以包含生長因子及氨基酸為特征的功能性化妝品組合物的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及包含生長因子(Growth factors)及氨基酸(Amino acids)的功能性化妝品組合物，尤其涉及作為生長因子包含表皮生長因子(Epidermal growth factor)、成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor)及血管內皮細胞生長因子(Vascularendothelial growth factor)和作為氨基酸包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及絲氨酸(Serine)的具有優秀的改善皮膚皺紋、改善皮膚彈力、皮膚保濕、皮膚再生及皮膚防老化效果的功能性化妝品組合物。
【背景技術】
[0002]—般而言，人的皮膚隨著年齡的增加，因承擔皮膚屏障功能的脂質層的脂質組成和含量的變化，其功能急劇降低，從而降低皮膚的水分含量，導致皮膚干燥，而且，引起各種皮膚病變。
[0003]現代人的過度的疲勞和壓力或因環境污染導致的紫外線量的增加和大氣污染等生成反應性高的活性氧、自由基及過氧化物，而皮膚受上述物質的影響導致人體成分(蛋白質、核酸、細胞膜脂質等)的氧化或變性，而這成為皮膚老化的主要原因。
[0004]尤其是，構成皮膚結合組織的膠原蛋白(collagen)成分等被氧化而喪失其功能，從而使皮膚失去彈力，過度形成皮膚的皺紋，變成老人狀皮膚。
[0005]因此，為防止及改善皮膚老化，叫元旦被成分的補充是非常重要的，而人們以此為目的進行含有膠原蛋白成分的改善皮膚老化用功能性材料的研究。
[0006]另外，生長因子(growth factor)是結合于位于細胞表面的受體(receptor)而刺激細胞的增殖和分化的蛋白質，因其功能非常多，所以刺激各種細胞的分裂，但在有些時候只作用于特異的細胞類型。生長因子是為細胞增殖的刺激的必需的成分，20年之前已展開研究，而結果表明可調節細胞分化、轉移、增殖過程。
[0007]在上述生長因子中，表皮生長因子(Epidermal growth factor)、成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor)及血管內皮細胞生長因子(Vascular endothelialgrowth factor)等作為改善皮膚老化的功能性材料得到廣泛研究。
【發明內容】
[0008]技術課題
[0009]本發明的目的在于提供一種包含為皮膚細胞的再生的三種生長因子及膠原蛋白生物合成的氨基酸前驅體的具有優秀的改善皮膚皺紋、改善皮膚彈力、皮膚保濕、皮膚再生及皮膚防老化效果的功能性化妝品組合物及利用上述組合物的功能性化妝品。
[0010]技術方案
[0011]為達到上述目的，本發明提供一種功能性化妝品組合物，其特征在于:作為生長因子(Growth factors)包含表皮生長因子(Epidermal growth factor)、成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor)及血管內皮細胞生長因子(Vascular endothelialgrowth factor)和作為氨基酸(Amino acids)包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及絲氨酸(Serine)。
[0012]較佳地，上述生長因子為人類生長因子。
[0013]較佳地，上述表皮生長因子、成纖維細胞生長因子及血管內皮細胞生長因子在組合物中各以0.01?1.0ppm的濃度被包含。
[0014]較佳地，上述生長因子被30?200nm大小的納米微脂囊捕集。
[0015]較佳地，上述脯氨酸、甘氨酸及絲氨酸在組合物中各以I?300ppm的濃度被包含。
[0016]較佳地，上述功能性從改善皮膚皺紋、改善皮膚彈力、皮膚保濕、皮膚再生及皮膚防老化構成的組中選擇。
[0017]另外，本發明提供利用本發明的上述化妝品組合物的功能性化妝品。
[0018]較佳地，上述化妝品從柔軟化妝水、收斂化妝水、營養化妝水、發毛營養劑、眼霜、營養霜、按摩膏、潔面霜、潔面泡沫、潔面水、粉、精華、精華露及面膜構成的組中選擇。
[0019]有益效果
[0020]本發明的包含三種生長因子及膠原蛋白生物合成氨基酸前驅體的功能性化妝品組合物及包含該組合物的功能性化妝品具有優秀的改善皮膚皺紋、改善皮膚彈力、皮膚保濕、皮膚再生及皮膚防老化效果。
【附圖說明】
[0021]圖1a為在DMEM培養液中人類成纖維細胞之后的相差倒置顯微鏡照片(100倍率)；
[0022]圖1b為在DMEM培養液中培養發育人類成纖維細胞的相差倒置顯微鏡照片(100倍率)；
[0023]圖1c為在各添加人表皮生長因子、成纖維細胞生長因子及血管內皮細胞生長因子的DMEM培養液中培養發育人類成纖維細胞的相差倒置顯微鏡照片(100倍率)；
[0024]圖2為在各添加本發明的實施例1的人表皮生長因子、成纖維細胞生長因子及血管內皮細胞生長因子的DMEM培養液中培養成纖維細胞并比較調查細胞增殖效果的結果曲線圖；
[0025]圖3為利用ELISA分析法調查在含有人表皮生長因子、成纖維細胞生長因子及血管內皮細胞生長因子和作為膠原蛋白前驅物質的脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及絲氨酸(Serine)的DMEM培養液中人類成纖維細胞的膠原蛋白的合成量的結果曲線圖。
【具體實施方式】
[0026]下面，對本發明的進行詳細說明。
[0027]本發明的發明人在進行關于包含對皮膚細胞再生有積極意義的三種生長因子的化妝品組合物的研究的過程中發現，若在上述組合物中添加作為膠原蛋白生物合成的前驅物質的脯氨酸、甘氨酸及絲氨酸，則成纖維細胞的增殖和膠原蛋白的合成明顯增加，以此完成了將其用作功能性化妝品組合物的發明。
[0028]因此，本發明提供一種功能性化妝品組合物，其特征在于:作為生長因子(Growth factors)包含表皮生長因子(Epidermal growth factor)、成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor)及血管內皮細胞生長因子(Vascular endothelial growthfactor)和作為氨基酸(Amino acids)包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及絲氨酸(Serine)。
[0029]較佳地，上述三種生長因子為人類生長因子。較佳的具體示例為，上述生長因子可使用從利用加密人類表皮生長因子(Epidermal growth factor)、成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor)及血管內皮細胞生長因子(Vascular endothelial growthfactor)的基因進行轉型的大腸菌分離及提純的生長因子。
[0030]較佳地，上述表皮生長因子、成纖維細胞生長因子及血管內皮細胞生長因子在組合物中各以0.01?1.0ppm的濃度被包含。若上述含量低于0.0lppm，則難以獲得所希望的效果，而若上述含量高于1.0ppm,則將引起費用問題及因過量使用生長因子導致的人體安全性問題等。
[0031]較佳地，上述生長因子被30?200nm大小的納米微脂囊捕集。本發明的生長因子成分存在皮膚滲透問題及長期放置于室溫下是因失活而降低穩定性的問題，而這可通過被納米微脂囊捕集來解決。較佳的具體示例為，上述納米微脂囊可以卵磷脂為原料并利用微射流機制造，而本發明的生長因子可各自或一同捕集于卵磷脂粒子內。納米微脂囊的制造方法是公知的，可采用任意方法。上述納米微脂囊粒子為30?200nm為宜，若小于30nm，貝Ij因皮膚滲透過快而有可能引起皮膚副作用，而若大于200nm，則因難以滲透于皮膚而無法獲得使用納米微脂囊的效果。
[0032]較佳地，上述脯氨酸、甘氨酸及絲氨酸在組合物中各以I?300ppm的濃度被包含。本發明的上述脯氨酸、甘氨酸及絲氨酸是用于合成作為細胞外基質成分的膠原蛋白的氨基酸前驅體，與一同包含于組合物中的生長因子一同產生作用而用于細胞的膠原蛋白的合成。
[0033]上述功能性是指能改善皮膚狀態的功能，例如有改善皮膚皺紋、改善皮膚彈力、皮膚保濕、皮膚再生及皮膚防老化等，但非限制。
[0034]如在下述實施例中所記載的那樣，本發明的上述功能化妝品組合物對成纖維細胞的增殖及膠原蛋白的合成具有顯著的效果，因此，可用于改善皮膚狀態的功能性化妝品中。
[0035]因此，本發明提供利用本發明的上述化妝品組合物的功能性化妝品。
[0036]上述化妝品從柔軟化妝水、收斂化妝水、營養化妝水、發毛營養劑、眼霜、營養霜、按摩膏、潔面霜、潔面泡沫、潔面水、粉、精華、精華露及面膜構成的組中選擇，但非限制。
[0037]較佳的具體示例為，本發明的化妝品組合物可制作成本發明所屬技術領域熟知的化妝品，而包含于上述換裝品的成分除作為有效成分的三種生長因子和膠原蛋白前驅物質之外，還可包括化妝品中通常使用的成分。例如，可包含其他有效成分、穩定劑、溶解劑、維生素、顏料、香料等通常的輔助劑及載體。
[0038]較佳的具體示例為，本發明的化妝品可制作成本領域通常制作的任何劑型，例如溶液、混懸液、乳池液、膏、凝膠、霜、乳液、粉、香阜、潔面霜、油、粉末粉底、乳池液粉底、蠟狀粉底、噴霧劑等。例如，在本發明的劑型為霜、乳液或凝膠時，可混合適當的油等油狀成分、表面活性劑、水、增粘劑、穩定劑等制作成W/0或0/W形式的乳劑完成制作，而這樣的制造方法是本領域技術人員熟知的。
[0039]下面，通過實驗例對本發明進行更詳細的說明。
[0040][實施例]
[0041]實施例1
[0042]在本實施例1中，在細胞培養液中添加人類生長因子(EGF、FGF、VEGF)之后，觀察對皮膚成纖維細胞的增殖促進效果。
[0043](I)從人體組織分離成纖維細胞
[0044]取人腹部皮膚組織放入經滅菌的1cm beaker中，并利用相同皮膚(I:1)的磷酸化緩沖溶液(D-PBS)清洗。在Clean bench中投入20ml的D-PBS，用一只手利用forces抓住組織并利用手術刀將皮膚組織切割成2_以下的大小。回收切割的組織和溶液并以20ml為一份放入多個50ml離心分離用conical tubes。添加相同量的0.15% collagenasetype-Ι溶液(Invitrogen)并在37°C下反應1-2小時。用D-PBS清洗之后，在400xg下離心分離5分鐘