一種治療大腸癌的藥物組合物及其制備方法、用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種治療大腸癌的藥物組合物及其制備方法、用途，屬于醫藥領域。
【背景技術】
[0002] 癌癥是一種嚴重威脅人類健康和生命的常見病和多發病，人類因癌癥而引起的死 亡居所有疾病死亡率的第二位，僅次于心腦血管疾病。癌癥的發病機制有諸多因素參與， 目前認為細胞凋亡受抑是其中的一個途徑。細胞凋亡是一種程序性細胞死亡，表現為細 胞形態縮小、染色質凝聚、細胞核破裂、染色質DNA水解成片段（180bp倍數）、形成凋亡小 體。凋亡早期，細胞線粒體膜電位降低，隨后細胞色素C從線粒體內轉移到細胞液中，并與 APAF1 (凋亡蛋白酶活化因子1)結合，同時線粒體功能衰退。隨后，細胞色素C/APAF1復合 物激活Caspase-9,后者再激活Caspase-3和其它下游Caspase (半胱天冬酶），導致細胞膜 內側磷脂酰絲氨酸（PS)外翻。這時細胞變小，染色質固縮（chromatin condensation)，DNA 片段化（DNA fragmentation)，形成凋亡小體，細胞起泡（cell bubbling)，細胞發生凋亡。 當細胞凋亡不足時，細胞群體內存活與死亡的平衡被破壞，癌細胞數目的凈增長加大。
[0003] 中藥在癌癥治療過程中有著十分重要的地位，它可以提高癌癥患者免疫功能以及 抗癌能力，還可以減輕患者放、化療時的毒副作用，提高患者對放化療的耐受性。現代研究 表明，多種中藥材及其提取物都具有預防或治療癌癥的作用。例如，姜黃素可抑制腫瘤的增 殖和擴散；活血化瘀藥川芎能抑制小鼠黑色素瘤的轉移；中藥川烏、虎杖等煎劑制成的栓 塞注射液有明顯的抑制癌細胞作用。由于中藥在治療癌癥過程中機理復雜，不同的原料藥 配伍產生的效果可能不相同。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種新的治療大腸癌的藥物組合物及其制備方法、用途。
[0005] 本發明提供了一種治療大腸癌的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料藥制備 而成的制劑：鱉甲18份~22份、白花蛇舌草18份~22份、莪術16份~20份、黃芪16份~ 20份。
[0006] 優選的，所述的藥物組合物是由下述重量配比的原料藥制備而成的制劑：鱉甲20 份、白花蛇舌草20份、莪術18份、黃芪18份。
[0007] 進一步的，所述的藥物組合物是由鱉甲、白花蛇舌草、莪術、黃芪的原生藥粉、水或 有機溶劑提取物為活性成分，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備成制劑。
[0008] 更進一步的，所述的制劑是湯劑、散劑、丸劑、顆粒劑、片劑或口服液。
[0009] 本發明提供了一種制備所述藥物組合物的方法，它包含如下步驟：
[0010] a、按比例取原料藥，打碎；
[0011] b、用乙醇提取，制備成浸膏；
[0012] c、加入藥學上常用的輔料或輔助性成分，制備成制劑。
[0013] 優選的，所述的乙醇為85%的乙醇水溶液。
[0014] 本發明提供了所述的藥物組合物在制備治療和/或預防大腸癌的藥物中的用途。
[0015] 進一步的，所述藥物是治療和/或預防直腸癌、結腸癌中一種或兩種癌癥的藥物。
[0016] 更進一步的，所述藥物是抑制結腸癌細胞HCT116增殖的藥物。
[0017] 更進一步的，所述藥物是提高結腸癌細胞HCT116凋亡酶Caspase-9、Caspase-3 中一種或兩種的活性；降低結腸癌細胞HCT116的BCL-2蛋白表達水平；提高結腸癌細胞 HCT116的BAX蛋白表達水平；誘導結腸癌細胞HCT116發生細胞凋亡的藥物。
[0018] 本發明藥物是將鱉甲、白花蛇舌草、莪術和黃芪特定配比用于大腸癌的治療，具有 軟堅散結、清熱解毒、破血消癥、益氣扶正的功效。實驗證明，該藥物組合物能顯著抑制人結 直腸癌上皮細胞HCT116增殖，尤其500 y g/ml劑量與100 y M齊墩果酸作用強度相當，并可 以調節機體免疫。本發明藥物治療癌癥，藥效明確，成本低，且藥材來源于動植物，臨床使用 安全，避免放化療藥物的副作用，為臨床提供了 一種新的用藥選擇。
[0019] 顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離 本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0020] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說 明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容 所實現的技術均屬于本發明的范圍。
【附圖說明】
[0021] 圖1本發明藥物組合物對HCT116細胞形態的影響
【具體實施方式】
[0022] 實施例1本發明藥物組合物的制備
[0023] a、稱取原料藥：鱉甲20g，白花蛇舌草20g，莪術18g，黃芪18g ;
[0024] b、將上述飲片打碎，用85%乙醇加熱提取兩次，每次lh，合并兩次藥液，用旋轉蒸 發儀濃縮至一定濃度，用蒸發皿揮干溶劑，于烘箱中烘至恒重，浸膏的提取得率為20. 43%， 浸膏：原生藥材質量=10:2. 043。
[0025] 實施例2本發明藥物組合物的制備
[0026] a、稱取原料藥：鱉甲18g，白花蛇舌草18g，莪術16g，黃苗16g ;
[0027] b、將上述飲片打碎，用85%乙醇加熱提取兩次，每次lh，合并兩次藥液，用旋轉蒸 發儀濃縮至一定濃度，用蒸發皿揮干溶劑，于烘箱中烘至恒重，浸膏的提取得率為20. 43%， 浸膏：原生藥材質量=10:1. 968。
[0028] 實施例3本發明藥物組合物的制備
[0029] a、稱取原料藥：鱉甲22g，白花蛇舌草22g，莪術20g，黃芪20g ;
[0030] b、將上述飲片打碎，用85%乙醇加熱提取兩次，每次lh，合并兩次藥液，用旋轉蒸 發儀濃縮至一定濃度，用蒸發皿揮干溶劑，于烘箱中烘至恒重，浸膏的提取得率為20. 43%， 浸膏：原生藥材質量=10:2. 129。
[0031] 取上述浸膏加入藥學上常用的輔料或輔助性成分，制備成湯劑、散劑、丸劑、顆粒 劑、片劑或口服液。
[0032]以下通過實驗例進一步說明本發明的有益效果。以下所稱的鱉蛇抗癌方為根據實 施例1制備而成的組合物。
[0033] [材料]
[0034] 細胞株：人結腸癌上皮細胞HCT116,購自中國科學院上海細胞庫，凍存于液氮。
[0035] 藥物：鱉甲、白花蛇舌草、莪術、黃芪飲片購自同仁堂公司，經鑒定為正品。主 要儀器：恒溫00 2細胞培養箱（Thermo);多功能酶標儀（Thermo Scientific Varioskan Flash, Type 3001) ;Allegra X-12 型離心機（Beckman Coulter) ;DMI 3000B 型焚光顯微鏡 (Leica);超凈工作臺（蘇凈安泰）；細胞培養瓶、細胞培養板等耗材由Corning提供。
[0036] 試劑：McCoy' s 5A 培養基（Sigma-Aldrich);小牛血清（Invitrogen);膜蛋白 酶（Sigma-Aldrich) ;MTT試劑盒（碧云天）；Caspase_9和Caspase-3檢測試劑盒（碧云 天）；Bradford蛋白濃度測定試劑盒（碧云天）；Human Bax(BCL-2_Associated X Protein) ELISA 試劑盒和 Human BCL_2(B_cell lymphoma 2) ELISA 試劑盒（Elabscience)。Hoechst 33342染色液（凱基生物），熒光淬滅劑（凱基生物），其它試劑均為國產分析純。
[0037] [方法]
[0038] 細胞培養
[0039] 1^116細胞用含10%小牛血清的此(：〇7'8 54完全培養基在5%〇)2、37°(：濕熱條 件下培養，并用〇. 25%胰蛋白酶-EDTA消化傳代。
[0040] MTT細胞增殖實驗
[0041] HCT116細胞接種于96孔培養板，每孔約3X103個細胞。接種24h后，用含不同 濃度鱉蛇抗癌方（1000 y g/ml、500 y g/ml、250 y g/ml、125 y g/ml、62. 5 y g/ml、37. 25 y g/ ml、0 y g/ml)、陽性藥物齊墩果酸（100 y M)、對照溶劑（0. 4% DMS0)的培養液處理細胞12h、 24h、36h、48h，每組8孔。隨后吸棄培養液，每孔加100 y 1的5mg/ml MTT，孵育4h，再加入 100 y 1的Formazan溶解液。4小時后用酶標儀在570nm測吸光度值（A57QJ。細胞抑制率 (% )= 對照組^ A藥物組 )/八對照組><100%〇
[0042] 細胞凋亡酶Caspase-9和Caspase-3活性的測定
[0043] HCT116細胞接種于6孔板，每孔約1X105個細胞，用含鱉蛇抗癌方（125yg/ ml、250 y g/ml、500 y g/ml)、齊墩果酸（100 y M)和對照溶劑（0? 4 % DMS0)的培養液處 理細胞48h，消化收集細胞，加入蛋白裂解液，并用Bradford法測定蛋白濃度（按試劑 盒說明書進行）。Caspase-3和Caspase-9活性檢測：在96孔板中加入50 y 1檢測緩沖 液，再混入40 y 1待測樣品，最后加入10 y 1 Ac-LEHD-pNA(Casp