一種治療癲癇病的銀杏葉提取物及其用圖
【專利說明】一種治療癲癇病的銀杏葉提取物及其用途
[0001](一）技術領域：本發明涉及一種植物藥提取物，具體地說是一種治療癲癇病的銀 杏葉提取物。
[0002] (二）【背景技術】：癲癇，一種腦部疾病狀態，以具有能夠產生癲癇發作的持久易患 性和出現相應的神經生物、認知、心理及社會等方面的后果為特征。根據腦部病變和放電 部位的不同，癲癇的發作有多種形式，如精神上的異常，運動感覺上的異常，行為認知上的 異常和記憶功能的異常等。癲癇并非獨立的疾病，而是一組疾病或綜合癥，其病因復雜、臨 床表現多樣。癲癇對人類的健康和社會經濟的發展構成了很大的危險，因此世界衛生組織 (WHO)將癲癇列為21世紀攻克目標之一。
[0003] 根據WHO在1997年的統計報告，發達國家的患病率為5. 0%。，經濟轉軌國家患病率 為6. 1%。，發展中國家患病率為7. 2%。，不發達國家患病率為11. 2%。。截止1997年全球就有 5000萬癲癇患者。我國六城市（長沙、成都、上海、廣州、銀川、哈爾濱）患病率為4. 6%。，在 所有的癲癇患者中，約有30%~40%存在不同程度的認知功能損害以及學習記憶功能的 減退。認知功能是人類和動物的大腦的高級神經活動，可簡單的理解為四方面：接受功能， 學習記憶功能，思維功能和表達功能。其中最主要的是學習記憶功能。記憶是人腦對經驗過 事物的識記、保持、再現或再認，它是進行思維、想象等高級心理活動的基礎。人類記憶與大 腦海馬結構、大腦內部的化學成分變化有關。記憶與人類正常的生活和工作息息相關。隨 著現代神經學的研究發現，日常生活中的短期記憶都儲存在海馬體中，海馬及其周邊回路 是人類記憶從短期到長期的關鍵區域，同時也影響了其他大腦區域的記憶儲存。而顳葉癲 癇能在一定程度上損害海馬區細胞，進而導致記憶的損傷。反復癲癇發作可以導致海馬結 構發生病理變化，包括海馬神經元的變性壞死、突觸間隙異常增寬及突觸后膜的密度改變、 海馬異常苔蘚樣發芽以及由此導致的突觸聯系異常。
[0004] 隨著對癲癇病研究的不斷深入，臨床發現絕大多數癲癇患者在忍受癲癇發作痛苦 外，還要面對注意力無法集中，學習記憶能力減退等壓力。這些都極大的降低了癲癇患者的 生活質量，所以說癲癇病患者認知功能障礙的治療恢復是改善提高患者生活品質的重中之 重。
[0005] 近年來，由于癲癇患者的數量迅速增加，病癥呈現多元化、復雜化趨勢。而臨床常 用藥物雖然種類繁多，但大多存在用藥劑量很難控制，長期使用會存在不良反應，療效不明 顯，價格較高等問題。隨著藥物的大量服用，越來越多的患者對藥物的耐受性不斷提高，只 能加大服藥劑量或者換服新藥，治療成本隨之上升，且副作用增大。
[0006] 隨著中藥研究的日益深入，各種中藥抗癲癇的機理不斷被闡明，中藥抗癲癇藥效 的開發成為熱點。銀杏葉作為傳統中藥，被廣泛應用到心腦血管系統和神經系統等疾病的 治療中，其提取物在藥物代謝和毒理作用方面的特點也已有較為明確的描述，因此在同類 藥物的篩選過程中具有優勢。銀杏葉中含有多種活性成分，包括銀杏內酯、黃酮醇苷、原花 青素、聚戊烯醇、雙黃酮、有機酸等。因此，提供一種新的銀杏葉提取物和新用途具有十分重 要的價值。
[0007] 考察藥物的預防作用，一般先給藥再制作動物模型；考察藥物的治療作用，一 般先制作動物模型再給藥。銀杏葉提取物及其制劑在多篇碩士論文中提及具有一定的 預防癲癇發作的作用，即預先給藥，再制作癲癇動物模型，可以使癲癇模型鼠的癲癇發作 次數和癥狀減輕，但對于先造模后給藥的治療作用卻不明顯。文獻《不同劑量銀杏葉提 取物對紅藻氨酸致癇大鼠神經肽Y蛋白表達的影響》（王芳，等.鄭州大學學報：醫學 版.2014 (2): 207-210，）公開了先造模再給藥，但其給藥方式是腹腔注射，且給藥劑量很 大，為100~200mg/kg，并給藥后24h內全部處死動物，這樣很難判斷銀杏葉提取物對癲癇 病的長期療效。文獻《銀杏葉提取物對癲癇患者認知功能及腦脊液乙酰膽堿含量的影響》 (段方榮，等.河北醫學，2014(12期）：2015-2017.)結果顯示銀杏葉片能明顯改善癲癇 患者的認知功能，這種作用于銀杏葉片增強中樞膽堿能神經系統的功能促進Ach的釋放相 關；但研究結果顯示，兩組治療后的療效比較無顯著差異，未提示銀杏葉提取物能減少或減 輕患者的癲癇發作。《銀杏葉（達那康）添加治療癲癇療效觀察》（彭建偉，等.中國實用 醫刊，2013, 40(8) :46-49.)公開了銀杏葉片與其他抗癲癇藥物聯用能明顯減少癲癇患者 的發作頻率，這種作用可能與銀杏葉（達納康）獨特的清除自由基作用有關，提示自由基 生成與清除平衡紊亂在癲癇發生中的價值。《銀杏葉提取物輔助治療癲癇臨床觀察》（解旭 東，等.腦與神經疾病雜質，2000,8 (3) :172-173)公開了抗癲癇藥物加用口服銀杏葉提取 物天保寧治療癲癇總有效率58. 65 %，其抗癲癇作用主要來自銀杏內酯B和槲皮素。在已有 的報道中發現，銀杏葉提取物抗癲癇的作用機制與抗氧化、抗細胞凋亡、保護神經細胞、調 節N-甲基-D-天冬氨酸受體、γ -氨基丁酸受體、神經肽Y、c-Fos等蛋白的表達及調節Ca 離子通道有關。因此，目前尚無文獻報道單獨應用銀杏葉提取物能減少或減輕患者的癲癇 發作，且銀杏葉提取物抗癲癇作用主要來自銀杏內酯B、槲皮素藥效成分。
[0008] 專利《一種銀杏葉提取物及其制備方法和應用》（CN104147054A)公開了一種銀 杏葉提取物，其特征在于，總銀杏萜內酯的含量為6%~12% (w/w)，總黃酮含量為40%~ 60% (w/w)，原花青素含量為30%~50% (w/w)，總銀杏萜內酯％ +總黃酮％ +原花青素％ >90%，且總黃酮醇苷含量24%~32% (w/w)，原花青素/總黃酮醇苷的含量比值為1~2。 這種銀杏葉提取物的抗氧化活性、神經保護活性、抗糖尿病及其并發癥的活性比市面上常 用的銀杏葉提取物更好，其用于制備預防或治療神經系統疾病的藥物，可用于治療糖尿病 性白內障、糖尿病性視神經病變、糖尿性視網膜脂血癥。
[0009] 因此，目前已上市的銀杏葉提取物其他抗癲癇藥物聯合用應用，具有一定的抗癲 癇作用，但其單獨應用效果不佳。
[0010](三）
【發明內容】
：本發明結合中醫理論，以及多年對銀杏葉活性成分作用研究和實 驗研究，提供一種具有抗癲癇作用的銀杏葉提取物，其可用于制備治療癲癇病的藥物中的 用途。
[0011] 本發明所述的癲癇病為癲癇持續性發作、癲癇后大腦內異常的癇性放電、癲癇引 發的學習記憶障礙等。
[0012] 本發明所述的用于治療癲癇病的銀杏葉提取物，其藥效成分組成為：總銀杏萜內 酯的含量為10 %~12 % (w/w)，總黃酮含量為40 %~44 % (w/w)，原花青素含量為45 %~ 50% (w/w)，且總銀杏萜內酯％ +總黃酮％ +原花青素％ >95%，總黃酮醇苷含量24%~ 26% (w/w) 〇
[0013] 本發明為了具有更好的抗癲癇作用，進一步優選，銀杏葉提取物的藥效成分組成 為總銀杏萜內酯的含量為11 % (w/w)，總黃酮含量為40% (w/w)，原花青素含量為48% (w/ w)，總銀杏萜內酯％ +總黃酮％ +原花青素％ = 99 %，且總黃酮醇苷含量25 % (w/w)。
[0014] 本發明提供的用于治療癲癇病的銀杏葉提取物，對癲癇大鼠癲癇發作次數、腦電 圖、海馬組織形態、學習記憶認知功能和腦源性神經營養因子（BDNF)，膠質細胞源性神經營 養因子（GDNF)，血管內皮生長因子（VEGF)等蛋白表達的實驗結果顯示，本發明所提供的銀 杏葉提取物可以減少癲癇發作次數、改善腦電圖、海馬組織形態和學習記憶認知能力，其作 用機制為：提高BDNF，⑶NF，VEGF三種蛋白的表達，有效地促進神經干細胞分化成相關神經 元細胞。
[0015] 本發明發現，當銀杏葉提取物的藥效成分組成如下：總銀杏萜內酯的含量為 10 %~12 % (w/w)，總黃酮含量為40 %~44 % (w/w)，原花青素含量為45 %~50 % (w/ w)，且總銀杏萜內酯％ +總黃酮％ +原花青素％ >95 %，總黃酮醇苷含量24%~26% (w/ w)，且原花青素/總黃酮的含量比值為1. 05~1. 25,原花青素/總銀杏萜內酯的含量比值 為4. 0~4. 4時，對大鼠癲癇發作次數的影響試驗結果顯示，銀杏葉提取物以40mg/kg濃 度灌胃4周、8周后，與模型組相比，能減少大鼠癇性發作的次數，有顯著性統計學意義（P <0.01);對癲癇大鼠腦電圖的影響試驗結果顯示，銀杏葉提取物以40mg/kg濃度灌胃4 周、8周后，癲癇大鼠散在的棘波、尖波出現數量明顯低于其他組；對癲癇大鼠海馬組織形 態的影響試驗結果顯示，采用銀杏葉提取物干預后的癲癇大鼠胞漿內尼氏小體豐富，并未 見到核固縮等神經元變性受損特征；對癲癇大鼠學習記憶障礙的影響試驗結果顯示，采用 銀杏葉提取物干預后的大鼠進入目標區區域的次數顯著高于其他組。
[0016] CN104147054A公開了一種銀杏葉提取物，其藥效成分組成為總銀杏萜內酯的含量 為6%~12% (w/w)，總黃酮含量為40%~60% (w/w)，原花青素含量為30%~50% (w/w)， 總銀杏萜內酯％ +總黃酮％ +原花青素％ >90%，且總黃酮醇苷含量24%~32% (w/w)，原 花青素/總黃酮醇苷的含量比值為1~2 ;但本發明人發現，只有當原花青素含量大于總黃 酮，且原花青素/總黃酮的含量比值為1. 2,原花青素/總銀杏萜內酯的含量比值為4