一種降血糖的土瓜提取物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥提取物領(lǐng)域，具體涉及一種土瓜提取物及含有該提取物的藥物制 劑，該提取物可以應(yīng)用于制備降血糖的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 藥材土瓜為旋花科魚黃草屬植物山土瓜的塊根。又名土蛋（《遵義府志》）、滇土瓜 (《植物名實(shí)圖考》）、山土瓜（《中藥形性經(jīng)驗(yàn)鑒別法》）、紅土瓜（《滇南本草》整理本）、土 附、山紅沼等。
[0003] 原植物山土瓜（學(xué)名：Merremiahungaiensis)為旋花科魚黃草屬的植物，為中國(guó) 的特有植物，分布在中國(guó)大陸的貴州、四川、云南等地。該植物為多年生纏繞草本，地下具 塊根，球形或卵狀，有時(shí)2-3個(gè)串生，表皮紅褐色、暗褐色或肉白色，含淀粉并有乳狀粘液。 莖細(xì)長(zhǎng)，圓柱形，有細(xì)棱，大多旋扭，無毛。葉橢圓形、卵形或長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)2. 5-11. 5厘米，寬 1. 2-5厘米，頂端鈍，微凹，漸尖或銳尖，具小短尖頭，基部鈍圓或楔形或微呈心形，邊緣微嚙 蝕狀或近全緣，兩面無毛，僅葉片基部被少數(shù)緣毛，有側(cè)脈5-6(-7)對(duì)，脈有時(shí)帶紫色；葉柄 長(zhǎng)0. 8-3. 5厘米，被短柔毛。聚傘花序腋生，花序梗長(zhǎng)2-6厘米，無毛，著生2-3或數(shù)朵花， 或單花生葉腋；苞片小，鱗片狀，長(zhǎng)約1毫米；花梗長(zhǎng)0. 5-2厘米，比花序梗粗壯，無毛；萼 片等長(zhǎng)，或外方2片稍短，橢圓形，頂端鈍，邊緣干膜質(zhì)，外萼片長(zhǎng)0. 7-1. 4厘米，內(nèi)萼片長(zhǎng) 1. 2-1. 5厘米，均無毛；花冠黃色，漏斗狀，長(zhǎng)3. 5-6厘米，瓣中帶頂端被淡黃色短柔毛，其余 無毛；雄蕊稍不等長(zhǎng)，花絲基部擴(kuò)大，被毛；花盤環(huán)狀；子房圓錐狀，2室，無毛，柱頭2球形。 蒴果長(zhǎng)圓形，高1-1. 3厘米，4瓣裂。種子長(zhǎng)5. 5-7毫米，極密被黑褐色茸毛。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種土瓜提取物，其制備方法和液相分析方法，含有該提 取物的藥物制劑及利用該提取物制備降血糖藥物的用途。
[0005]本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0006]-種土瓜提取物，該提取物由以下方法制備：
[0007] (a)以重量計(jì)，每100份藥材包含干燥的土瓜80~90份和干燥的甘草10~20 份，混合粉碎，用75 %乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮 液；(b)將步驟（a)所得乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正 丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁 醇萃取物用水溶解，過濾，用大孔樹脂富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個(gè)柱體積除去大 極性成分，再用70%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮即得。
[0008]為了能夠通過建立HPLC指紋圖譜的方法控制不同批次制備的提取物的批間差 異，所述提取物的液相分析方法為：
[0009]色譜柱：AgilentZorbaxExtent_C18柱（4.6mmX250mm，5ym);
[0010] 流動(dòng)相：A為乙腈，B為0. 5%磷酸溶液；
[0011]梯度洗脫程序：0~5min，A10%-15%;5 ~10min，A15%-48%;10 ~25min， A48%- 78% ;25 ~30min，A78%- 10%;
[0012] 流動(dòng)相流速：1.OmL?minS檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm;柱溫：35°C;進(jìn)樣量：10yL。
[0013] 藥物制劑，含有治療有效量的所述提取物和藥學(xué)上可接受的載體。
[0014] 所述的提取物在制備降血糖藥物中的應(yīng)用。
[0015] 所述的藥物制劑在制備降血糖藥物中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明提取物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物制劑的形式使用。
[0017] 所述藥物制劑含有治療有效量的本發(fā)明土瓜提取物，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對(duì)人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0018] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物制劑以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明提取物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0019] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明通過對(duì)干燥的土瓜和甘草進(jìn)行提取、除雜、富集處理，能得 到具有降血糖作用的提取物；本發(fā)明提供的液相分析方法可以用于建立該提取物的指紋圖 譜，用于控制不同批次制備的提取物的批間差異。
【附圖說明】
[0020] 圖1為土瓜提取物HPLC液相圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0022] 實(shí)施例1 :土瓜提取物①制備（85份土瓜，15份甘草）
[0023] 藥材來源：土瓜和甘草購自安徽亳州中藥材市場(chǎng)。
[0024] 主要試劑：食品級(jí)乙醇購自上海凌峰化學(xué)試劑有限公司；醫(yī)藥級(jí)AB-8大孔樹脂購 自天津波鴻樹脂有限公司；乙腈為HPLC級(jí)，購于TEDIA;85 %磷酸為HPLC級(jí)，購于TEDIA; 色譜用純凈水為哇哈哈純凈水。
[0025] 制備方法：將8. 5kg干燥土瓜根莖和1. 5kg干燥甘草混合粉碎，用75 %乙醇溶液 熱回流提?。?5LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙 醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的 正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g;(c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體 積1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個(gè)柱體積（12L)除去大極性成分，再用70% 乙醇洗脫12個(gè)柱體積（18L)，收集70 %洗脫液，減壓濃縮，即得土瓜提取物約150g。
[0026] 實(shí)施例2:土瓜提取物②制備（80份土瓜，20份甘草）
[0027] 制備方法：將8.Okg干燥土瓜根莖和2.Okg干燥甘草混合粉碎，用75 %乙醇溶液 熱回流提?。?5LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙 醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的 正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體 積1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個(gè)柱體積（12L)除去大極性成分，再用70% 乙醇洗脫12個(gè)柱體積（18L)，收集70 %洗脫液，減壓濃縮，即得土瓜提取物約150g。
[0028] 實(shí)施例3 :土瓜提取物③制備（90份土瓜，10份甘草）
[0029] 制備方法：將9. 0kg干燥土瓜根莖和1. 0kg干燥甘草混合粉碎，用75 %乙醇溶液 熱回流提?。?5LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙 醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的 正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體 積1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個(gè)柱體積（12L)除去大極性成分，再用70% 乙醇洗脫12個(gè)柱體積（18L)，收集70 %洗脫液，減壓濃縮，即得土瓜提取物約150g。
[0030] 實(shí)施例4 :土瓜提取物④制備（75份土瓜，25份甘草）
[0031 ] 制備方法：將7. 5kg干燥土瓜根莖和2. 5kg干燥甘草混合粉碎，用75 %乙醇溶液 熱回流提?。?5LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙 醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的 正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體 積1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個(gè)柱體積（12L)除去大極性成分，再用70% 乙醇洗脫12個(gè)柱體積（18L)，收集70 %洗脫液，減壓濃縮，即得土瓜提取物約150g。
[0032] 實(shí)施例5 :土瓜提取物⑤制備（95份土瓜，5份甘草）
[0033] 制備方法：將9. 5kg干燥土瓜根莖和0. 5kg干燥甘草混合粉碎，用75 %乙醇溶液 熱回流提?。?5LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙 醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的 正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體 積1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個(gè)柱體積（12L)除去大極性成分，再用70% 乙醇洗脫12個(gè)柱體積（18L)，收集70 %洗脫液，減壓濃縮，即得土瓜提取物約150g。
[0034] 實(shí)施例6 :液相色譜分析
[0035] 供試品溶液配制：取實(shí)施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加