抑制移植物抗宿主病的新型Lck的小分子抑制劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物醫藥領域的一種抑制移植物抗宿主病（GVHD)的新型Lck的小分 子抑制劑，尤其涉及一種對體細胞抗原受體（TCR)的信號傳遞具有強烈抑制作用的小分子 化合物，用于預防同種異體CAR-T治療過程中所產生的可能致命的GVHD。該化合物也適用 于同種異體骨髓移植所產生的GVHD。
【背景技術】
[0002] 嵌合抗原受體T細胞免疫療法（CAR-T療法）代表當今腫瘤免疫細胞治療技術的 最前沿，在急性淋巴細胞白血病的臨床試驗中獲得極大的成功。它的基本原理就是利用病 人自身的T細胞，嵌合抗原受體修飾后，可以特異性地識別腫瘤相關抗原，使效應T細胞的 靶向性、殺傷活性和持久性均較常規應用的免疫細胞高，并可克服腫瘤局部免疫抑制微環 境并打破宿主免疫耐受狀態。CAR-T治療分以下五步：1)從癌癥病人身上分離免疫T細胞。 2)利用基因工程技術給T細胞加入一個能識別腫瘤細胞，并且同時激活T細胞殺死腫瘤細 胞的嵌合抗體（CAR)，使T細胞變成CAR-T細胞。它不再是一個普通的T細胞，它是一個帶 著GPS導航，隨時準備找到癌細胞，并發動自殺性襲擊。3)體外培養，大量擴增CAR-T細。 4)把擴增好的CAR-T細胞輸回病人體內。5)嚴密監護病人，尤其是控制前幾天身體的劇烈 反應。
[0003] 目前的CAR-T療法是一種"個性化"的療法，細胞制品來自于患者自身，無法"現貨 供應"，只能"現做現用"，不僅操作復雜，不可控因素多，關鍵問題在于90%的患者由于自身 T細胞缺陷，尤其是在CAR-T治療前往往接受過化療和免疫抑制劑治療，T細胞數量和質量 達不到CAR-T制備的要求，因而無法接受CAR-T治療。鑒于這一問題，多個中心嘗試開發通 用型CAR-T，即采用正常異體來源的T細胞制備CAR-T，用于腫瘤患者的治療。這種策略顯 著拓寬了CAR-T的細胞來源，避免因患者自體T細胞因數量低、功能不足、擴增能力差等限 制應用。第三方細胞來源的CAR-T還具備易于操作、重復性好等優勢，更有利于大批量臨床 應用。同種異體CAR-T治療的主要風險是移植物抗宿主病（GVHD)。鑒于T細胞受體（TCR) 及其介導的信號通路是產生GVHD的關鍵因素，目前普遍采用的技術是通過敲除內源性TCR 基因以排除同種異體TCR導致的GVHD。但是，通過敲除TCR制備同種異體CAR-T目前遇到 敲除效率低等技術瓶頸，預計在若干年內都不能用于臨床。
[0004] TCR的信號傳遞需要關鍵的蛋白激酶，包括蛋白激酶Lck和ZAP-70。
[0005] Lck是T淋巴細胞所特異表達的一種蛋白激酶。它與輔助性T細胞和細胞毒性T 細胞的CD4和CD8共受體的細胞內段結合，從而協助TCR的信號轉導。當TCR被MHC所遞呈 的抗原激活后，Lck首先使CD3及TCR復合物的z鏈發生磷酸化，從而使細胞內的絡氨酸激 酶ZAP-70與之結合。然后，Lck使ZAP-70發生磷酸化，后者進一步使信號分子LAT(Linker ofActivatedTcells)發生磷酸化，參照圖1所示。
[0006] 另外，近年的研究發現，抑制Lck能增強CAR-T的抗腫瘤功能，尤其是對實體腫瘤 的殺傷作用。在實體腫瘤中常常有大量的調節性T細胞（Treg)浸潤，在這種情況下，CAR-T 的腫瘤細胞殺傷效果顯著降低。研究發現，抑制Lck能解除Treg對CAR-T的抑制作用。
[0007] 絡氨酸激酶Lck介導的信號轉導首先體現在細胞內Ca2+的移動以及一系列信號 分子的激活。這些信號分子包括Ras-MEK-ERK通路，后者激活一系列轉錄因子，包括NFAT、 NF-kB和AP-1，從而調節IL-2等基因的表達，促進T細胞的增殖和分化。因此，Lck抑制劑 不僅能有效地阻斷TCR介導的GVHD，同時能增強CAR-T的腫瘤殺傷效果，在同種異體CAR-T 治療以及骨髓移植方面具有良好的應用價值。
【發明內容】
[0008] 本發明的目的在于克服現有技術存在的以上問題，提供一種抑制移植物抗宿主病 的新型Lck的小分子抑制劑，旨在開發Lck的小分子抑制劑，抑制TCR的信號傳遞而不影響 T細胞的抗腫瘤功能，從而克服同源異體CAR-T治療過程中所引起的致命的GVHD。
[0009] 為實現上述技術目的，達到上述技術效果，本發明通過以下技術方案實現： 一種新型Lck小分子抑制劑，所述的Lck小分子抑制劑為FL-2501，其分子式為：
[0010] 進一步的，所述的新型Lck小分子抑制劑，用于抑制同種異體CAR-T治療過程中所 引起的移植物抗宿主病。
[0011] 進一步的，所述的Lck特異性小分子抑制劑為FL-2501的衍生物。
[0012] 進一步的，所述的Lck的特異性小分子抑制劑抑制TCR信號及T細胞活化，用于制 備同種異體CAR-T，避免其產生移植物抗宿主病。
[0013] 進一步的，所述的Lck的特異性小分子抑制劑抑制TCR信號及T細胞活化，用于預 防同種異體骨髓抑制所產生的移植物抗宿主病。
[0014] 本發明的有益效果是： 本發明的Lck的特異性小分子抑制劑通過抑制Lck使T細胞上的TCR受體信號轉導抑 制，進而抑制TCR介導的GBHD的產生。所發明的Lck的特異性小分子抑制劑可抑制同源異 體CAR-T治療所引起的GVHD，促進同源異體CAR-T的推廣和產業化。同時，這類化合物也可 用于預防同種異體骨髓抑制所引起的GVHD。
[0015] 本發明用高通量篩選法從化合物庫中篩選到對TCR信號具有高強度選擇性抑制 作用的小分子化合物，包括其藥學上可接受的鹽和前體藥。該化合物是蛋白激酶Lck的選 擇性抑制劑，在體外試驗中能抑制CAR-T細胞內TCR的信號傳遞，但不影響CAR-T的增殖和 腫瘤殺傷功能。此類化合物可以有效地抑制同種異體CAR-T治療過程中所產生的GVHD，促 進同種異體CAR-T的臨床應用。
[0016] 上述說明僅是本發明技術方案的概述，為了能夠更清楚了解本發明的技術手段， 并可依照說明書的內容予以實施，以下以本發明的較佳實施例并配合附圖詳細說明如后。 本發明的【具體實施方式】由以下實施例及其附圖詳細給出。
【附圖說明】
[0017] 此處所說明的附圖用來提供對本發明的進一步理解，構成本申請的一部分，本發 明的示意性實施例及其說明用于解釋本發明，并不構成對本發明的不當限定。在附圖中： 圖1是Lck參與TCR信號轉導的示意圖。當TCR被MHC所遞呈的抗原激活后，Lck首 先使CD3及TCR復合物的G鏈發生磷酸化，從而使細胞內的絡氨酸激酶ZAP-70與之結合。 然后，Lck使ZAP-70發生磷酸化，后者進一步使信號分子LAT(LinkerofActivatedT cells)