組合物及其在抗病毒藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術】
[0002] 單純皰疼病毒1型（Herpes simplex virus，HSV-1)和單純皰疼病毒2型（Herpes simplex virus，HSV-2)屬于皰疹科病毒，HSV-I和HSV-2不僅引起口唇或生殖粘膜皰疹，同 時也是引起腦炎、肝炎、全身嚴重感染甚至宮內感染的重要病原。
[0003] 呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV)主要引起呼吸系統感染， 在嬰幼兒、老年以及免疫缺陷人群引起嚴重肺炎，是人類上呼吸道感染的重要病原之一。
[0004] 甲型流感病毒（Influenza A virus，Flu-A)屬于正粘科病毒，在人類和其他生物 每年都有小范圍的流行，引起上呼吸系統感染。大流行時，可引起嚴重呼吸系統感染，甚者 引起肺炎、腦炎甚至死亡。
[0005] 上述三種病毒的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產物 中尋找化合物或先導化合物并進行結構修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物 最有重要價值。
[0006] 本發明涉及的化合物I是一個2011年發表（Ayumi Ohsaki et al.，2011. Salviskinone A, a diterpene with a new skeleton from Salvia przewalskii. Tetrahedron Letters 52(2011) 1375 - 1377)的化合物，我們對化合物I進行了結構修飾， 獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合 物，并對該組合物抗病毒活性進行了評價，其具有抗病毒活性。
【發明內容】
[0007] 本發明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合 物中化合物III和化合物IV的質量百分數分別為30%和70%。
[0008] LlN 丄U01Z000U Λ 1VJ ι Ζ/3 JA
[0009] 本發明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[0010] 藥效學實驗表明，本發明的組合物具有較好的抗病毒作用。本發明的藥學上可接 受的鹽具有同樣的藥效。
[0011] 組合物的體外實驗表明，組合物具有很強的抗HSV-1、HSV-2、RSV和flu A的活性， 因此本發明的組合物有望被用于制備新型抗病毒藥物。
[0012] 以下通過實施例對本發明作進一步詳細的說明，但本發明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0013] 實施例1化合物Salviskinone A的制備
[0014] 化合物Salviskinone A(I)的制備方法參照Ayumi Ohsaki等人發表的文獻 (Ayumi Ohsaki et al. , 2011. Salviskinone A, a diterpene with a new skeleton from Salvia przewalskii. Tetrahedron Letters 52 (2011) 1375 - 1377)的方法。
[0016] 實施例2 Salviskinone A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0017] 將化合物I (312mg，1.0 Ommol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0. 08g)，1，2-二溴乙烷（3. 760g，20.0 Ommol)和6mL的50 %氫氧化鈉溶液。混合物在35 攝氏度攪拌12h。12h之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相 溶液。然后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌4次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減 壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮 =100:1.5, v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末（327mg， 78% ) 〇
[0018] 4匪1?(5001抱，0150-(16)5 6.63(8，1!1)，6.37(8，1!1)，5.81(8，1!1)，4.51(8,2!1)，3· 84 (s，1H)，3. 79 (s，2H)，2. 15 (s，1H)，2. 04 (s，1H)，L 91 (s，1H)，L 65 (s，1H)，L 39 (s，3H)，L 08 (s, 6H), 0. 99 (s, 6H).
[0019] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 188. 07 (s)，183. 70 (s)，154. 38 (s)，147. 57 (s)，140. 2 I (s)，136. 40 (s)，134. 71 (s)，131. 25 (s)，128. 40 (s)，118. 83 (s)，72. 12 (s)，45. 49 (s)，37. 5 4 (s)，33. 58 (s)，31. 78 (s)，26. 17 (s)，25. 12 (s)，24. 66 (s)，23. 51 (s)，23. 17 (s)，22. 65 (s) ·
[0020] HRMS (ESI)m/z[M+H]+calcd for C22H28BrO3:419. 1222 ；found 419. 1220.
[0021] CN 105125550 A 說明書 4/9 頁
[0022] 實施例3 Salviskinone A的0-(二乙胺基）乙基衍生物（III)的合成
[0023] 將化合物II (210mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀 (345mg，2. 5mmol)，碘化鉀（84mg，0. 5mmol)和二乙胺（1460mg，20mmol)，混合物加熱回流 8h。反應結束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用水和 飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗 品。產物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮=100:1. 0, v/V)，收集棕色集 中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物III的黃色粉末（137. 7mg，67% )。
[0024] 1H NMR (500MHz, DMS〇-d6) δ 6. 43 (d, J = 120. 3Hz, 2H), 5. 78 (s, 1H), 4. 23 (s, 2H), 3 ,98(s, 1H),3. 06 (s, 2H), 2. 89(s, 4H),2. 11 (s, 1H),2. 01(s, 1H), 1.89(s, 1H), 1.64(s, 1H), I .34 (s, 3H), I. 14 (s, 6H), I. 04 (s, 6H), 0. 96 (s, 6H).
[0025] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 188. 17 (s)，183. 78 (s)，154. 44 (s)，147. 61 (s)，140. 2 3 (s)，136. 50 (s)，134. 79 (s)，131. 31 (s)，128. 44 (s)，118. 85 (s) ,69.31 (s) ,52.96 (s) ,47.7 5 (s)，45. 55 (s)，37. 58 (s)，33. 65 (s)，26. 22 (s)，25. 20 (s)，24. 72 (s)，23. 55 (s)，23. 24 (s)， 22. 70 (s)，12. 35 (s) ·
[0026] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C26H38NO3:412. 2852 ;found:412. 2855。
[0027] CN 105125550 A 兄明十> 5/9 頁
[0028] 實施例4 Salviskinone A的0-(嗎啉基）乙基衍生物（IV)的合成
[0029] 將化合物II (210mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀 (345mg，2. 5mmol)，鵬化鉀（84mg，0. 5mmol)和嗎啉（1742mg，20mmol)，混合物加熱回流 12h。 反應結束后將反應液倒入30mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取4次，合并有機相。依次用水 和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物 粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮=100:0. 5, v/v)，收集黃色 集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物IV的黃色粉末（121. lmg，57% )。
[0030] 1H NMR (500MHz, DMS〇-d6) δ 6. 41 (d, J = 108. 0Hz, 1H), 6. 29 (s, 1H), 5. 75 (s, 1H), 4 .21 (s, 2H), 3. 84 (s, 1H), 3. 52 (s, 4H), 3. 02 (s, 2H), 2. 47 (s, 4H), 2. 09 (s, 1H), 2. 00 (s, 1H), I .84 (s, 1H), I. 60 (s, 1H) ,1-31 (s, 3H), I. 02 (s, 6H), 0. 95 (s, 6H).
[0031] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 188. 17 (s)，183. 78 (s)，154. 44 (s)，147. 61 (s)，140. 2 3 (s)，136. 50 (s)，134. 79 (s)，131. 31 (s)，128. 44 (s)，118. 85 (s) ,69.31 (s) ,66.84 (s) ,54.7 6 (s)，52. 97 (s)，45. 54 (s)，37. 62 (s)，33. 64 (s)，26. 21 (s)，25. 19 (s)，24. 71 (s)，23. 59 (s)， 23. 23 (s)，22. 69 (s) ·
[0032] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C26H36NO4:426. 2644 ;found:426. 2641。
[0033] LlN 丄U01Z000U Λ 1VJ ι ο/υ ^
[0034] 實施例5組合物抗病毒活性
[0035] (一）實驗例：組合物對皰疹病毒的作用研究：
[0036] (1)細胞株與病毒株：
[0037] 人胚腎細胞（ΗΕΚ293,為HSV-1、HSV-2病毒敏感細胞）購自美國Clontech公司； 單純皰疹病毒1型（HSV-I) Sm44株、單純皰癥病毒2型（HSV-2) 333株引自中國⑶C病毒病 研究所。
[0038] (2)細胞毒性測定：
[0039] 組合物的制備：將30mg化合物III的粉末和70mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小 管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組合物。
[0040] 參照文獻（汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對病毒抑制作用的實驗研 究，南京中醫藥大學學報，2008 ;24(1) :25~27)的方法，將各樣品以2倍比做系列稀釋 (2°~5)，然后按稀釋順序橫向接種于96板孔中的HEK293上，每孔100uL，每稀釋度縱向重 復3孔（A、B、C行），平行設微孔板D的1~6孔為細胞對照，7~12孔不接種細胞為空白 對照，顯微鏡下每日觀察CPE，連續觀察7d，中性紅染色，在540nm波長測定OD值，將實驗組 與細胞對照組OD值相比計算細胞存活率，用Reed-Muench方法計算藥物半數細胞中毒濃度 (TD50) 〇
[0041] (4)抑毒試驗：
[0042] 參照文獻（汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對病毒抑制作用的實驗研 究，南京中醫藥大學學報，2008 ;24(1) :25~27)的方法，將樣品按稀釋順序（2 14)橫向 接種于96板孔中的單層細胞上，每孔100uL，每稀釋度縱向重復4孔，微孔板的A、B、C行 加含100個TCID5。的病毒IOOuL作為試驗組，D行補充等容量細胞維持液為不同濃度藥物 對照，平行