一種用于治療牛皮癬的抗體藥物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及牛皮癬治療藥物領域，尤其是一種用于治療牛皮癬的抗體藥物。
【背景技術】
[0002] 銀肩病是人們所患的常見慢性炎癥性皮膚病，病因尚無確切定論。銀肩病分為四 型，其中尋常型銀肩病最為常見。典型損害為境界清楚的紅斑、丘疹，表面覆蓋干燥的多層 鱗肩。該病病程長，病情反復發作，臨床治療較為棘手。目前銀肩病的治療藥物很多，但是由 于其病因錯綜復雜，許多治療藥物的療效并不能確定，僅以改善患者癥狀為主。傳統的治療 藥物有較多不良反應，相比之下，抗銀肩病的生物制劑有針對性強，療效確切，不良反應少 的優勢。近年來有不少針對銀肩病免疫發病機制研制了不少具有靶位特異性的生物制劑， 多數顯示出良好的應用前景。但從患者的患處取標本培養分離出治病真菌來做抗原再獲得 的抗體未見研究。
【發明內容】
[0003] 本發明所要解決的技術問題在于提供一種用于治療牛皮癬的抗體藥物。
[0004] 為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：
[0005] -種用于治療牛皮癬的抗體藥物，為銀肩病真菌（致病菌）作為抗原制備的多克 隆抗體，所述多克隆抗體是由下述方法獲得的：
[0006] (1)制備抗原，將致病菌分別按照以下方法進行操作，其中，所述致病菌為煙曲霉、 熱帶念珠菌、近平滑念珠菌和/或黑曲霉：
[0007]A致病菌接種馬鈴薯葡萄糖培養基中，28°C，160rpm震蕩培養，菌液離心，收集沉 淀，向沉淀中加入3. 7%甲醛，4°C過夜滅活；
[0008] b離心收集滅活后的菌體，用生理鹽水重懸，細胞超聲粉碎儀粉碎，BCA法測定后 制備成總蛋白量0. 5mg/ml的溶液；
[0009] c取蛋白溶液與等體積的弗氏完全佐劑混合制備首次免疫抗原，與等體積弗氏不 完全佐劑制備成加強免疫抗原備用；
[0010] (2)抗體制備：首次免疫，1ml首次免疫抗原皮下注射新西蘭大白兔后15、30、45天 分別用加抗原進一步免疫加強，免疫加強最后一次注射后的一周內采集抗血清，獲得各種 分離鑒定出真菌的抗體血清。
[0011] 優選的，上述用于治療牛皮癬的抗體藥物，所述步驟（1)中致病菌為熱帶念珠菌 和/或近平滑念珠菌。
[0012] 優選的，上述用于治療牛皮癬的抗體藥物，還包含藥學可接受的輔料、賦形劑。
[0013] 優選的，上述用于治療牛皮癬的抗體藥物，為膏劑。
[0014] 上述用于治療牛皮癬的抗體藥物的制備方法，具體制備步驟如下：
[0015] (1)制備抗原，將致病菌分別按照以下方法進行操作，其中，所述致病菌為煙曲霉、 熱帶念珠菌、近平滑念珠菌和/或黑曲霉：
[0016]A致病菌接種馬鈴薯葡萄糖培養基中，28°C，160rpm震蕩培養，菌液離心，收集沉 淀，向沉淀中加入3. 7%甲醛，4°C過夜滅活；
[0017] b離心收集滅活后的菌體，用生理鹽水重懸，細胞超聲粉碎儀粉碎，BCA法測定后 制備成總蛋白量0. 5mg/ml的溶液；
[0018] c取蛋白溶液與等體積的弗氏完全佐劑混合制備首次免疫抗原，與等體積弗氏不 完全佐劑制備成加強免疫抗原備用；
[0019] (2)抗體制備：首次免疫，1ml首次免疫抗原皮下注射新西蘭大白兔后15、30、45天 分別用加抗原進一步免疫加強，免疫加強最后一次注射后的一周內采集抗血清，獲得各種 分離鑒定出真菌的抗體血清。
[0020] 優選的，上述用于治療牛皮癬的抗體藥物的制備方法，所述步驟（1)中致病菌為 熱帶念珠菌和/或近平滑念珠菌。
[0021] 優選的，上述用于治療牛皮癬的抗體藥物的制備方法，所述步驟（1)中致病菌是 由下述方法得到的：
[0022] (1)取標本：常規75%酒精消毒后，刮取銀肩病人的患處取表皮細胞（皮肩）及深 層表皮細胞，接種于含〇. 05%氯霉素的沙氏葡萄糖瓊脂斜面上，置于28°C培養10-15天；
[0023] (2)分離真菌：采用劃線分離法于沙氏葡萄糖瓊脂平板上接種，置于28°C溫度下 培養，待培養出單菌落，鑒定真菌，用甘油冷凍法保存鑒定出菌種。
[0024] 優選的，上述用于治療牛皮癬的抗體藥物的制備方法，將所述步驟（2)所得各種 抗體的血清，進行效價測定，用無菌生理鹽水適當稀釋后，按比例混合，加入3%水溶性氮 酮、以及乳膏基質制成膏劑。
[0025] 本發明的有益效果是：
[0026] 上述用于治療牛皮癬的抗體藥物，采用致病菌直接作為抗原進行免疫并獲得了顯 著的抗體效果，所使用的致病菌為現有菌株，也可以從銀肩病人患處取得皮肩標本，將標本 在含有氯霉素的沙堡弱葡萄糖瓊脂培養基上培養出真菌，劃線分離培養出單菌落，經鑒定 出菌種，挑取單菌落接種到液體培養基擴大培養，離心收集菌體獲得，再采用甲醛滅活制備 抗原，用此抗原直接免疫新西蘭大白兔獲得抗體，以此抗體為主制備藥物用于銀肩病人的 治療具有顯著的緩解效果；其制備方法簡單，無毒副作用，可根據單個病人的致病菌制備出 針對性的藥物進行有目的的靶向治療。
【具體實施方式】
[0027] 下面結合具體實施例對本發明所述技術方案作進一步的說明。
[0028] 實施例1
[0029] 致病菌分離
[0030] 1、銀肩病人病患處常規75%酒精消毒后，刮取患處取表皮細胞（皮肩）及深層表 皮細胞（病人標本由世安門診和海馨門診部提供），共從11位病人病患處取得11種樣本。 將11種樣本分別接種于含〇. 05%氯霉素的沙氏葡萄糖瓊脂斜面上，置于28°C培養2周。沙 氏葡萄糖瓊脂按中國藥典配制。
[0031] 2、挑取培養出的真菌，采用劃線分離法于沙氏葡萄糖瓊脂平板上接種，置于28°C 溫度下培養，待培養出單菌落。進行肉眼觀察記錄每種菌落狀態，確定酵母樣菌和霉菌，然 后將霉菌用棉蘭染色后制成涂片光鏡下觀察孢子形態，結合菌落形態，通過真菌庫對比確 定霉菌的類型；酵母樣菌采用念珠菌顯色培養基鑒定，挑酵母菌劃線接種在念珠菌顯色培 養基上，置于35°C培養48小時，觀察記錄顏色變化，根據不同顏色鑒定菌種。用甘油冷凍法 保存鑒定出的菌種。共培養出4種致病菌分別是煙曲霉，熱帶念珠菌，近平滑念珠菌和黑曲 霉。其中熱帶念珠菌，近平滑念珠菌是11種樣