一種用于治療老年性白血病的組合物的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及一種用于治療老年性白血病的組合物。
【背景技術】
[0002]老年性白血病，一般指年愈60歲的白血病患者與其他年齡組白血病一樣，是一種病因不明的原發于造血干細胞的惡性疾病，是衰老的造血微環境與白血病干細胞共同作用的結果。老年白血病多數緩慢起病，逐步進展，以乏力、面色蒼白、食欲不佳、勞動后氣急等為主。老年人白血病是全世界治療難題，迄今沒有行之有效的治療方案。傳統化療/輻射療法和造血干細胞移植是治療老年白血病的常用技術。
[0003]經典化療/輻射療法是治療多種腫瘤的常規治療技術。化療/輻射療法的原理很簡單，就是直接殺死患者腫瘤細胞。對于諸多實體瘤，局部化療/輻射療法的治療法案應用廣泛，效果較佳。然而，血液系統遍布全身，因此無法通過上述方案殺死血液腫瘤細胞。經典化療/輻射療法在殺死腫瘤細胞的同時也破壞患者體內正常的細胞，產生嚴重的毒副作用。針對腫瘤細胞的靶向化療被證明非常有效，但是僅僅局限于如CML的少數腫瘤類型。有效劑量化療老年患者難以承受，亞劑量、低劑量化療治療老年白血病難以有效殺死白血病細胞。因此，化療/輻射療法的嚴重副作用，不適合于老年白血病患者。
[0004]干細胞療法是治療諸多惡性血液腫瘤、免疫缺陷、自身免疫等疾病的重要途徑。治療用的干細胞類型有多種，但當前應用最廣的是各種類型的成體干細胞，如造血干細胞、間充質干細胞等。干細胞療法的工作原理是部分或者完全重建因疾病、損傷、衰老等因素而失去正常功能的組織與器官、甚至某個系統。造血干細胞移植是最早應用于臨床、能夠徹底治愈部分血液疾病的干細胞療法。造血干細胞療法將造血干細胞植入患者體內，能夠歸巢到骨髓定居，進行自我更新，并且增殖產生所有成熟造血細胞，最終重建整個造血系統。因此，在結合化療等預處理方案清除患者體內的腫瘤細胞后，移植自體來源或者配型合適的異體來源造血干細胞，可以重建造血及免疫系統，徹底治愈部分血液病。由于造血干細胞移植需要對患者進行化療等預處理才能實現成功植入，這個預處理過程對老年患者幾乎無法承受。此外，由于衰老原因，造血干細胞移植本身就很難成功植入老年患者，主要原因是老年人骨髓微環境老化，以及整個造血支持系統的老化。當前，造血干細胞移植受到造血干細胞來源短缺、移植排斥等問題局限。因此，一種折中途徑就是降低供體造血干細胞的配型要求，達到植入和造血重建，結合間充質干細胞療法抑制移植物抗宿主的免疫排斥(GVHD)。這種折中方案適合兒童和青壯年，但因患者身體條件，不適合老年患者。總之，由于老年患者難以承受移植前的預處理，并且衰老的造血微環境導致很難植入供體造血干細胞。因此，造血干細胞移植在治療老年白血病方面受到局限，迄今成功甚少，亟需尋求一種用于治療老年性白血病的方法或藥物。
【發明內容】
[0005]有鑒于此，本發明大量實驗以期找到一種藥物組合，實現衰老骨髓微環境年輕化，成功壓制老年白血病腫瘤細胞，能夠在一定時期內恢復造血穩態，提高了患者生活質量。
[0006]為了實現上述發明目的，本發明提供以下方案:一種用于治療老年性白血病的組合物，包括:
[0007]年輕的骨髓間質干細胞、維生素C以及用于維持年輕骨髓間質干細胞生理活性的生理鹽水。
[0008]作為優選，年輕骨髓間質干細胞濃度為4-6 X 106個/ml。
[0009]更優選地，年輕骨髓間質干細胞濃度為5 X 106個/ml。
[0010]作為優選，維生素C濃度為40-60 μ g/ml。
[0011 ] 更優選地，維生素C濃度為50 μ g/ml。
[0012]作為優選，所述骨髓間質干細胞為間充質干細胞與骨髓內皮細胞的組合。
[0013]更優選地，所述間充質干細胞與骨髓內皮細胞的比例為90-99:1:10。
[0014]在本發明的實施例中，所述間充質干細胞與骨髓內皮細胞的比例為99:1。
[0015]更優選地，年輕的骨髓間質干細胞使用劑量為0.5-1.5X 107cells/kgo推薦的使用方式是髓腔內注射。
[0016]本發明還提供所述組合物在用于制備治療老年性白血病的用途。
[0017]本發明實現老年白血病動物長期帶病生存，長期實現老年白血病病理緩解、延長患者生命的創新技術。采用本發明所述藥物組合物定期輸注還可以完全控制疾病的發展，大大延長患者壽命，沒有化療和預處理出現的毒副作用。
[0018]本發明所述組合物應用于治療老年人骨髓增生異常疾病，以及其他普通髓系增生性疾病的緩解輔助治療，沒有毒副作用，有效緩解患者癥狀，實現長期帶病生存，提高生存質量，延長患者壽命，具有良好的應用前景。
[0019]術語與定義
[0020]年輕的骨髓間質干細胞:取自6月內健康小鼠、大鼠骨髓間質干細胞，或者30歲以下健康人骨髓間質干細胞，原代培養可以傳代6代以內的細胞。
【附圖說明】
[0021 ] 圖1.YBMSC免疫表型鑒定；
[0022](A)YBMSC分離及培養不同代次顯微鏡照片；
[0023](B)流式分析表明 YBMSC 的免疫表型為 CD31-，CD45-，Terll9_，PDGFRa+，PDGFRb+，CD51+，CD105+O
[0024]圖2老年骨髓增生異常疾病模型參數鑒定；
[0025]圖3輸注YBMSC有效緩解老年骨髓增生異常。
【具體實施方式】
[0026]本發明公開了一種用于治療老年性白血病的組合物，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的產品、方法已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
【發明內容】
、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。
[0027]本發明所述骨髓間質干細胞，可以按照下述實施例自行制備，也可購自市場。如實施例1中自行制備的年輕骨髓間質干細胞，可購自Cyagene，貨號MUBMX-01001。
[0028]下面結合實施例，進一步闡述本發明:
[0029]實施例1年輕骨髓間質干細胞的分離培養
[0030](l)Day 0，安樂死小鼠，取出小鼠(6個月以內)的4條腿放在6cm培養皿中，把肉盡可能剝離干凈，用含有10x雙抗的DPBS依次洗3次后放在室溫的DMEM:F12中(有文獻提到室溫比放置在冰上更好)，使用5ml注射器用DMEM:F12將骨髓盡可能吹干凈，將骨髓用70um濾網過濾，收集骨頭和濾網上的碎骨片，放在預先加入1.5ml DMEM:F12培養基的六孔板的一個孔中，用剪刀把骨頭盡可能剪碎，再加入1.5ml配好的膠原酶II (在避光的1.5mlEP管中，已經用DMEM:F12配好)，這樣膠原酶II的終濃度為lmg/ml，用1ml移液器將剪碎的骨片吹散，均勻撲滿整個孔，小心放入培養箱中37°C消化l_2h(文獻中是用帶有搖床的培養箱消化，靜置消化1.5-2h效果也可以)。消化完成后將消化液吸棄，用DMEM:F12洗3次，加入3ml DMEM:F12+10% FBS(Gibico)完全培養基放置在37°C培養箱培養3d(盡可能放置在里面角落里，以保證3d期間不要挪動它)。
[0031](2)Day 3，將培養基吸棄，骨片轉移到另一個新孔再培養3d，洗掉培養基和骨片的孔用F12洗3遍，換3ml新的完全培養基繼續培養6d(第三天已經可以看到在骨片下面及周圍有許多MSC細胞爬出)。
[0032](3) Day 6，換液，吸棄培養基，加入3ml新的完全培養基。
[0033](4)Day 9，傳代，吸棄培養基，用DMEM:F12洗一遍，加入0.5ml 0.25%胰酶37°C消化2.5min