在腫瘤中差異表達的基因產物及其用圖
【專利說明】
[0001] 本申請是發明名稱為"在腫瘤中差異表達的基因產物及其用途"的中國專利申請 03807493. 1的分案申請。
技術領域
[0002] 盡管有經典治療方法的充分使用，癌癥仍然是導致死亡的原因之一。更新的治療 概念的目標在于通過使用重組腫瘤疫苗和其它特異性方法如抗體療法將患者自身的免疫 系統納入治療整體概念中。這種策略的成功先決條件是患者的免疫系統識別腫瘤特異性抗 原或腫瘤相關抗原或表位，所述患者的免疫系統的效應物作用將被干預性地增強。腫瘤細 胞在生物學上具有與其非惡性的起源細胞本質上的差異。這些差異是由腫瘤發展過程中所 獲得的遺傳改變而引起的，此外也導致在癌細胞中形成質和量上改變的分子結構。被患有 腫瘤的宿主的特異性免疫系統識別的該類腫瘤相關結構是指腫瘤相關抗原。腫瘤相關抗原 的特異性識別包括細胞機制和體液機制，所述機制是兩種功能上互聯的單位：CD4+和CD8+T 淋巴細胞分別識別在MHC(主要組織相容性復合物=組織相容性抗原）II類或I類分子上 呈遞的加工的抗原，而Β淋巴細胞產生直接與未加工的抗原結合的循環抗體分子。腫瘤相 關抗原可能的臨床治療上的重要性由如下事實產生，即免疫系統對癌細胞上抗原的識別 導致細胞毒性效應子機制的開始，并能在存在輔助Τ細胞的情況下殺滅癌細胞（Pardoll， Nat.Med. 4 :525 - 31，1998)。因此，腫瘤免疫學的中心目標是在分子上闡明這些結構。這 些抗原的分子特性在很長時間里都是難以解釋的。只有在適宜的克隆技術發展之后，系統 性從腫瘤cDNA表達文庫中篩選腫瘤相關抗原才成為可能，其中通過分析細胞毒性T淋巴細 胞（CTL)的革巴結構（vanderBruggenetal.，Science254 :1643 - 7，1991)或通過使用 循環自身抗體（Sahinetal.，Curr.opin.Immunol. 9 :709 - 16,1997)作為探針的方法進 行篩選。為實現該目標，從新鮮腫瘤組織中制備cDNA表達文庫并在適宜的系統中重組表達 為蛋白質。將分離自患者的免疫效應物即具有腫瘤特異性溶解模式的CTL克隆或循環自身 抗體用于克隆各抗原。
【背景技術】
[0003] 近年來，通過這些方法已經在多種腫瘤形成中闡明了多種抗原。此處，癌/睪丸抗 原（CTA)類型具有很高的意義。CTA和編碼其的基因（癌/睪丸基因或CTG)由其特征性 表達模式而得以闡明[!\1代(^6七&1，10116(11'0(1 &^ 3:342 - 9，1997]。在除睪丸和生殖 細胞外的正常組織中未發現它們，但它們在系列人類惡性腫瘤中表達，而且它們不具有腫 瘤類型特異性，但在來源非常不同的腫瘤體中具有不同的頻率（Chen&Old，CancerJ.Sci. Am. 5 :16 - 7,1999)。在健康對照中也沒有發現抗CTA的血清反應，而僅在腫瘤患者發現 所述血清反應。特別是由于其組織分布，該類抗原對于免疫治療方案具有特別的價值并已 在目前的臨床患者研究中進行檢測（Marchandetal.，Int.J.Cancer80 :219 - 30,1999 ; Knuthetal·，CancerChemother.Pharmacol. 46：S46 - 51，2000)〇
[0004] 然而，用于鑒定抗原的上述經典方法使用來自通常已患有晚期癌的患者的免疫效 應物（循環自身抗體或CTL克隆）作為探針。一系列數據顯示出：腫瘤能導致例如T細胞 的耐受和無反應性，那些能導致有效免疫識別的特異性就在疾病病程期間從免疫效應物庫 中丟失。目前的患者研究尚未給出關于迄今發現和使用的腫瘤相關抗原的真實作用的任何 可靠證據。因此，不能排除引起自體免疫應答的蛋白質是錯誤的靶結構。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供用于癌癥診斷和治療的靶結構。
[0006] 根據本發明，該目的通過權利要求的主題內容而實現。
[0007] 根據本發明，實施用于鑒定和提供與腫瘤相關性表達的抗原和編碼其的核酸的策 略。該策略基于如下事實，即事實上通常在成體組織中沉默的睪丸和由此生殖細胞特異性 基因在腫瘤細胞中以異位和禁止模式被再次活化。首先，數據挖掘（Datamining)給出與所 有已知睪丸特異性基因的盡可能完整的列表，隨后其可通過使用特異性RT-PCR的表達分 析而評估其在腫瘤中的異常活化。數據挖掘是一種鑒定腫瘤相關基因的已知方法。然而，在 傳統策略中，通常從腫瘤組織文庫中電子去除正常組織文庫的轉錄子，其中假定剩余的基 因是腫瘤特異性的（Schmittetal.，NucleicAcidsRes. 27 :4251 -60,1999;Vasmatzis etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 95 :300 - 4,1998.Scheurleetal.，CancerRes. 60 : 4037 - 43,2000)。
[0008] 然而，本發明的概念（其已被證明更為成功）是基于將數據挖掘用于電子提取全 部睪丸特異性基因和然后評估所述基因在腫瘤中的異位表達。
[0009] 因此本發明一個方面涉及鑒定在腫瘤中差異表達的基因的策略。所述策略將公開 序列文庫的數據挖掘（"insilico"）與隨后評估性實驗室試驗（"wetbench"）研究進 行聯合。
[0010] 根據本發明，基于兩個不同生物信息學文本的聯合策略能夠鑒定癌/睪丸（CT)基 因類型的新成員。這些迄今已經被分類為具有純粹的睪丸特異性、生殖細胞特異性或精子 特異性。這些基因在腫瘤細胞中被異常激活的發現使其被賦予了具有功能性含意的基本上 新的特性。根據本發明，這些腫瘤相關基因及其和由其編碼的基因產物不依賴免疫原性作 用而被鑒定和提供。
[0011] 根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原含有由一種核酸編碼的氨基酸序列，所述核酸選 自（a)包括選自SEQIDN0 :1 - 5、19 - 21、29、31 - 33、37、39、40、54 - 57、62、63、70、74、 85 - 88、其部分或其衍生物的核酸序列的核酸，（b)在嚴謹條件下與（a)的核酸雜交的核 酸，（c)關于（a)或（b)的核酸的簡并核酸，和⑷與（a)、（b)或（c)的核酸互補的核酸。 在一個優選的實施方案中，根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原含有由選自SEQIDN0 :1 - 5、 19 一 21、29、31 - 33、37、39、40、54 - 57、62、63、70、74、85 - 88 的核酸所編碼的氨基酸序 列。在另一優選的實施方案中，根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原包括選自SEQIDN0 :6 - 13、14 一 18、22 - 24、30、34 - 36、38、41、58 - 61、64、65、71、75、80 - 84、89 - 100、其部 分或其衍生物的氨基酸序列。
[0012] 本發明一般涉及將根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原或其部分、其編碼核酸或定向 抗所述編碼核酸的核酸或者定向抗根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原或其部分的抗體用于 治療和診斷的用途。該用途可涉及這些抗原、功能性片段、核酸、抗體等中的單個以及多個 的組合，在一個實施方案中，還聯合其它用于診斷、治療和過程控制的腫瘤相關基因和抗 原。
[0013] 治療和/或診斷所針對的優選疾病是其中選擇性表達或異常表達一個或多個根 據本發明鑒定的腫瘤相關抗原的疾病。
[0014] 本發明還涉及與腫瘤細胞相關性表達的并由已知基因的改變性剪接（剪接變體） 或由使用選擇性開放閱讀框而改變的翻譯來制備的核酸和基因產物。所述核酸包括根據序 列表（SEQIDN0 :2 - 5,20,21，31 - 33,54 - 57,85 - 88)的序列。而且，所述基因產物 包括根據序列表（SEQIDN0 :7 - 13、23、24、34 - 36、58 - 61、89 - 100)的序列。本發明 的剪接變體可根據本發明用作腫瘤性疾病的診斷靶位和治療靶位。
[0015] 可使用非常不同的機理制備剪接變體，例如
[0016] -使用可變轉錄起始位點
[0017] 一使用附加外顯子
[0018] -完全或不完全剪切掉單個或多個外顯子，
[0019] -通過突變（缺失或新供體/受體序列的生成）改變的剪接調節序列，
[0020] 一內含子序列的不完全去除。
[0021 ] 基因的改變的剪接會導致改變的轉錄本序列（剪接變體）。剪接變體的改變的序 列區的翻譯會導致改變的蛋白質，該蛋白質在結構和功能上與原始蛋白質明顯不同。腫瘤 相關剪接變體可生成腫瘤相關轉錄本和腫瘤相關蛋白質/抗原。這些可用作檢測腫瘤細胞 和腫瘤治療性靶向的分子標記物。腫瘤細胞的檢測，例如在血液、血清、骨髓、唾液、支氣管 灌洗液、身體分泌物和活檢組織中，可根據本發明例如在核酸提取后通過采用剪接變體特 異性寡核苷酸的PCR擴增進行實施。根據本發明，所有序列依賴性檢測系統均適用于檢測。 除PCR外，這些檢測系統是例如基因芯片/微陣列系統，Northern印跡、RNase保護測定 (RDA)等。所有檢測系統的相同之處在于檢測基于與至少一個剪接變體特異性核酸序列的 特異性雜交。然而，還可根據本發明通過識別由所述剪接變體編碼的特異性表位的抗體檢 測腫瘤細胞。所述抗體可通過用具有對所述剪接變體特異性的肽進行免疫來制備。表位與 優選在健康細胞中形成的基因產物的變體明顯不同的氨基酸特別適用于免疫。此處用抗體 對腫瘤細胞的檢測可在分離自患者的樣品上或用靜脈內施用的抗體進行成像而進行實施。 除可用于診斷外，含有新或改變的表位的剪接變體是免疫治療的令人感興趣的靶位。本發 明的表位可用于靶向治療上有效的單克隆抗體或T淋巴細胞。在被動免疫治療中，在此繼 承性地轉移識別剪接變體特異性表位的抗體或T淋巴細胞。如在其它抗原的情況下，還可 通過采用標準技術（動物免疫、用于分離重組抗體的淘洗策略）并使用包括這些表位的多 肽來制備抗體。或者，可將編碼包含所述表位的寡肽或多肽的核酸用于免疫。用于體外或體 內產生表位特異性T淋巴細胞的多種技術是已知的并已經詳細描述于例如（KesslerJH，et al.2001，Sahinetal.，1997)中，并同樣是基于使用包含剪接變體特異性表位的寡肽或多 肽或者編碼所述寡肽或多肽的核酸。包含剪接變體特異性表位的寡肽或多肽或者編碼所述 多肽的核酸還可用作活性免疫治療（疫苗接種，疫苗治療）中的藥物有效物質。
[0022] -方面，本發明涉及這樣的藥物組合物，其含有識別根據本發明鑒定的腫瘤相關 抗原并優選地對于表達或異常表達根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原的細胞具有選擇性的 試劑。在特定實施方案中，所述試劑可誘導細胞死亡、降低細胞生長、破壞細胞膜或分泌細 胞因子，并優選具有腫瘤一抑制活性。在一個實施方案中，所述試劑是選擇性與編碼腫瘤相 關抗原的核酸雜交的反義核酸。在另一個實施方案中，所述試劑是與腫瘤相關抗原選擇性 結合的抗體，特別是與腫瘤相關抗原選擇性結合的補體激活的抗體。在另一個實施方案中， 所述試劑包括多個試劑，其中每一試劑選擇性識別不同的腫瘤相關抗原，所述腫瘤相關抗 原中至少一種是根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原。識別無須直接與抑制所述抗原的活性或 表達相伴隨。在本發明的該方面中，選擇性限于腫瘤的抗原優選作為用于恢復該特異性位 點上的效應機理的標記物。在一個優選的實施方案中，所述試劑是識別HLA的上所述抗原 并溶解用此方法標記的細胞的細胞毒性T淋巴細胞。在另一個實施方案中，所述試劑是與 腫瘤相關抗原選擇性結合并由此恢復對所述細胞的天然或人工效應機理的抗體。在另一個 實施方案中，所述試劑是能增強其它特異性識別所述抗原的細胞的效應物作用的T輔助淋 巴細胞。
[0023] -方面，本發明涉及包含能夠抑制根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原的表達或活性 的試劑的藥物組合物。在一個優選的實施方案中，所述試劑是與編碼腫瘤相關抗原的核酸 選擇性雜交的反義核酸。在另一個實施方案中，所述試劑是與腫瘤相關抗原選擇性結合的 抗體。在另一個實施方案中，所述試劑包括多個試劑，其中每一試劑選擇性抑制不同的腫瘤 相關抗原，所述腫瘤相關抗原中至少一種是根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原。
[0024] 本發明還涉及含有這樣的試劑的藥物組合物，即所述試劑在使用時能選擇性增加 HLA分子和來自根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原的肽表位間的復合物的量。在一個實施方 案中，所述試劑包括一個或多個組分，該組分選自（i)腫瘤相關抗原或其部分，（ii)編碼所 述腫瘤相關抗原或其部分的核酸，（iii)表達所述腫瘤相關抗原或其部分的宿主細胞，和 (iv)分離得到的來自所述腫瘤相關抗原的肽表位和MHC分子間的復合物。在一個實施方案 中，所述試劑包括多個試劑，其中每一試劑選擇性增加MHC分子和不同腫瘤相關抗原的肽 表位間的復合物的量，這些腫瘤相關抗原中至少一種是根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原。
[0025] 本發明還涉及包括一個或多個組分的藥物組合物，所述組分選自（i)根據本發明 鑒定的腫瘤相關抗原或其部分，（ii)編碼根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原或其部分的核 酸，（iii)與根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原或其部分結合的抗體，（iv)與編碼根據本發 明鑒定的腫瘤相關抗原的核酸特異性雜交的反義核酸，（v)表達根據本發明鑒定的腫瘤相 關抗原或其部分的宿主細胞，和（vi)分離得到的根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原或其部 分與HLA分子間的復合物。
[0026] 編碼根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原或其部分的核酸在藥物組合物中可存在表 達載體中并功能性地連于啟動子。
[0027] 存在于本發明的藥物組合物中的宿主細胞可分泌腫瘤相關抗原或其部分，在表面 表達腫瘤相關抗原，或其部分或者還可表達與所述腫瘤相關抗原或其部分結合的HLA分 子。在一個實施方案中，宿主細胞內源性表達HLA分子。在另一個實施方案中，宿主細胞以 重組方式表達HLA分子和/或腫瘤相關抗原或其部分。所述宿主細胞優選是非增殖性的。 在一個優選的實施方案中，宿主細胞是抗原遞呈細胞，特別是樹突細胞、單核細胞或巨噬細 胞。
[0028] 存在于本發明的藥物組合物中的抗體可以是單克隆抗體。在其它實施方案中，抗 體是嵌合抗體或人源化抗體，天然抗體的片段或合成抗體，其均可由組合技術制備。所述抗 體可與治療上或診斷上有效的試劑偶聯。
[0029] 存在于本發明的藥物組合物中的反義核酸可含有6 - 50、特別是10 - 30、15 - 30和20 - 30個連續核苷酸的序列，這些核苷酸來自編碼根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原 的核酸
[0030] 在其它實施方案中，由本發明的藥物組合物或直接提供或經由核酸表達提供的腫 瘤相關抗原或其部分與細胞表面上的MHC分子結合，所述結合優選地導致細胞溶解反應和 /或誘導細胞因子釋放。
[0031] 本發明的藥物組合物可包括藥物學上可接受的載體和/或佐劑。佐劑可選自皂 甙、GM-CSF、CpG核苷酸、RNA、細胞因子或趨化因子。本發明的藥物組合物優選用于治療 特征是選擇性表達或異常表達腫瘤相關抗原的疾病。在一個優選的實施方案中，所述疾病 是癌癥。
[0032] 本發明還涉及治療或診斷疾病的方法，所述疾病的特征在于表達或異常表達一個 或多個腫瘤相關抗原。在一個實施方案中，所述治療包括施用本發明的藥物組合物。
[0033] -方面，本發明涉及診斷特征是表達或異常表達根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原 的疾病的方法。該方法包括（i)檢測編碼腫瘤相關抗原的核酸或其部分，和/或（ii)檢 測所述腫瘤相關抗原或其部分，和/或（iii)檢測針對腫瘤相關抗原或其部分的抗體，和/ 或（iv)在分離自患者的生物樣品中檢測具有對所述腫瘤相關抗原或其部分的特異性的細 胞毒性T淋巴細胞或輔助T淋巴細胞。在特定實施方案中，檢測包括（i)將生物樣品與試 劑接觸，所述試劑特異性地與所述編碼腫瘤相關抗原的核酸或其部分、與所述腫瘤相關抗 原或其部分、與所述抗體或者與具有對所述腫瘤相關抗原或其部分特異性的細胞毒性T淋 巴細胞或輔助T淋巴細胞結合，和（ii)檢測所述試劑和所述核酸或其部分、所述腫瘤相關 抗原或其部分、所述抗體或者所述細胞毒性T淋巴細胞或輔助T淋巴細胞間的復合物的形 成。在一個實施方案中，所述疾病的特征在于表達或異常表達多個不同的腫瘤相關抗原，且 檢測包括檢測多個編碼所述多個不同的腫瘤相關抗原或其部分的核酸，檢測多個不同的腫 瘤相關抗原或其部分，檢測多個與所述多個不同的腫瘤相關抗原或其部分結合的抗體，或 者檢測多個具有對所述多個不同腫瘤相關抗原特異性的細胞毒性T淋巴細胞或輔助T淋巴 細胞。在另一個實施方案中，將分離自患者的生物樣品與可比較的正常生物樣品進行比較。 [0034] 另一方面，本發明涉及一種確定特征是表達或異常表達根據本發明鑒定的腫瘤相 關抗原的疾病的消退、進行或發病的方法，所述方法包括監測來自患有所述疾病或疑為患 有所述疾病的患者的樣品中選自下列的一個或多個參數：（i)編碼腫瘤相關抗原的核酸或 其部分的量，（ii)腫瘤相關抗原或其部分的量，（iii)與腫瘤相關抗原或其部分結合的抗 體的量，和（iv)具有對所述腫瘤相關抗原或其部分和MHC分子間復合物特異性的細胞毒性 T細胞或輔助T細胞的量。所述方法優選地包括在第一個樣品中于第一時間點和在另一樣 品中于第二時間點測定所述參數，其中通過比較所述兩個樣品確定疾病的進程。在特定實 施方案中，所述疾病的特征在于表達或異常表達多個不同的腫瘤相關抗原且監測包括監測 (i)編碼所述多個不同腫瘤相關抗原的多個核酸或其部分的量，和/或（ii)所述多個不同 腫瘤相關抗原或其部分的量，和/或（iii)多個與所述多個不同腫瘤相關抗原或其部分結 合的抗體的量，和/或（iv)多個具有對所述多個不同的腫瘤相關抗原或其部分和MHC分子 間的復合物特異性的細胞毒性T細胞或輔助T細胞的量。
[0035] 根據本發明，檢測核酸或其部分或者監測核酸或其部分的量可使用與所述核酸或 其所述部分特異性雜交的多核苷酸探針來實施，或者通過選擇性擴增所述核酸或其所述部 分來實施。在一個實施方案中，所述多核苷酸探針含有來自所述核酸的6 - 50特別是10 - 30、15 - 30和20 - 30個連續核苷酸的序列。
[0036] 在特定實施方案中，要檢測的所述腫瘤相關抗原或其部分存在于細胞內或存在于 細胞表面上。根據本發明，可以使用與所述腫瘤相關抗原或其部分特異性結合的抗體實施 檢測腫瘤相關抗原或其部分或者監測腫瘤相關抗原或其部分的量。
[0037] 在其它實施方案中，要檢測的所述腫瘤相關抗原或其部分存在于與MHC分子特別 是HLA分子的復合物中。
[0038] 根據本發明，可以使用與所述抗體特異性結合的蛋白質或肽實施檢測抗體或監測 抗體的量。
[0039] 根據本發明，細胞毒性T細胞或輔助T細胞的檢測或監測具有對抗原或其部分和 MHC分子間復合物特異性的細胞毒性T細胞或輔助T細胞的量可使用呈遞所述抗原或其部 分和MHC分子間復合物的細胞來實施。
[0040] 用于檢測或監測的多核苷酸探針、抗體、蛋白質或肽或者細胞優選用可檢測的方 式進行標記。在特定實施方案中，可檢測的標記物為放射性標記物或酶標記物。T淋巴細胞 還可以通過檢測其增殖、其細胞因子生成和其由MHC和腫瘤相關抗原或其部分的復合物的 特異性刺激所觸發的細胞毒性活性而進行檢測。T淋巴細胞的檢測還可以通過重組MHC分 子或多個MHC分子的復合物來進行，這些MHC分子加載了來自一個或多個腫瘤相關抗原的 各個免疫原性片段，并通過與特異性T細胞受體的接觸而鑒定特異性T淋巴細胞。
[0041] 另一方面，本發明涉及治療、診斷或監測疾病的方法，所述疾病的特征是表達或異 常表達根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原，所述方法包括施用與所述腫瘤相關抗原或其部分 結合并與治療劑或診斷劑偶聯的抗體。所述抗體可以是單克隆抗體。在其它實施方案中， 所述抗體是嵌合抗體或人源化抗體或天然抗體的片段。
[0042] 本發明還涉及治療患有特征是表達或異常表達根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原 的疾病的患者的方法，所述方法包括（i)從所述患者中分離含有免疫反應細胞的樣品， (ii)在適于生成抗所述腫瘤相關抗原或其部分的細胞毒性T細胞條件下將所述樣品與表 達所述腫瘤相關抗原或其部分的宿主細胞接觸，和（iii)將細胞毒性T細胞以適于溶解表 達腫瘤相關抗原或其部分的細胞的量導入患者。本發明同樣涉及克隆抗所述腫瘤相關抗原 的細胞毒性T細胞的T細胞受體。所述受體可轉移至其它T細胞，該T細胞由此獲得所需 特異性，并如可在（iii)時導入患者。
[0043] 在一個實施方案中，所述宿主細胞內源性表達HLA分子。在另一個實施方案中，所 述宿主細胞重組性表達HLA分子和/或所述腫瘤相關抗原或其部分。所述宿主細胞優選具 有非增殖性。在一個優選的實施方案中，宿主細胞是抗原遞呈細胞，特別是樹突細胞、單核 細胞或巨噬細胞。
[0044]另一方面，本發明涉及治療患有特征是表達或異常表達腫瘤相關抗原的疾病的患 者的方法，所述方法包括（i)鑒定編碼根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原且由與所述疾病相 關的細胞表達的核酸，（ii)用所述核酸或其部分轉染宿主細胞，（iii)培養轉染的宿主細 胞從而表達所述核酸（其在獲得高轉染率時為非必須的），和（iv)將所述宿主細胞或其提 取物以適于提高對與所述疾病相關的患者細胞的免疫反應的量導入所述患者。該方法還包 括鑒定呈遞所述腫瘤相關抗原或其部分的MHC分子，此處所述宿主細胞表達經鑒定的MHC 分子并呈遞所述腫瘤相關抗原或其部分。所述免疫反應可包括B細胞反應或T細胞反應。 而且，T細胞反應可包括生成具有與呈遞腫瘤相關抗原或其部分的所述宿主細胞或表達所 述腫瘤相關抗原或其部分的患者細胞的特異性的細胞毒性T細胞和/或輔助T細胞。
[0045] 本發明還涉及治療特征是表達或異常表達根據本發明鑒定的腫瘤相關抗原的疾 病的方法，所述方法包括（i)鑒定來自表達異常量腫瘤相關抗原的患者的細胞，（ii)