的 DMEM(高糖）培養基，于37°C，5%C〇2及飽和濕度的培養箱中培養，用0. 25%膜蛋白酶消化 傳代，取對數生長期細胞用于實驗。
[0043] 2. 2. 2藥物抑制細胞增殖實驗
[0044] 取對數生長期的細胞，將細胞制成細胞懸液，按一定的濃度鋪入96孔板中，待細 胞貼壁生長狀態良好時加入待測藥物佑1-巧終濃度0、5、10、20、40、80、100^1與細胞共解 24、48小時后，加入10y1MTT(終濃度0. 5mg/ml)置培養箱反應4小時，棄液，加入100y1 DMSO充分溶解5分鐘，最后在0D570/630nm處測定吸光值。細胞存活率（％)=給藥組 OD巧70nm) /對照組OD巧70nm)X100 %，對照組加含等量DMSO的細胞培養液而不加任何藥 物。
[0045] 2. 2. 3統計學處理
[0046] 實驗數據均用平均值+標準差表示，采用SPSS18統計軟件進行分析，W化e-Way ANOVA方式進行方差分析，兩兩比較采用LSD法，P<0. 05為具有統計學顯著性差異標準。
[0047]2. 3實驗結果
[0048] 實驗結果如圖I所示：GM-H作用PANC-I細胞24小時后，當GM-H的終濃度為 5、10、20yM時，對PANC-1細胞增殖的抑制作用與溶媒對照組比較均沒有顯著性差異 (P〉0. 05)，而當終濃度為40、80、100yM時，都能較顯著抑制PANC-I細胞增殖（P<0. 001)， 且其抑制程度呈劑量依賴性下降，抑制率分別為巧0.89±11. 81) %、（16. 57 + 3.67) %、 (12. 93 + 2. 65) % ;GM-H作用PANC-I細胞48小時后，當GM-H的終濃度為5、10yM時，對 PANC-I細胞增殖的抑制作用與溶媒對照組比較均沒有顯著性差異（P〉0. 05)，而當終濃度 為20yM時，能顯著抑制PANC-I細胞增殖（P<0. 05)，抑制率為（82. 03 + 17. 52) %，濃度為 40、80、100yM時，都能較顯著抑制PANC-I細胞增殖（P<0. 001)，且其抑制程度呈劑量依賴 性下降，抑制率分別為（32. 62 + 6. 04) %，（10. 43 + 2. 64) %，（6. 07 + 1. 58) %，表明GM-H對 PANC-I細胞的增殖的抑制作用在高濃度時具有明顯的劑量依賴性和時間依賴性。
[0049] 實施例3GM-H抑制人膜腺癌細胞PANC-I的遷移
[0050] 3. 1實驗材料：
[0051] 人膜腺癌細胞PANC-I購自上海中科院細胞所，24孔板購自丹麥化ermoNUNC公 司，DMEM(高糖），胎牛血清，青霉素和鏈霉素購自美國Invitrogen公司，化answell小室 (8Jim孔徑）購自美國Mi11ipore。 陽05引 3. 2實驗方法：
[0053] 人膜腺癌細胞PANC-l用含10%胎牛血清，100U/ml青霉素和100iig/ml鏈霉素的 DMEM(高糖）培養基，于37 °C，5 %C〇2及飽和濕度的培養箱中培養，用0. 25 %膜蛋白酶消化 傳代，取對數生長期細胞用于實驗。
[0054] 人膜腺癌細胞PANC-I(2XIO4個細胞/孔）接種于小室（8ym孔徑）上室中。上 室1%血清，下室10%血清。61寸終濃度0、1.25、2.5、5、10、20^1與細胞作用24、48小時 后，分別取出小室，棄培養基，用棉簽輕輕地擦去上室未侵襲細胞，固定4%多聚甲醒中，用 0. 1 %結晶紫染色，并于顯微鏡下計數。 陽化5] 3. 2. 2統計學處理
[0056] 實驗數據均用平均值+標準差表示，采用SPSS18統計軟件進行分析，W化e-Way ANOVA方式進行方差分析，兩兩比較采用LSD法，P<0. 05為具有統計學顯著性差異標準。
[0057] 3. 3實驗結果
[0058] 實驗結果如圖2所示：不同濃度或不同作用時間的GM-H均對PANC-I細胞的遷移 有較顯著的抑制作用（P<〇. 001)，隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長，抑制遷移能力也 相應的增加，遷移抑制率分別為巧8. 48 + 18. 77)%，（47. 10 + 6. 39)%，（31.93 + 6. 81)%， (20. 68 + 9. 04) %，（10. 28 + 7. 07) %，表明GM-H抑制PANC-I細胞遷移的作用具有明顯的劑 量依賴性和時間依賴性。
[0059] 實施例4GM-H抑制人膜腺癌細胞PANC-I的侵襲 W60] 4. 1實驗材料：
[0061] 人膜腺癌細胞PANC-I購自上海中科院細胞所，24孔板購自丹麥化ermoNUNC公 司，DMEM(高糖），胎牛血清，青霉素和鏈霉素購自美國Invitrogen公司，化answell小室 (8Jim孔徑）購自美國Millipore,人工重組基底膜（Matri-gel)購自美國抓公司。 W62] 4. 2實驗方法：
[0063] 人膜腺癌細胞PANC-l用含10%胎牛血清，100U/ml青霉素和100iig/ml鏈霉素的 DMEM(高糖）培養基，于37°C，5%C〇2及飽和濕度的培養箱中培養，用0. 25%膜蛋白酶消化 傳代，取對數生長期細胞用于實驗。 W64] 細胞侵襲實驗所用小室（8ym孔徑）先用Matrigel包埋。人膜腺癌細胞PANC-U5X104個細胞/孔）接種于小室（8i^m孔徑）上室中。上室l%血清，下室10%血 清。GM-H終濃度0、1. 25、2. 5、5、10、20yM與細胞作用24、48小時后，分別取出小室，棄培養 基，用棉簽輕輕地擦去上室未侵襲細胞，固定4%多聚甲醒中，用0.1%結晶紫染色，并于顯 微鏡下計數。 陽0化]4. 2. 2統計學處理
[0066] 實驗數據均用平均值+標準差表示，采用SPSS18統計軟件進行分析，W化e-Way ANOVA方式進行方差分析，兩兩比較采用LSD法，P<0. 05為具有統計學顯著性差異標準。
[0067] 4. 3實驗結果
[0068] 實驗結果如圖3所示：GM-H作用PANC-I細胞24小時后，當GM-H的終濃度為 1. 25yM時，對PANC-I細胞侵襲的沒有抑制作用（P〉0. 05)，而當終濃度為2. 5yM時， 能顯著抑制PANC-I細胞侵襲（P<0. 01)，抑制率為化7. 22 + 15. 00) %，終濃度為5、10、 20yM時，能較顯著抑制PANC-I細胞侵襲（P<0. 001)，抑制率分別為（42. 03 + 6. 06) %， (18. 95 + 9. 79) %，（1. 13 + 0. 81) % ;GM-H作用PANC-I細胞 48 小時后，當GM-H的終濃 度為1.25yM時，能顯著抑制PANC-I細胞侵襲（P<0. 01)，抑制率為（82. 01 + 6. 23) %， 終濃度為2. 5、5、10、20yM時，能較顯著抑制PANC-I細胞侵襲（P<0. 001)，抑制率分別 為巧4. 61 + 5. 54)%，（32. 23 + 8. 87)%，（7. 25 + 5. 66)%，（0.03 + 0. 03)%，表明GM-H對 PANC-I細胞侵襲的抑制作用具有一定的劑量依賴性和時間依賴性。
[0069] 本發明所設及的多個方面已做如上闡述。然而，應理解的是，在不偏離本發明精神 之前提下，本領域專業人員可對其進行等同改變和修飾，所述改變和修飾同樣落入本申請 所附權利要求的覆蓋范圍。
【主權項】
1. 式（I )化合物在制備預防或治療胰腺癌生長的藥物或保健品中的應用，2. 如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的式（I )化合物是作為唯一的原料藥 應用于預防或治療胰腺癌生長的藥物或保健品的制備中。3. 如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的胰腺癌細胞為人胰腺癌細胞PANC-I。4. 式（I )化合物在制備預防或治療胰腺癌轉移的藥物或保健品中的應用，5. 如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述的式（I )化合物是作為唯一的原料藥 應用于預防或治療胰腺癌生長的藥物或保健品的制備中。6. 如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述的胰腺癌細胞為人胰腺癌細胞PANC-I。7. -種可防治胰腺癌生長和轉移的藥物組合物，其特征在于，它包含治療有效量的式 (I )化合物：8. -種可防治胰腺癌生長和轉移的保健品，其特征在于，它包含治療有效量的式（I ) 化合物：
【專利摘要】本發明涉及醫藥領域，特別是涉及GM-H化合物的醫藥用途及其藥物組合物。本發明的GM-H化合物可用于防治胰腺癌的生長和轉移。
【IPC分類】A61K31/122, A23L33/10, A61P35/00
【公開號】CN105343036
【申請號】CN201510852087
【發明人】徐宏喜, 沈凱凱, 路方方, 付文衛, 譚紅勝
【申請人】上海中醫藥大學
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年11月27日