一種膠原蛋白組合物及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物醫藥技術領域，尤其涉及一種膠原蛋白組合物及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 膠原蛋白為生物高分子，是動物結締組織中的主要成分，也是哺乳動物體內含量 最多、分布最廣的功能性蛋白，占蛋白質總量的25%~30%。與組織的形成、成熟、細胞間 信息的傳遞，以及關節潤滑、傷口愈合、鈣化作用、血液凝固和衰老等有著密切的關系。膠原 蛋白也是生物科技產業最具關鍵性的原材料之一，在醫學材料、化妝品、食品工業等均有著 廣泛應用。
[0003] 現有技術中，存在著將膠原蛋白與一些生物材料結合起來發揮止血作用的止血 劑，如申請號為200710115108. 5的中國專利公開了一種止血材料，其主要原材料為殼聚 糖、膠原蛋白和羧甲基纖維素鈉，但是，該止血材料只具有止血的作用，對于出血的傷口不 僅沒有促進愈合的作用，還可能會刺激破損出血的傷口，并且，該止血劑選用的殼聚糖和羧 甲基纖維素鈉均為外來物質，存在一定的毒副作用。
【發明內容】
[0004] 本發明提供了一種膠原蛋白組合物及其制備方法，本發明提供的膠原蛋白組合物 同時具有止血和粘合傷口的功能，并且無毒副作用。
[0005] 本發明提供一種膠原蛋白組合物，包括：表皮細胞生長因子、膠原蛋白、血小板提 取物和水；
[0006] 所述血小板提取物在所述膠原蛋白組合物中的質量濃度為0. 5~I. 5mg/mL。
[0007] 優選的，所述表皮細胞生長因子在所述膠原蛋白組合物中的質量濃度為80~ 120ng/mL〇
[0008] 優選的，所述膠原蛋白組合物中膠原蛋白的質量分數為40~50 %。
[0009] 優選的，所述血小板提取物按照以下步驟制得：
[0010] A)將臍血離心，提取血小板；
[0011] B)采用緩沖液將所述血小板重懸，得到血小板混懸液，將所述血小板混懸液反復 凍融3~8次，得到血小板凍融液；
[0012] C)所述血小板凍融液采用6000~1000 Og的轉速進行離心，得到血小板提取物。
[0013] 優選的，所述步驟A)具體包括：
[0014] 將臍血以200~500g的轉速離心5~20min，取上層血漿；
[0015] 將上層血衆以200~500g的轉速離心1~lOmin，取上清液；
[0016] 將上清液以1000~1500g的轉速離心1~lOmin，得到血小板。
[0017] 優選的，所述步驟B)中凍融包括冷凍和融化；所述冷凍的溫度為-85~-75°C ;
[0018] 所述融化的溫度為30~40 °C。
[0019] 優選的，所述步驟C)中離心的溫度為1~KTC ;
[0020] 所述步驟C)中離心的時間為20~40min。
[0021] 優選的，所述膠原蛋白組合物的pH值為6. 5~7. 0。
[0022] 本發明提供一種膠原蛋白組合物的制備方法，包括以下步驟：
[0023] 1)將臍血離心，提取血小板；
[0024] 2)采用緩沖液將所述血小板重懸，得到血小板混懸液，將所述血小板混懸液反復 凍融3~8次，得到血小板凍融液；
[0025] 3)所述血小板凍融液采用6000~1000 Og的轉速進行離心，得到血小板提取物；
[0026] 4)將表皮細胞生長因子、膠原蛋白溶液和血小板提取物混合，得到膠原蛋白組合 物，所述膠原蛋白組合物中血小板提取物的質量濃度為〇. 5~I. 5mg/mL。
[0027] 優選的，所述步驟4)之前還包括：
[0028] 將膠原蛋白與冰醋酸混合后，依次進行除菌和滅活，得到膠原蛋白溶液，然后再將 表皮細胞生長因子、膠原蛋白溶液和血小板提取物混合，得到膠原蛋白組合物。
[0029] 本發明提供了一種膠原蛋白組合物，包括表皮細胞生長因子、膠原蛋白、血小板提 取物和水，所述血小板提取物在所述膠原蛋白組合物中的質量濃度為0. 5~I. 5mg/mL。本 發明通過提取血小板內部成分，結合膠原蛋白和表皮細胞生長因子（EGF)，能快速止血和粘 合傷口，因為是提取得到的血小板內部成分，能直接作用于止血，速度快，效果好，強化炎癥 和免疫反應，結合EGF促進表皮細胞生長，加快傷口愈合。并且，上述各成分均可在人體內 降解，無任何毒副作用，無刺激作用，降解后無任何殘留。
【附圖說明】
[0030] 為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現 有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發明的實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據 提供的附圖獲得其他的附圖。
[0031] 圖1為本發明實施例中的B型傷口示意圖；
[0032] 圖2為使用本發明實施例4得到的膠原膜貼的B型傷口愈合圖。
【具體實施方式】
[0033] 本發明提供了一種膠原蛋白組合物，包括：表皮細胞生長因子、膠原蛋白、血小板 提取物和水，
[0034] 所述血小板提取物在所述膠原蛋白組合物中的質量濃度為0. 5~I. 5mg/mL。
[0035] 本發明提供的膠原蛋白組合物包括表皮細胞生長因子（EGF)，所述表皮細胞生長 因子又名寡肽-1，是人體內的一種活性物質，所述表皮細胞生長因子在所述膠原蛋白組合 物中的質量濃度優選為80~120ng/mL，更優選為85~115ng/mL，最優選為90~IlOng/ mL。本發明對所述表皮細胞生長因子的來源沒有特殊的限制，購買市售商品即可。如，可采 用ExCell (CB)公司提供的01. ExCell (CB). CB031-0041型號的重組人表皮細胞生長因子凍 干粉。
[0036] 本發明提供的膠原蛋白組合物包括膠原蛋白，所述膠原蛋白優選采用動物膠原蛋 白，所述膠原蛋白在所述膠原蛋白組合物中的質量分數優選為40~50%，更優選為43~ 48%，最優選為45~46%。本發明對所述膠原蛋白的來源沒有特殊的限制，采用市售商品 即可，如，可采用石家莊旭爾美生物科技有限公司提供的QB2732-2005型號的動物膠原蛋 白。
[0037] 本發明提供的膠原蛋白組合物包括血小板提取物，所述血小板提取物在所述膠原 蛋白組合物中的質量濃度為0. 5~I. 5mg/mL，優選為0. 8~I. 3mg/mL，更優選為1~I. Img/ mL〇
[0038] 血小板內部含有α顆粒和致敏顆粒，α顆粒中含纖維蛋白原、血小板第4因子、組 織蛋白酶Α、組織蛋白酶D、酸性水解酶等；致敏顆粒含有5 -羥色胺、ADP、ATP、鈣離子、腎上 腺素、抗血纖維蛋白酶、焦磷酸等。這些因子成分通過復雜的變化產生凝血酶，是血液中的 纖維蛋白原變為纖維蛋白，互相交織的纖維蛋白使血小板凝塊與血細胞纏結成血凝塊，即 血栓。伴隨著血栓的形成，血小板釋放血栓烷A2;致密顆粒和α顆粒通過與表面相連管道 系統釋放ADP、5-羥色胺、血小板第4因子、β血栓球蛋白、凝血酶敏感蛋白、細胞生長因子、 血液凝固因子V、νπ、χπ和血管通透因子等多種活性物質，這些活性物質通過激活血液中其 他血小板，促進血管收縮，促纖維蛋白形成等多種方式加強止血。在本發明中，所述血小板 提取物主要是各類因子的蛋白成分。
[0039] 在本發明中，所述血小板提取物優選按照以下步驟制得：
[0040] Α)將臍血離心，提取血小板；
[0041] Β)采用緩沖液將所述血小板重懸，得到血小板混懸液，將所述血小板混懸液反復 凍融3~8次，得到血小板凍融液；
[0042] C)所述血小板凍融液采用6000~1000 Og的轉速進行離心，得到血小板提取物。
[0043] 本發明將臍血離心，提取得到血小板，本發明優選將臍血以200~500g的轉速離 心5~20min，取上層血漿；將上層血漿以200~500g的轉速離心1~lOmin，取上清液；將 上清液以1000~1500g的轉速離心1~lOmin，得到血小板；本發明更優選以300~400g 的轉速離心10~15min，取上層血漿；將上層血漿以300~400g的