睪丸和附睪臟器系數下降的保護作用（n=15)
注：與A組比較：*P〈0. 05,與C組比較：Λ P〈0. 05。
[0025] 表1顯示，與正常對照組（A)相比，久效磷對照組（C)睪丸臟器系數和附睪臟器系 數均下降，差異有統計學意義（P〈〇. 05)。蝦青素保護組能抑制久效磷染毒引起的小鼠睪丸 臟器系數和附睪臟器系數下降，以蝦青素高劑量保護組（F)作用最顯著，蝦青素高劑量保護 組（F)睪丸臟器系數和附睪臟器系數，與久效磷對照組（C)相比有顯著差異（P〈0. 05)，與正 常對照組（A)相比，沒有顯著差異（P>0. 05)。
[0026] 表2 蝦青素對久效磷所致小鼠精子數量、精子活率下降及畸形率升高的保護作 用（n=15)
注：與A組比較：*P〈0. 05,與C組比較：Λ P〈0. 05。
[0027] 表2可見，與正常對照組（A)相比，久效磷磷對照組（C)小鼠精子數量和精子活率 下降，精子畸形率升高，差異有統計學意義（p〈0. 05)。蝦青素保護組能抑制久效磷染毒引起 的小鼠精子數量和精子活率下降及精子畸形率升高，以蝦青素高劑量保護組（F)作用最顯 著，蝦青素高劑量保護組（F)小鼠精子數量、精子活率及精子畸形率，與久效磷對照組（C) 相比有顯著差異（P〈〇. 05)，與正常對照組（A)相比，沒有顯著差異（P>0. 05)。
[0028] 表3蝦青素對久效磷所致小鼠睪丸氧化損傷的保護作用（n=15)
注：與A組比較：*P〈0. 05,與C組比較：Λ P〈0. 05。
[0029] 表3可見，與正常對照組（A)相比，久效磷磷對照組（C)小鼠睪丸組織CAT活性升 高和MDA含量增多，LDH活性下降，差異有統計學意義（P〈0. 05)。蝦青素保護組能抑制久效 磷染毒引起的小鼠睪丸組織MDA含量增多及CAT活性和LDH活性下降，以蝦青素高劑量保 護組（F)作用最顯著，蝦青素高劑量保護組（F)小鼠睪丸組織CAT活性、LDH活性及MDA含 量，與久效磷對照組（C)相比有顯著差異（P〈0. 05)，與正常對照組（A)相比，沒有顯著差異 (P>0. 05)。
[0030] 試驗例2 :蝦青素抑制辛硫磷所致雄性生殖毒性的試驗研究 1材料與方法 1. 1材料 辛硫磷（40%乳油，山東東泰農化有限公司），蝦青素(美國Sigma公司），超氧化物歧化 酶（CAT)試劑盒、乳酸脫氫酶（LDH)試劑盒和丙二醛(MDA)試劑盒均購自南京建成生物公 司。
[0031] 1.2實驗動物及分組 選擇健康SPF級雄性昆明小鼠90只，體重在（25 ± 2 ) g之間，購自新鄉醫學院動物實 驗中心。適應性飼養7 d，室溫（25±2) °C，濕度50%-55%。
[0032] 將小鼠隨機分為6組，每組15只。分別為正常對照組（A)、蝦青素對照組（B)、久 效磷對照組（C)、蝦青素低劑量保護組（D)、蝦青素中劑量保護組（E)。由于蝦青素不易溶于 水，易溶于油，本實驗用橄欖油作溶劑，其中對照組(A)不給藥，給予橄欖油，蝦青素對照組 (B)給予好青素10 mg/kg，久效磷對照組（C)給予0.20 mg/kg，好青素低劑量保護組（D)給 予蟲下青素5 mg/kg+久效磷0.20 mg/kg，好青素中劑量保護組（E)給予好青素10 mg/kg+久 效磷0· 20 mg/kg，好青素高劑量保護組（F)給予好青素20 mg/kg+久效磷0· 20 mg/kg。并 保證充足的飲水和飼料供應。在連續60 d采用灌胃方式進行染毒，染毒劑量為10 ml/kg， 每天1次。
[0033] 1.3統計學方法 采用SPSS 10.0軟件進行統計學分析。計量資料實驗數據均以1±8進行表示，多組間 比較采用方差齊性檢驗和單因素方差分析（One Way AN0VA)。進一步進行組間兩兩比較時， 若方差齊時，采用SNK檢驗；若方差不齊時，采用Games-Howell檢驗。計數資料實驗數據均 以率表示，組間兩兩比較采用X 2檢驗。以P〈0. 05為差異有統計學意義。
[0034] 2方法與結果 染毒60天后，稱量體重，處死小鼠，立即取出雙側睪丸及附睪，剝離周圍脂肪組織和結 締組織準確稱量睪丸和附睪的重量，計算睪丸及附睪的臟器系數；將雙側附睪置于盛有生 理鹽水的培養皿中剪碎，制備精子懸液。采用血細胞計數法計數上述精子懸液中的精子數， 并換算為每克附睪精子數；取混勻的精子懸液一滴滴于載玻片上，加蓋玻片于光鏡下觀察 精子活動力，按WHO推薦的方法，按精子的泳動狀態將精子活動度分為四級：I級：直線運 動明顯活躍，活動良好；II級：直線運動，活動稍差；III級：精子向前移動的能力差，在原處 移動或作旋轉運動；IV級：精子無任何活動，每只至少檢查400個精子，計算精子活率(精子 活率=I + II + III級精子數/ I + II +111 +IV級精子數X100%);將部分精子懸液作涂片， 空氣干燥后，用甲醇固定5min，干燥后用2%伊紅水溶液染色Ih，用水輕沖，干燥，在光鏡下， 每只小鼠檢查至少檢查400個精子，記錄精子的畸形類型和數量，凡精子輪廓不清，有頭無 尾，或頭部與其它精子或碎片重疊，或兩個以上精子重疊，或明顯屬人為剪碎者均不計算， 畸形類型主要分為：無鉤、香蕉形、無定形、胖頭、尾折疊、雙頭、雙尾等，畸形率以百分率表 示（％);取睪丸組織加入適量的冰生理鹽水，在冰浴條件下用玻璃勻漿器研磨制成睪丸組織 勻漿，然后在低溫（4°C )條件下以2000rpm，離心10min，靜置片刻，取上清液，參照試劑盒說 明書，檢測睪丸勻漿液中CAT、LDH活性和MDA含量。
[0035] 表1蝦青素對辛硫磷所致小鼠睪丸和附睪臟器系數下降的保護作用（n=15)
注：與A組比較：*P〈0. 05,與C組比較：Λ P〈0. 05。
[0036] 表1顯示，與正常對照組（A)相比，辛硫磷對照組（C)睪丸臟器系數和附睪臟器系 數均下降，差異有統計學意義（P〈〇. 05)。蝦青素保護組能抑制辛硫磷染毒引起的小鼠睪丸 臟器系數和附睪臟器系數下降，以蝦青素高劑量保護組（F)作用最顯著，蝦青素高劑量保護 組（F)睪丸臟器系數和附睪臟器系數，與辛硫磷對照組（C)相比有顯著差異（P〈0. 05)，與正 常對照組（A)相比，沒有顯著差異（P>0. 05)。
[0037] 表2 蝦青素對辛硫磷所致小鼠精子數量、精子活率下降及畸形率升高的保護作 用（n=15)
注：與A組比較：*P〈0. 05,與C組比較：Λ P〈0. 05。
[0038] 表2可見，與正常對照組（A)相比，辛硫磷磷對照組（C)小鼠精子數量和精子活率 下降，精子畸形率升高，差異有統計學意義（p〈0. 05)。蝦青素保護組能抑制辛硫磷染毒引起 的小鼠精子數量和精子活率下降及精子畸形率升高，以蝦青素高劑量保護組（F)作用最顯 著，蝦青素高劑量保護組（F)小鼠精子數量、精子活率及精子畸形率，與辛硫磷對照組（C) 相比有顯著差異（P〈〇. 05)，與正常對照組（A)相比，沒有顯著差異（P>0. 05)。
[0039] 表3蝦青素對辛硫磷所致小鼠睪丸氧化損傷的保護作用（n=15)
注：與A組比較：*P〈0. 05,與C組比較：Λ P〈0. 05。
[0040] 表3可見，與正常對照組（A)相比，辛硫磷磷對照組（C)小鼠睪丸組織MDA含量 增多，CAT活性和LDH活性下降，差異有統計學意義（P〈0. 05)。蝦青素保護組能抑制辛硫 磷染毒引起的小鼠睪丸組織MDA含量增多及CAT活性和LDH活性下降，以蝦青素高劑量保 護組（F)作用最顯著，蝦青素高劑量保護組（F)小鼠睪丸組織CAT活性、LDH活性及MDA含 量，與辛硫磷對照組（C)相比有顯著差異（P〈0. 05)，與正常對照組（A)相比，沒有顯著差異 (P>0. 05)。
[0041] 從以上各實驗例可以看出，蝦青素能抑制(如久效磷和辛硫磷）有機磷農藥所致的 雄性小鼠睪丸臟器系數和附睪臟器系數下降；精子數量減少、精子活率降低、精子畸形率增 加；睪丸組織CAT活性和LDH活性降低、MDA含量增多，所引起的睪丸組織氧化損傷；!l!下青 素能抑制有機磷農藥的雄性生殖毒性，有較好的劑量依賴性。蝦青素對有機磷農藥所致雄 性生殖毒性具有良好的抑制和保護作用，可用于制備防治有機磷農藥所致雄性生殖毒性的 藥物或保健品，還可用于制備預防和治療因有機磷農藥所致雄性生殖毒性誘發的疾病的藥 物。
[0042] 雖然，上文中已經用一般性說明、具體實施方案以及試驗例對本發明做了詳盡的 描述，但在本發明的基礎上，所屬領域的普通技術人員可以對之作一些修改和改進，這對本 領域技術人員而言是顯而易見的。因此在不偏離本發明精神的基礎上，所做的這些修改和 改進，均屬于本發明要求保護的范圍。
【主權項】
1. 蝦青素在制備防治因有機磷農藥所致雄性生殖毒性疾病的藥物中的應用。2. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述雄性生殖毒性疾病為精子數量降低、 精子活動性下降、變性精子數量增多、精液減少或睪丸疾病。3. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于：蝦青素在制備抑制因有機磷農藥所致精 子活率降低的藥物中的應用。4. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于：蝦青素在制備抑制因有機磷農藥所致精 子畸形率升高的藥物中的應用。5. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于：蝦青素在制備抑制因有機磷農藥所致睪 丸組織MDA含量增多的藥物中的應用。6. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于：蝦青素在制備抑制因有機磷農藥所致睪 丸組織CAT活性和LDH活性下降的藥物中的應用。7. 根據權利要求1一6任一項所述的應用，其特征在于：所述的有機磷農藥為久效磷、 辛硫磷、對氧磷或三唑磷。
【專利摘要】本發明涉及蝦青素的一種醫藥新用途，即預防與治療有機磷農藥所致雄性生殖毒性的作用，更進一步的說是在制備抑制因有機磷農藥所致精子活率降低、精子畸形率升高、睪丸組織MDA含量增多、睪丸組織CAT活性和LDH活性下降的藥物中的應用。以高毒有機磷農藥久效磷和低毒有機磷農藥辛硫磷為代表，研究了蝦青素對因低濃度有機磷農藥暴露所致的雄性生殖毒性的預防和治療作用，證明蝦青素能抑制有機磷農藥所致的雄性生殖毒性，有較好的劑量依賴性，從而提出蝦青素作為活性物質在制備因有機磷農藥所致的雄性生殖毒性藥物中的應用。
【IPC分類】A61P15/08, A61K31/122, A61P15/00
【公開號】CN105434408
【申請號】CN201410502878
【發明人】閆建國, 崔衛剛, 孫春莉
【申請人】新鄉醫學院
【公開日】2016年3月30日
【申請日】2014年9月28日