甲氰咪胍在制備自身免疫性結膜炎治療藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及醫藥技術領域，進一步涉及物質的新的醫藥用途，具體涉及甲氰咪胍 在制備自身免疫性結膜炎治療藥物中的應用。
【背景技術】
[0002] 甲氰咪胍又名西咪替丁、泰胃美，作為可選擇性H2受體拮抗劑，在現有技術中主 要用于消化性潰瘍的治療，其藥理作用主要包括抑制胃酸分泌、抑制基礎和夜間胃酸分泌， 也能抑制由組胺、分肽胃泌素、胰島素和食物等刺激引起的胃酸分泌，并使其酸度降低，對 因化學刺激引起的腐蝕性胃炎有預防和保護作用，對應激性胃潰瘍和上消化道出血也有明 顯療效。西咪替丁為白色或類白色結晶性粉末；幾乎無臭，味苦；在甲醇中易溶，在乙醇中 溶解，在異丙醇中略溶，在水中微溶，在稀鹽酸中易溶。
[0003] 結膜炎是眼科常見的致盲眼病之一。按照病因可分為感染性結膜炎和非感染性結 膜炎。其中，非感染性結膜炎被認為是一類自身免疫性眼病。現有技術中對結膜炎的治療 方法主要為散瞳、抗炎和免疫治療，其中散瞳和抗炎主要是針對癥狀所采取的治療手段，而 免疫治療更側重于去除病因。現有技術中針對結膜炎的免疫治療藥物主要為免疫抑制劑， 例如硫唑嘌呤通過競爭性的抑制腺嘌呤和鳥嘌呤，從而抑制DNA合成及RNA轉錄，減少外周 T淋巴細胞、B淋巴細胞數量，抑制免疫淋巴反應，而環磷酰胺對于靜止期和分裂期的淋巴 細胞均具有細胞毒性作用，從而抑制免疫反應。
【發明內容】
[0004] 本發明旨在針對現有技術的技術缺陷，提供甲氰咪胍在制備自身免疫性結膜炎治 療藥物中的新用途，從而為自身免疫性結膜炎的治療提供一種新的藥物選擇。
[0005] 本發明要解決的另一技術問題是擴展了甲氰咪胍作為藥物的適應癥范圍；
[0006] 本發明要解決的再一技術問題是提升自身免疫性結膜炎的治療效果。
[0007] 為解決以上技術問題，本發明采用以下技術方案：
[0008] 式⑴化合物用于制備自身免疫性結膜炎治療藥物的應用，
[0009]
[0010] 優選地，所述藥物是以降低Thl淋巴細胞含量為藥理作用的藥物。
[0011] 優選地，所述藥物是以降低Thl7淋巴細胞含量為藥理作用的藥物。
[0012] 優選地，所述藥物是以抑制Thl淋巴細胞分泌IFN-γ為藥理作用的藥物。
[0013] 優選地，所述藥物是以抑制Thl7淋巴細胞分泌IL-17A為藥理作用的藥物。
[0014] 優選地，所述藥物是以抑制眼結膜巨噬細胞浸潤為藥理作用的藥物。
[0015] 在以上技術方案中，所述藥物是以口服形式給藥的內用藥。本發明創新性的發現 甲氰咪胍可調節免疫系統效應，從而用于治療相關病理損傷。具體而言，可下調Thl細胞亞 群、Thl7細胞亞群比例，維持血眼結膜屏障完整性，抑制巨噬細胞浸潤，抑制眼內炎癥反應。 同時能夠抑制眼結膜STATUSTAT3及其磷酸化蛋白表達量，抑制NF-κBp65的表達量，其抗 炎癥作用是通過抑制STAT1、STAT3途徑及NF-κB信號轉導通路實現的。
[0016] 基于甲氰咪胍的以上新性質，本發明確定了利用其治療結膜炎的新用途，臨床應 用發現，甲氰咪胍對自身免疫性結膜炎的治療起效快、療效確切，且未發現副作用，具有突 出的推廣前景。
【附圖說明】
[0017] 圖1是本發明實施例中對照組小鼠和甲氰咪胍治療組實驗動物眼底圖像；其中A 部分為對照組實驗動物眼底表現，B部分為甲氰咪胍治療組實驗動物眼底表現。
[0018] 圖2是本發明實施例中對照組小鼠和甲氰咪胍治療組實驗動物臨床評分結果。
[0019] 圖3是本發明實施例中對照組小鼠和甲氰咪胍治療組實驗動物組織學評分結果。
[0020] 圖4是本發明實施例中對照組小鼠和甲氰咪胍治療組實驗動物眼結膜血管灌注 造影眼結膜鋪片；其中A部分為對照組小鼠結果，B部分為甲氰咪胍治療組小鼠結果。
[0021] 圖5是本發明實施例中對照組小鼠和甲氰咪胍治療組實驗動物輔助T淋巴細胞亞 群分布情況圖。
【具體實施方式】
[0022] 以下將對本發明的【具體實施方式】進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節，在 以下實施例中對屬于公知的結構或功能將不進行詳細描述。
[0023] 以下實施例中所使用的近似性語言可用于定量表述，表明在不改變基本功能的情 況下可允許數量有一定的變動。因此，用"大約"、"左右"等語言所修正的數值不限于該準 確數值本身。在一些實施例中，"大約"表示允許其修正的數值在正負百分之十（10%)的 范圍內變化，比如，"大約1〇〇"表示的可以是90到110之間的任何數值。此外，在"大約第 一數值到第二數值"的表述中，大約同時修正第一和第二數值兩個數值。在某些情況下，近 似性語言可能與測量儀器的精度有關。
[0024] 除有定義外，以下實施例中所用的技術和科學術語具有與本發明所屬領域技術人 員普遍理解的相同含義。
[0025] 1患病模型的建立
[0026] 取6-8周齡小鼠，體重15_20g，飼養于標準化無特定病原體動物（SPF)級動物 房，實驗動物用標準顆粒飼料喂養，自由飲水攝食，室溫為（22±2)°C，，適應性飼養2-7d 后皮下注射乳化的IRBPi2。于模型組小鼠一側后足掌墊、雙側尾根及后臀部，共注射抗原 300μg，同時腹腔內注射百日咳菌液1μg破壞小鼠的全身免疫耐受，以增強免疫效果，免 疫當天記作第0天（day0)。
[0027] 2給藥方式
[0028]自免疫造模前3天（day-3)開始以25mg/kg·day的劑量每日連續對甲氰咪胍組 小鼠進行灌胃給藥，直至免疫造模后第21天（day21)。由于甲氰咪胍為有機化合物，溶于 有機溶劑DMSO而不溶于PBS，故甲氰咪胍以10μ1DMS0+140μ1PBS溶解，對照組采用同樣的 方式以空白溶媒10μ1DMS0+140μ1PBS灌胃處理。
[0029] 3治療效果觀察
[0030]于免疫后第12天（day12)起每日連續觀察對照組及甲氰咪胍組小鼠眼底損傷情 況，方法為：復方托吡卡胺滴眼液充分散瞳后，使用雙目間接檢眼鏡，輔助+90D前置鏡暗室 檢查。
[0031] 于免疫后第21天（day21)對兩組小鼠進行小鼠眼底損傷的臨床評分，評分標準 見表1。由兩位眼科醫師共同對所有小鼠雙側眼底損傷情況進行隨機雙盲打分。
[0032] 表1患病小鼠臨床評分標準
[0033]
[0034] 4小鼠眼底圖像采集
[0035] 于免疫后第21天（day21)對兩組小鼠進行眼底圖像采集。用復方托吡卡胺滴眼 液充分散瞳、鹽酸奧布卡因滴眼液表面麻醉，角膜表面涂以醫用透明質酸鈉凝膠，上覆蓋玻 片消除角膜曲率的影響。以〇度耳鏡窺入眼底，計算機成像系統采集眼底圖像。
[0036] 分別取對照組和甲氰咪胍組小鼠眼球的HE染色切片在光學顯微鏡下觀察眼結膜 及玻璃體腔的組織結構、炎性細胞浸潤情況，并進行組織病理學評分，評分標準見表2。由兩 位眼科病理學醫師共同對兩組小鼠眼球切片分別進行隨機雙盲打分。
[0037] 表2患病小鼠組織病理學評分標準
[0038]
[0039] 5伊文思藍（EB)血管灌注造影眼結膜鋪片
[0040] 于免疫后第21天（day21)將對照組和甲氰咪胍組分別取4只小鼠，進行EB血管 灌注造影眼結膜鋪片。
[0041] (1)麻醉：稱重后10%水合氯醛以30011^/1^腹腔注射麻醉；
[0042] (2)EB注射：29G針頭穿刺入尾靜脈內注射2%EB100μ1，循環2小時；
[0043] (3)固定：處死小鼠，摘取眼球，置于濃度為4%多聚甲醛溶液中固定3小時；
[0044] (4)剝離眼結膜：在手術顯微鏡下用角鞏膜剪于眼球角鞏膜緣后約0. 5mm處剪開， 除去角膜、虹膜，娩出晶狀體和玻璃體。將眼結膜以視盤為中心放射狀剪開4刀，置于載玻 片上，用顯微有齒鑷小心將鞏膜翻轉，完整分離出眼結膜，平鋪于載玻片上；
[0045] (5)封片：滴少許封片劑后以蓋玻片封片；
[0046] (6)照相：立即置于激光掃描共聚焦熒光顯微鏡下觀察、照相。
[0047] 6小鼠脾細胞流式細胞術
[0048] 于免疫后第21天（day21)檢測治療組小鼠和PBS對照組脾臟Thl7細胞、Thl細 胞占單個核細胞比例，Treg細胞、ThO細胞分別