藥物組合物在制備預治甲型流感病毒感染藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及醫藥領域，具體涉及一種藥物組合物在制備預防或治療甲型HlNl流 感病毒感染的藥物中的應用。
【背景技術】
[0002] 甲型HlNl流感病毒（Swine influenza virus, SIV)是A型流感病毒，屬于正粘病 毒科（Orthomyxoviridae)甲型流感病毒屬（InfluenzavirusA),攜帶有HlNl亞型豬流感 病毒毒株，包含有禽流感、豬流感和人流感三種流感病毒的核糖核酸基因片斷。通常，甲型 HlNl流感病毒存在種屬特異性，只感染豬，但有時人可能通過接觸受感染的生豬或接觸被 甲型HlNl流感病毒感染的環境，或通過與感染甲型HlNl流感病毒的人發生接觸而導致感 染甲型HlNl流感病毒。
[0003] 甲型HlNl流感是一種具有高度傳染性的急性呼吸道疾病，人感染甲型HlNl流感 后的癥狀與普通人流感相似，包括發熱、咳嗽、喉痛、身體疼痛、頭痛、發冷和疲勞等，有些還 會出現腹瀉和嘔吐，重者會繼發肺炎和呼吸衰竭，甚至死亡。2009年3月底起，墨西哥、美國 等地接連暴發甲型HlNl流感病毒疫情。隨后，疫情全球性蔓延，涉及到美洲、歐洲、亞洲、大 洋洲。2009年6月11日，WHO將甲型HlNl流感警戒級別提升至6級，意味著甲型HlNl流 感進入全球大流行。我國于2009年4月31日將甲型HlNl流感納入《中華人民共和國傳染 病防治法》規定的乙類傳染病，人群對甲型HlNl流感病毒普遍易感。截至2010年2月28 日，全國31個省份累計報告甲型HlNl流感確診病例12. 7萬例，死亡病例793例。
[0004] 目前防治甲型HlNl流感主要使用化學藥物，如：神經氨酸酶抑制劑奧司他韋 (Oseltamivir，達菲），其通過抑制甲型HlNl流感病毒的神經氨酸酶（NA)，從而改變流感 病毒在感染細胞的聚集和釋放。但該類藥物在臨床應用中常常引起嚴重的不良反應，文獻 (藥物流行病學雜志-2008. 17(5). 280-280)報道日本厚生省自2001年2月批準使用奧司 他韋以來，已收到該藥引起的藥品不良反應超過1000例，其中128例為不常見的各種行為 異常；且已有8例死亡，其中5例是青年患者。利巴韋林是一種強效廣譜抗病毒藥物，目前 廣泛應用于病毒性疾病的防治，臨床常用于流感病毒感染的治療。但是，臨床研究表明應用 利巴韋林進行治療時產生不良反應復雜多樣，能夠累及神經系統、血液系統、呼吸系統、消 化系統、皮膚以及附件。
[0005] 另外，注射甲型HlNl流感疫苗可以預防甲型HlNl流感的發生，其主要針對的是可 能感染甲型流感的人群。由于我國人口基數較大，國內疫苗生產能力有限，生產成本較高， 因此大量的疫苗儲備，大規模的疫苗接種并不適合我國國情。
[0006] 中藥是我國千百年來的醫藥瑰寶，其大多為天然物質，相對于化學藥物而言，具有 不良反應小，治療成本低等優勢。目前，中藥用于防治或治療甲型HlNl病毒感染的效果已 經被臨床所證實，如連花清瘟膠囊、金花清感方等，均具有一定的抗甲流病毒感染的作用， 對緩解奧司他韋等藥物供應的緊張、避免引起抗藥性具有一定的積極作用，但現有的品種 仍然有限，難以應對可能發生的大規模疫情的發生。一清膠囊是由漢代醫學名著《金匱要 略》中的"瀉心湯"發展而來，其配方由大黃、黃芩、黃連組成，功用為瀉火解毒、燥濕泄熱，主 治邪火內熾，迫血妄行，吐血，衄血，便秘溲赤；三焦積熱，眼目赤腫，口舌生瘡，外證瘡瘍，心 胸煩悶，大便秘緒；濕熱黃疸，胸中煩熱痞滿，舌苔黃膩，脈數實者。但是將一清膠囊用于預 防或治療甲型HlNl流感病毒感染的用途，目前尚未見報道。
【發明內容】
[0007] 本發明的目的之一是提供一種由大黃、黃苳、黃連制成的藥物組合物在制備預防 或治療甲型HlNl流感病毒感染的藥物中的應用，為甲型HlNl流感病毒感染的臨床治療提 供一種新的選擇。
[0008] 為了實現上述目的，本發明提供以下的技術方案：
[0009] 本發明提供一種藥物組合物在制備預防和治療甲型HlNl流感病毒感染的藥物中 的應用，所述藥物組合物的活性成分由以下原料藥制成：大黃、黃芩、黃連。
[0010] 其中，所述藥物組合物中原料藥的質量配比為大黃10份、黃芩5份、黃連3. 3份。
[0011] 本發明還進一步提供了含有該藥物組合物的藥物制劑，具體為該藥物組合物可與 藥學上可接受的載體或賦形劑制成藥物制劑。所述藥物制劑優選為湯劑、散劑、片劑、膠囊 劑、丸劑、口服液、顆粒劑、注射劑或栓劑。
[0012] 本發明進一步提供所述藥物組合物的制備方法，取處方配比的大黃、黃芩、黃連， 分別加水煎煮兩次，第一次1. 5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液分別減壓濃縮得 到濃縮液，其中黃芩濃縮液單獨噴霧干燥，大黃和黃連的濃縮液合并噴霧干燥，即得藥物組 合物浸膏粉。
[0013] 本發明考察了藥物組合物對甲型HlNl流感病毒感染的治療作用。首先選取健康 小鼠，并采用甲型流感病毒鼠肺適應株A/PR/8/34 (HlNl)進行造模，考察不同劑量藥物組 合物對小鼠肺指數、肺指數抑制率及死亡率的影響，研究結果表明，藥物組合物高劑量組可 有效降低甲型HlNl流感病毒感染小鼠的肺臟指數，且可顯著降低小鼠感染病毒后7-9天的 死亡率，實驗結果與模型組相比具有統計學意義，說明本發明藥物組合物具有明顯的抗甲 型HlNl流感病毒感染的作用。
【具體實施方式】
[0014] 以下結合具體實施例對本發明進行進一歩闡述。下面實施例僅作為對本發明進一 步解釋，不能用來作為本發明的保護范圍的進一步限制。
[0015] 實施例1藥物組合物對甲型HlNl流感病毒感染小鼠肺指數的影響
[0016] 1、實驗材料
[0017] 藥物：藥物組合物（按照實施例7的方法制備，臨用前用1 %阿拉伯樹膠配成所需 濃度的混懸液備用）；利巴韋林片（四川美大康藥業股份有限公司，批號為110305,規格為 〇. Ig/片，臨用前用純凈水配成所需濃度的藥液備用）；對照例A(按實施例3的方法制備）； 對照例B(按實施例4的方法制備，臨用前用1%阿拉伯樹膠配成所需濃度的混懸液備用）； 對照例C (按實施例5的方法制備，臨用前用1 %阿拉伯樹膠配成所需濃度的混懸液備用）； 對照例D (按實施例6的方法制備，臨用前用1 %阿拉伯樹膠配成所需濃度的混懸液備用）。 [0018] 病毒株：甲型流感病毒鼠肺適應株A/PR/8/34 (HlNl)，由四川大學華西醫學中心 提供。于雞胚傳代兩次后收取尿囊液，血凝試驗測定其滴度為I : 512,分裝并于-80°c保 存備用。
[0019] 動物：昆明種小鼠，體重為（20±2)g，購自四川省中醫藥科學院實驗動物中心，飼 養于SPF級環境，合格證號SCXK (川）2008-19。
[0020] 試劑：脫脂綿羊血MH瓊脂培養平板，購自鄭州安圖綠科生物工程有限公司，批號 20120917 ;胃黏液素（mucin)，購自SIGMA-aldrich公司，批號1001234897 ;MH瓊脂培養基 (MH-A)，購自OXOID公司，批號CM0337A ;MH營養肉湯培養基（MH-B)，購自OXOID公司，批號 為 CM0405B。
[0021] 2、實驗方法
[0022] 取體重為（20 ± 2) g的健康小鼠，雌雄兼用，適應性飼養3d后，腹腔注射戊巴比妥 鈉67. 5mg · kg 1麻醉小鼠，麻醉后固定于手術臺上，使小鼠頭部向上并與水平呈45°角， 然后在其頸部正中做切口，分離氣管，向肺部方向氣管內注入甲型流感病毒鼠肺適應株A/ PR/8/34 (HlNl)病毒液（0. 05mL/只，濃度為30LD5。），注射完畢縫合手術切口并消毒。待小鼠 全部蘇醒后，按體重分層隨機分為模型組、藥物組合物高劑量組（給藥劑量為〇. 84g *kg ^、 藥物組合物中劑量組（給藥劑量為〇.42g· kg 1K藥物組合物低劑量組（給藥劑量為 0· 21g · kg ^ ;利巴韋林組（給藥劑量為0· 15g · kg ^，對照例A組（給藥劑量73ml · kg ^， 對照例B組（給藥劑量3. 4g · kg ^，對照例C組（給藥劑量1.0 Og · kg ^，對照例D組（給 藥劑量0. 98g · kg ^，并另設正常對照組。分組后立即開始灌胃給藥，每天1次，連續給藥 5d，對照組和模型組給予等量的純凈水。
[0023] 3、實驗結果
[0024] 按照上述實驗方法分組和給藥，末次給藥前禁食不禁水8h，并