）以提供液體提取物（如T-Regalus?')。
[0033] 藥物制劑
[0034] 隨后可用常規的載體和賦形劑來配制本文所述的組合物，可按通常的實踐來 選擇載體和賦形劑。片劑可含有賦形劑、助流劑、填充劑、粘合劑等。將水制劑制備 為無菌形式，并且當意圖通過除口服給藥之外的方式遞送時，其通常是等張的。所有 制劑任選地含有賦形劑，如在 Handbook of Pharmaceutical Excipients，5th Ed.; Rowe, Sheskeyj and Owen,Eds. ；American Pharmacists Association ；Pharmaceutical Press:Washington，DC，2006中列出的那些賦形劑包括抗壞血酸和其它的抗氧化劑，螯合 劑（如EDTA)，碳水化合物（如糊精），羥烷基纖維素，羥烷基甲基纖維素，硬脂酸等。制劑 的pH范圍為約3-約11，但是通常為約7-10。
[0035] 雖然單獨施用本文所述的組合物的活性成分是可能的，但優選以例如藥物制劑、 美容制劑或植物制劑（如肥料）等的形式存在。因而，本文公開的制劑（獸用、人用以及植 物用）包含至少一種如上文所限定的活性成分和一種或多種可接受的載體，以及任選地包 含其它治療成分。載體必須是"可接受的"，其意義在于與制劑中的其它成分相容且對其接 受者在生理上是無害的。
[0036] 制劑包括適合于前述給藥途徑的那些制劑。制劑可方便地以單位劑量的形式存 在，并且可通過藥學領域眾所周知的方法中的任何方法來制備。通常可在Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, (1985)中找到技術和 制備方式。此類方法包括將組合物與包含一種或多種輔助成分的載體相結合的步驟。通常， 通過下述方式來制備制劑：將組合物與液體載體或精細切割的固體載體或與這兩者均勻且 緊密相結合，然后如果需要，將產物成形。
[0037] 適合口服給藥的本文公開的制劑可以以下述形式存在：離散單元（如膠囊、扁囊 劑或片劑），每個單元含有預定量的組合物；粉末或顆粒；水性或非水性液體的溶液或懸 液；或者水包油液體乳劑或油包水液體乳劑。還可將組合物作為大丸劑、藥糖劑或糊劑來施 用。
[0038] 通過壓縮或模制來制備片劑，任選地與一種或多種輔助成分進行壓縮或模制。可 通過下述方式來制備壓縮片劑：將自由流動形式的組合物（如粉末或顆粒）在合適的機器 中壓縮，組合物任選地混合有粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。 可通過下述方式來制備模制片劑：將用惰性液體稀釋劑潤濕的粉末狀的組合物的混合物在 合適的機器中進行模制。片劑可任選地被包被或刻痕，并且任選地被配制為能提供組合物 的緩釋或控釋。
[0039] 對于向眼部或其它外部組織（如口或皮膚）的施用，優選地，將制劑制備為含有活 性成分的局部用軟膏或乳霜，其中活性成分的量為，例如〇. 075% -20% w/w(包括增量為 0· 1 % w/w 的范圍為 0· 1 % -20% 的活性成分，如 0· 6% w/w、0. 7% w/w 等），優選 0· 2% -15% w/