施用抗TNFα抗體的方法
【專利說明】施用抗TNFa抗體的方法
[0001] 本申請是2002年6月5日提交的02815654. 4號發明專利申請（名稱為"施用抗 TNFa抗體的方法"的分案申請。
【背景技術】
[0002] 腫瘤壞死因子（TNFa)是一種由多種細胞（包括單核細胞和巨隧細胞）產生 的細胞因子，最初是根據其誘導某些鼠腫瘤壞死的能力而鑒定出的（參見Old,L. (1985) Science230:630-632)。隨后，確定了一種與惡病相關的，命名為惡液質素（cachectin) 的細胞因子和TNFa是同一分子。TNFa參與介導休克（參見Beutler，B.和Cerami，A. (1998)Annu.Rev.Biochem.57: 505-518 ;Beutle;r,B.和Cerami,A. (1998)Annu.Rev. Immunol.7:625-655)。此外，TNFa與其它多種人類疾病和失調的病理生理學有關，包括 脈血癥、感染、自身免疫病、移植排斥和移植物抗宿主疾病（參見Vasilli，P. (1992)Annu. Rev.Immunol. 10:411-452 ;Tracey,Κ.J.和Cerami,A. (1994)Annu.Rev.Med. 45:491-503)。
[0003] 鑒于人TNFa化TNFa)在多種人類失調中所扮演的有害角色，治療策略被設計為 抑制或中和hTNFa的活性。尤其是，能夠結合并中和hTNFa的抗體已被作為一種抑制 hTNFa活性的手段（means)。某些最早的運類抗體是鼠的單克隆抗體（mAbs)，由用hTNFa 免疫的鼠淋己細胞制備的雜交瘤分泌（參見Η址ηT.等，（1985)Pro化tlAcadSciUSA 82:3814-3818 ;Liang,C-M等（1986)Biochem.Biophys.Res.Commun. 137:847-854 ;Hirai,Μ 等（1987)J.Immunol.Methods96:57-62 ;Fendly，B.M.等（1987)Hybridoma6:359-370; M61ler，A.等（1990)切tokine2:162-169;Moeller等的美國專利No. 5231024; wallach,D.的歐洲專利出版物No. 186833B1 ;01d等的歐洲專利申請No. 218868A1 ;由 MoellerA.等的歐洲專利出版物No. 260610B1)。運些鼠抗hTNFa抗體通常顯示較高的與 hTNFa的親和力（如：Kd《10 9M)并能中和hTNFa活性，但體內應用運些抗體可能受制于 施用運些鼠抗人抗體相關的問題，如：血清半衰期短、不能觸發某些人體效應器功能W及人 體內誘發不期望的對鼠抗體的免疫應答（"人抗鼠抗體"（HAM)的反應）。
[0004] 為了解決人體內使用完全的（化11)鼠抗體所帶來的問題，用基因工程的方法將 鼠抗hTNFa抗體改造得更為"人化"。比如，已經制備了嵌合抗體，其中抗體鏈的可變區是 鼠源性的，而恒定區則是人源性的（Kni曲t，D.M.等（1993)Mol.Immunol. 30 :1443-1453 ; 化ddona，P.E.等的PCT出版物NO.W092/16553)。此外，也制備了人源化抗體，其中抗體可 變區的超變區是鼠源性的，但可變區的其余部分和抗體恒定區是人源性（Adair,J.R.等的 PCT出版物No.W092/11383)。然而，因為運些嵌合和人源化抗體仍保留一些鼠序列，它們仍 可能誘發不期望的免疫反應，即人抗嵌合抗體（HACA)反應，尤其是長期施用時，如治療類 風濕性關節炎（rheumatoidart虹itis)等慢性適應癥時（參見Elliott,M.J.等（1994) Lancet344 :1125-1127 ;Elliot，M.J.等（1994)Lancet344:1105-1110)。
[000引一種針對鼠單抗或其衍生物（如嵌合或人源化抗體）的優選的hTNFα抑制劑應 當是完全的人抗hTNFa抗體，因為運類藥劑即使是長期使用也不會誘發HAM反應。應 用人雜交瘤技術已經制備了人抗hTNFa的單克隆自身抗體度wle，P等（1993)Cell. Immunol. 152 :556-568 ;B0}de，P.等（1993)Cell.Immunol. 152 :569-581;Boyle等的歐洲 專利申請出版物No. 614984A2)。然而，據報道運些雜交瘤來源的單克隆自身抗體對hTNFα 有親和力，但親和力太低W至于用常規方法測不出來，也不能夠結合可溶性的hTNFa，也不 能夠中和hTNFα誘導的細胞毒性（參見Boyle等；同上）。而且，人雜交瘤技術的成功依 賴于人周血中天然存在的產生特異性抗hTNFα自身抗體的淋己細胞。某些研究檢測了人 體中的抗hTNFα的血清自身抗體（Fomsgaard，A等（1989)Scand.J.Immunol. 30 :219-223 ; Ben化zen，K等（1990)P;rog.Leuko巧teBiollOB:447-452),而其它的研究沒有進行檢測 化eusch，H-G等（1991)J.Immunol.Methods139 :145-147)。
[0006] 除天然存在的人抗hTNFα外可選擇重組hTNFα抗體。與hTNFαW相對低的親 和力（如Kd約10 7M)和快的解離速率（如Kw約10 ^秒）結合的重組人抗體已有報道 (Griffiths,A.D.等（1993化MB0J. 12:725-734)。然而，由于它們的相對快速的解離動力 學，運些抗體不適于治療用。此外，已報道一種重組人抗hTNFα不能中和hTNFα活性，反 而強化hTNFa與細胞表面的結合，加速其內吞化idbury，A等（1994)Biotechnol.Ther. 5: 27-45 ;Aston，R等的PCT出版物No.W092/03145)。
[0007] 也有報道描述了重組人抗體，能夠W高的親和力W及慢的解離速率結合可溶的 hTNFα，運種抗體能夠中和hTNFα活性，包括hTNFα誘導的細胞毒性（體內和體外）和 hTNFα誘導的細胞活化（參見美國專利No. 6090382)。施用抗體的典型方案為每周靜脈用 藥。每周施用抗體和/或任何藥物是昂貴的、繁瑣的，而且由于頻繁施用而導致副反應次數 的增加。另外，靜脈施用通常需要受過醫學訓練的人來操作，運也是一種限制。
[000引發明概述
[0009] 本發明提供一種治療TNFa相關失調的每兩周進行一次的用藥方法，優選地通過 皮下用藥。每兩周用藥一次與每周用藥一次相比有許多優點，包括但不限于，較少的注射 總數，較少的注射部位反應（如局部疼痛與腫脹），患者接受程度提高（歸因于注射頻率降 低），對患者和衛生保健機構化ealthcareprovider)而言較低的花費。皮下用藥本身也 有優點，即患者可自己施用治療劑，如人TNFα抗體，運方便了患者和衛生保健機構。
[0010] 本發明提供了治療其中TNFα活性有害的失調的方法。該方法包括給受試者每兩 周皮下注射抗體一次。優選的抗體是能夠特異性結合人TNFa的重組人抗體。本發明進一 步提供了治療其中TNFa活性有害的失調的方法。運些方法包括利用聯合治療方法，其中 人抗體與其它治療藥劑一同給受試者施用，所述其它治療藥劑如一種或多種可與其它祀物 質結合的抗體（如結合其它細胞因子或細胞表面分子的抗體），一種或多種細胞因子，可溶 性TNFα受體（見例如PCT出版物No.W094/06476)和/或一種或多種能夠抑制TNFα產生 或抑制其活性的化學藥劑（諸如PCT出版物No.W093/19751中所述的cyclohexaneylidene 衍生物），優選藥劑是氨甲蝶嶺。抗體優選能夠特異性結合人TNFa的重組人抗體。本發 明抗體的特征是W高親和力和低解離動力學與hTNFα結合，而且能夠中和hTNFα活性，包 括hTNFα誘導的細胞毒性（體內和體外）和hTNFα誘導的細胞活化。運些抗體可W是全 長的（如IgGl或IgG4抗體），也可僅包含抗原結合部分（如F油，F(油'）2,scFv片段或單 結構域）。本發明最優選的重組抗體命名為D2E7,其輕鏈CDR3結構域包含SEQIDN0:3的 氨基酸序列，重鏈CDR3結構域包含SEQIDN0:4的氨基酸序列（在附錄B中列出）。優選 地，D2E7抗體輕鏈可變區化CVR)包含SEQIDN0:1的氨基酸序列，重鏈可變區（HCVR)包 含SEQIDNO:2的氨基酸序列。運些抗體在美國專利No. 6090382中有描述，其全文在此引 入作為參考。
[0011] 在一個實施方案中，本發明提供了治療其中TNFa活性有害的失調的方法。運些 方法包括每兩周皮下施用一次抗TNFa抗體，抑制人TNFa活性而治療失調。失調可W是 例如脈血癥、自身免疫性疾病（如類風濕性關節炎、變態反應、多發性硬化、自身免疫性糖 尿病、自身免疫性色素層炎W及腎病綜合征）、感染性疾病、惡性腫瘤、移植排斥或移植物抗 宿主疾病、肺失調、骨失調、腸道失調或屯、臟失調。
[0012] 在另一實施方案中，本發明提供了治療其中TNFa活性有害的失調的方法。運些 方法包括通過皮下施用抗TNFa抗體和氨甲蝶嶺，抑制人TNFa活性，從而治療失調。在一 方面中，氨甲蝶嶺與抗TNFa抗體一同施用。在另一方面中，在施用抗TNFa抗體之前施用 氨甲蝶嶺。在另一方面中，在施用抗TNFa抗體之后施用氨甲蝶嶺。
[0013] 在一優選實施方案中，用于治療其中TNFa活性有害的失調的抗TNFa抗體是人 抗TNFa抗體。更優選的是，通過每兩周皮下施用分離的人抗體或抗體的抗原結合部分來 進行治療。優選地，抗體或其抗原結合部分WKd為1X108Μ或更小，Kwf速率常數為1X10 ^ 秒或更小從人TNFa解離，運兩者都是由表面等離子共振（surfaceplasmonresonance) 測定；而且按照標準的體外L929檢測方法WICg。為1X10 7M或更低中和人TNFα細胞毒 性。更優選地，分離的人抗體或其抗原結合部分WKwf為5X10 ^秒或更小，更優選地WKwf 為1X10 ^秒或更小，從人TNFa解離。更優選地，分離的人抗體或其抗原結合部分，按照 標準的體外L929檢測方法檢測，WICs。為1X10 %或更低，進一步優選WICs。為1X10 9m 或更低，更進一步優選WICe。為1X10 或更低，中和人TNFα細胞毒性。
[0014] 再另一實施方案中，本發明提供了通過給受試者每兩周皮下施用人抗體或其抗原 結合部分來治療其中TNFa活性有害的失調的方法。所述抗體或其抗原結合部分優選具有 下列特征：
[001引a)由表面等離子共振測定，WK。》為1X10 ^秒或更小從人TNFα解離；
[0016]b)具有輕鏈CDR3結構域，其包含SEQIDNO:3的氨基酸序列，或通過在1，4,5,7 或8位進行單一丙氨酸替代，或在1，3,4,6, 7,8和/或9位進行1至5個保守氨基酸替代 由SEQIDNO:3修飾的氨基酸序列；
[0017](：)具有重鏈〔01?3結構域，其包含569 10^:4的氨基酸序列，或通過在2,3,4,5， 6,8,9,10或11位進行單一丙氨酸替代，或在2, 3,4, 5,6,8,9,10,11和/或12位進行1至 5個保守氨基酸替代由SEQIDNO:4修飾的氨基酸序列；
[0018] 更優選地，抗體或其抗原結合部分WKwf值為5X10^秒或更小從人TNFa解離。 進一步優選地，抗體或抗體的抗原結合部分WKwf值為1X10^秒或更小從人TNFa解離。
[0019] 在另一實施方案中，本發明提供了治療其中TNFa活性有害的失調的方法。運些 方法包括每兩周給受試者皮下施用人抗體或其抗原結合部分。抗體或其抗原結合部分優選 包含LCVR區和HCVR區，所述LCVR區具有CDR3結構域，其包含SEQIDN0:3的氨基酸序 列，或通過在1，4,5,7或8位進行單一丙氨酸替代由SEQIDN0:3修飾的氨基酸序列；所述 版：￥1?區具有〔01?3結構域，其包含569 10^:4的氨基酸序列，或通過在2,3,4,5,6,8,9，10 或11位進行單一丙氨酸替代由SEQIDNO:4修飾的氨基酸序列。進一步優選地，LCVR區 還具有CD2結構域，該結構域包含SEQIDNO:5的氨基酸序列，而HCVR還具有CD2結構域， 該結構域包含SEQIDNO:6的氨基酸序列。再進一步優選地，LCVR區還具有CDRl結構域， 該結構域包含SEQIDNO:7的氨基酸序列，而HCVR具有CDR1結構域，該結構域包含SEQID NO:8的氨基酸序列。
[0020] 在另一實施方案中，本發明提供了通過每兩周給受試者皮下施用分離的人抗體或 其抗原結合部分來治療其中TNFa活性有害的失調的方法。所述抗體或抗體的抗原結合部 分優選包含LCVR區和HCVR區，所述LCVR區包含SEQIDNO:1的氨基酸序列；而所述HCVR 區包含SEQIDNO:2的氨基酸序列。在某些實施方案中，抗體具有IgGl重鏈的恒定區或 IgG4重鏈的恒定區。在另一實施方案中，抗體是F油片段、F(油'）2片段或單鏈Fv片段。
[0021] 在另一實施方案中，本發明提供了用于治療失調的方法，該方法通過每兩周給受 試者皮下施用一種或多種抗TNFa抗體或其抗原結合部分而使受試者獲益。所述抗體或其 抗原結合部分優選包含LCVR區或連同HCVR區，所述LCVR區具有CDR3結構域，其包含選自 沈QIDNO:3,沈QIDNO:11，沈QIDNO:12,沈QIDNO:13,沈QIDNO:14,沈QIDNO: 15,沈QIDNO:16,沈QIDNO:17,沈QIDNO:18,沈QIDNO:19,沈QIDNO:20,沈QID NO:21，沈QIDNO:22,沈QIDNO:23,沈QIDNO:24,沈QIDNO:25,沈QIDNO:26 的氨 基酸序列；而所述HCVR區具有CDR3結構域，其包含選自SEQIDNO:4,SEQIDNO:27,SEQ IDNO:28,沈QIDNO:29,沈QIDNO:30,沈QIDNO:31，沈QIDNO:32,沈QIDNO:33， 沈QIDNO:34和沈QIDNO:35的氨基酸序列。
[0022] 本發明的另一個方面設及包含藥物制劑的試劑盒，所述藥物制劑包含藥物組合 物。該試劑盒包含抗TNFa抗體和藥學上可接受的載體。試劑盒內附有每兩周皮下施用治 療失調的藥物組合物的說明，其中施用抗TNFa可使患者獲益。在另一個方面中，本發明設 及包含藥物制劑的試劑盒，所述藥物制劑包含藥物組合物，所述試劑盒進一步包含抗TNFα 抗體、氨甲蝶嶺W及藥學上可接受的載體。試劑盒內附有皮下施用治療失調的藥物組合物 的說明，其中施用抗TNFa抗體可使患者獲益。
[0023] 本發明的另一方面提供了一種含有藥物組合物的預裝的注射器，所述藥物組合物 包含抗TNFa抗體和藥學上可接受的載體。在另一方面中，本發明提供了一種含有藥物組 合物的預裝的注射器，所述藥物組合物包含抗TNFa抗體、氨甲蝶嶺和藥學上可接受的載 體。
[0024] 因此，本發明具體地設及W下方面：
[0025] 1. 一種治療人類受試者中的失調的方法，其中疾病可用TNFa抗體治療，所述方 法包括給人類受試者每兩周施用一種組合物來治療失調，其中所述組合物包含抗TNFα抗 體或其抗原結合部分。
[002引 2.如第1項中的方法，其中施用是通過皮下注射進行的。
[0027] 3.如第1項中的方法，其中所述抗TNFa抗體或其抗原結合部分是人抗TNFa抗 體。
[0028] 4.如第3項中的方法，其中由表面等離子共振測定，人抗體或其抗原結合部分W Kd為1X10%或更低，Kwf速率常數為1X10^秒或更低從人TNFa上解離，而且在標準的 體外L929檢測方法中WICw為1 X 107m或更低中和人TNFα細胞毒性。
[0029] 5.如第3項中的方法，其中人抗體或其抗原結合部分WKwf速率常數為5X10 ^ 秒或更低從人TNFa上解離。
[0030] 6.如第3項中的方法，其中人抗體或其抗原結合部分WKwf速率常數為1X10 ^ 秒或更低從人TNFa上解離。
[003。 7.如第3項中的方法，其中人抗體或其抗原結合部分，在標準體外L929檢測方法 中，WiCs。為1X108M或更低中和人TNFa細胞毒性。
[003引 8.如第3項中的方法，其中人抗體或其抗原結合部分，在標準體外L929檢測方法 中，WiCs。為1X109M或更低中和人TNFa細胞毒性。
[003引9.如第3項中的方法，其中人抗體或其抗原結合部分，在標準體外L929檢測方法 中，WiCs。為1X10 或更低中和人TNFa細胞毒性。
[0034] 10.如第3項中的方法，其中人抗體或其抗原結合部分是一種重組抗體或其重組 的抗原結合部分。
[003引11. 一種在人受試者中抑制人TNFa活性的方法，所述人受試者患有其中TNFa活 性有害的失調，所述方法包括每兩周施用一種組合物，所述組合物包含人抗TNFα抗體，其 中人抗體或其抗原結合部分具有下列特征：
[0036]a)由表面等離子共振測定，WKw速率常數為1X10 ^秒或更低從人TNFα上解 離；
[0037]b)具有輕鏈CDR3結構域，其包含SEQIDΝ0:3的氨基酸序列，或通過在1、4、5、7 或8位進行單一丙氨酸替代，或在1、3、4、6、7、8和/或9位進行1至5個保守氨基酸替代 由SEQIDNO:3修飾的氨基酸序列；
[0038] C)具有重鏈CDR3結構域，其包含SEQIDNO: 4的氨基酸序列，或通過在2、3、4、5、 6、8、9、10或11位進行單一丙氨酸替代，或在2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12位進行1至 5個保守氨基酸替代由SEQIDN0:4修飾的氨基酸序列。
[0039] 12.如第11項中的方法，其中施用是通過皮下施用。
[0040] 13.如第11項中的方法，其中人抗體或其抗原結合部分WKw謎率常數為5X10 ^ 秒或更低從人TNFa上解離。
[0041] 14. 一種在人受試者中抑制人TNFa活性的方法，所述人受試者患有其中TNFa活 性有害的失調，所述方法包括每兩周皮下施用一種組合物，所述組合物包含人抗TNFα抗 體，其中人抗體或其抗原結合部分具有輕鏈可變區化CVR)和重鏈可變區（HCVR)，輕鏈可變 區具有CDR3結構域，該結構域包含SEQIDΝ0:3的氨基酸序列，或通過在1、4、5、7或8位 進行單一丙氨酸替代由SEQIDNO:3修飾的氨基酸序列；重鏈可變區具有CDR3結構域，該 結構域包含SEQIDN0:4的氨基酸序列，或通過在2、3、4、5、6、8、9、10或11位進行單一丙 氨酸替代由SEQIDNO:4修飾的氨基酸序列。
[0042] 15.如第14項中的方法，其中人抗體或其抗原結合部分的LCVR進一步具有包含 569 10^:5的氨基酸序列的〔032結構域，版：￥1?進一步具有包含569 10^:6的氨基酸序 列的CDR2結構域。
[0043] 16.如第14項中的方法，其中人抗體或其抗原結合部分的LCVR進一步具有包含 569 10^:7的氨基酸序列的〔031結構域，版：￥1?進一步具有包含569 10^:8的氨基酸序 列的CDR1結構域。
[0044] 17. -種在人受試者中抑制人TNFa活性的方法，所述人受試者患有其中TNFa活 性有害的失調，所述方法包括每兩周皮下施用一種組合物，所述組合物包含人抗TNFα抗 體，其中所述人抗體或其抗原結合部分具