一種高性能鐵皮石斛茶多酚復合物的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及鐵皮石斛深加工技術，具體涉及一種高性能鐵皮石斛茶多酚復合物的制備方法。
【背景技術】
[0002]鐵皮石斛作為中華九大仙草之首，《神農本草經》中記載其具有“除痹、下氣、補五臟虛勞、延年”等功效，現代科學研究表明，鐵皮石斛具有抗氧化、增強免疫等健康功能。當前鐵皮石斛是保健品開發的首選原料之一。
[0003]茶多酚是茶葉中最主要的活性物質，也是國內外最為關注的天然產物之一。研究表明茶多酚具有諸多健康功效，被認為在醫藥和食品行業有著廣泛的應用前景。目前茶多酚在我國保健品行業中也具有重要的地位。
[0004]利用天然產物之間的協同互作效應，將不同功效成分進行復配，進行功能的互補已經成為保健品開發的一個趨勢。盡管當前已有將鐵皮石斛和茶多酚作為主要原料的功能產品開發，然而其互配技術大多僅僅停留在將不同成分進行混合的低水平狀態，未能充分發揮各自的優勢。因此，基于不同成分本身物理化學的特征進行結構上互配，發明一種全新的高性能的鐵皮石斛茶多酚復合物，對于兩者其在更多領域的應用尤為重要。
【發明內容】
[0005]本發明要解決的技術問題是，克服現有鐵皮石斛與茶多酚簡單混合未能充分發揮優勢的缺陷，提供可以制備高性能的鐵皮石斛茶多酚復合物的方法。
[0006]為解決技術問題，本發明是通過以下技術方案實現的:
[0007]提供一種高性能鐵皮石斛茶多酚復合物的制備方法，包括以下步驟:
[0008](I)稱取新鮮的鐵皮石斛的莖條，將其打碎后加入95%乙醇中，在50?60°C下提取3?4小時，離心過濾后得到濾渣；鐵皮石斛質量與乙醇體積的比例為1: 10?20(g: ml)；
[0009](2)將步驟⑴中得到的濾渣加入纖維素酶水溶液中，在85?95°C下浸提2?3小時；然后超聲提取30?40min，離心過濾后得到提取液；所加濾渣質量與纖維素酶水溶液體積的比例為1: 20?30(g: ml)，纖維素酶質量占鐵皮石斛濕重的2?4% ;
[0010](3)將步驟(2)中得到的提取液在真空條件下濃縮到原體積的1/5?1/15，得到濃縮提取液；
[0011 ] (4)向步驟(3)中得到的濃縮提取液中加入等體積的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，在40?50°C下超聲提取10?20min后，離心過濾后得到上清液；磷酸氫二鈉_檸檬酸緩沖液的pH值為4?5，含有10?20% (m/m)的茶多酚；
[0012](5)將步驟(4)中的上清液濃縮后冷凍干燥，得到高性能鐵皮石斛茶多酚復合物。
[0013]本發明中，步驟(I)中所述的離心過濾的條件是轉速5500?6500rpm，時間25?35min0
[0014]本發明中，步驟(2)中所述的纖維素酶的活力多25000U/g ;超聲提取時的功率是200?300W ;離心過濾的條件是轉速3000?4000rpm，時間25?35min。
[0015]本發明中，步驟(4)中所述超聲提取時的功率是200?300W ;離心過濾的條件是轉速 3000 ?4000rpm,時間 5 ?15min。
[0016]與現有技術相比，本發明的有益效果在于:
[0017]應用本發明技術制備高性能鐵皮石斛茶多酚復合物不僅有效地提高了茶多酚的穩定性，并且具有抑制癌細胞增殖、抑制酪氨酸酶活性、抗氧化、抑制α -淀粉酶活性等性能，在食品、化妝品、醫藥等行業有著廣泛應用全景。
【附圖說明】
[0018]圖1為實施例1中制備的高性能鐵皮石斛茶多酚復合物在模擬腸液中(PH6.8，37±1°C )的穩定性。
[0019]圖2為實施例1中制備的高性能鐵皮石斛茶多酚復合物的抗氧化作用。
[0020]圖3為實施例1中制備的高性能鐵皮石斛茶多酚復合物對酪氨酸酶活力的抑制作用。
[0021 ]圖4為實施例1中制備的高性能鐵皮石斛茶多酚復合物對α -淀粉酶活力的抑制作用。
【具體實施方式】
[0022]實施例1
[0023](I)稱取新鮮的鐵皮石斛莖條50g，將其打碎，以1: 10(g: ml)的比例加95%乙醇，在50°C下提取3小時后，經5500rpm離心25min，過濾后得到濾渣；
[0024](2)向步驟(I)中得到的濾渣以1: 20(g: ml)的比例加入含2%纖維素酶(占鐵皮石斛濕重，酶活力25000U/g)的水溶液，在85°C下浸提3小時，再200W功率下超聲提取40min后，經3000rpm離心25min過濾，得到提取液；
[0025](3)將步驟⑵中得到的提取液真空濃縮到原體積的1/5，得到濃縮提取液；
[0026](4)向步驟(3)中得到的濃縮提取液中以1:1的體積比例加入pH為4的含10%茶多酚的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，在40°C下，200W功率下超聲提取lOmin，經3000rpm離心5min后過濾得到上清液；
[0027](5)將步驟(4)中得到的上清液濃縮后冷凍干燥，得到高性能鐵皮石斛茶多酚復合物；
[0028]實施例2
[0029](I)稱取新鮮的鐵皮石斛莖條50g，將其打碎，以1: 15(g: ml)的比例加95%乙醇，在55°C下提取3.5小時后，經6000rpm離心30min，過濾后得到濾渣；
[0030](2)向步驟(I)中得到的濾渣以1: 25(g: ml)的比例加入含3%纖維素酶(占鐵皮石斛濕重，酶活力30000U/g)的水溶液，在90°C下浸提2.5小時，再250W功率下超聲提取35min后，經3500rpm離心30min過濾，得到提取液；
[0031](3)將步驟(2)中得到的提取液真空濃縮到原體積的1/10，得到濃縮提取液；
[0032](4)向步驟(3)中得到的濃縮提取液中以1:1的體積比例加入pH為4.5的含15%茶多酚的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，在45°C下，250W功率下超聲提取15min，經3500rpm離心1min后過濾得到上清液；
[0033](5)將步驟(4)中得到的上清液濃縮后冷凍干燥，得到高性能鐵皮石斛茶多酚復合物；
[0034]實施例3
[0035](I)稱取新鮮的鐵皮石斛莖條50g，將其打碎，以1: 20(g: ml)的比例加95%乙醇，在60°C下提取4小時后，經6500rpm離心35min，過濾后得到濾渣；
[0036](2)向步驟(I)中得到的濾渣以1: 30(g: ml)的比例加入含4%纖維素酶(占鐵皮石斛濕重，酶活力35000U/g)的水溶液，在95°C下浸提2小時，再300W功率下超聲提取30min后，經4000rpm離心35min過濾，得到提取液；
[0037](3)將步驟(2)中得到的提取液真空濃縮到原體積的1/15，得到濃縮提取液；
[0038](4)向步驟(3)中得到的濃縮提取液中以1:1的體積比例加入pH為5的含20%茶多酚的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，在50°C下，300W功率下超聲提取20min，經4000rpm離心15min后過濾得到上清液；
[0039](5)將步驟(4)中得到的上清液濃縮后冷凍干燥，得到高性能鐵皮石斛茶多酚復合物；
[0040]穩定性驗證
[0041]采用常規模擬腸液(PH 6.8，溫度37 土1°C )，通過相對茶多酚濃度評價復合物中茶多酚和未經復合的茶多酚的穩定性，具體步驟如下:
[0042]樣品選擇:
[0043]實施組:實施例1中制備的鐵皮石斛茶多酚復合物；
[0044]對照組:測定實施例1制備的復合物中茶多酚的含量，通過復合物總量減掉茶多酚含量計算獲得復合物中鐵皮石斛提取物的含量，然后將同等含量的茶多酚固體與同等含量的鐵皮石斛提取物(實施例1中步驟(2)中的濃縮液直接冷凍干燥制備的鐵皮石斛提取物)充分混勻。
[0045]將樣品(實施組和對照組)分別加入模擬腸液(PH 6.8，溫度37±1°C)中進行