吉馬烷內酯倍半萜類化合物在制備抗補體藥物中的用圖
【技術領域】
[0001 ] 本發明屬中藥制藥領域，涉及紫花地丁中吉馬烷內酯倍半萜類化合物及其在制備 抗補體藥物中的新用途。
【背景技術】
[0002] 現有技術公開了補體系統的過度激活會引發系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、 急性呼吸窘迫綜合征等多種重大疾病。抗補體藥物研究多年來一直是世界藥學研究的熱點 和重點。然而目前對此類疾病尚缺乏較為理想的治療藥物，因此臨床上急需高效、低毒、專 一的新型補體抑制劑。從天然產物中研究開發補體抑制劑是近年來一個受到越來越多關注 的重要研究領域，其具有成本低、毒性低等特點。國內外學者已從包括海洋生物等在內的多 種天然產物中分離得到大量具有補體系統抑制作用的單體化合物，為抗補體藥物的研究與 開發提供了廣闊的前景。
[0003] 中藥紫花地丁為堇菜科植物紫花地丁（ViolayedoensisMakino)的干燥全草。其 性苦、辛、寒；歸心、肝經。具有清熱解毒，涼血消腫的功效；用于黃疸內熱、疔瘡腫毒、喉痹 腫痛等癥的治療。現有技術對紫花地丁的藥理研究僅集中在抗病毒和抗菌等方面，化學成 分研究發現了一些黃酮類、香豆素類、生物堿類和環肽類化合物，迄今為止尚未見從中發現 具有補體抑制作用的吉馬烷內酯倍半萜類化合物的報道。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供新的具有抗補體活性的物質，具體涉及紫花地丁中吉馬烷 內酯倍半萜類化合物，尤其是紫花地丁中吉馬烷內酯倍半萜類化合物地丁素A(1)、地丁素 13(2)、銀袋內酯乙（3)、&1^81:〇1&(31:〇116(4)和1]1&(1〇1;[111](5)。
[0005] 本發明的進一步目的是提供上述紫花地丁中吉馬烷內酯倍半萜類化合物在制備 抗補體藥物中的用途。
[0006] 本發明應用現代藥理篩選方法，對分離得到的單體化合物進行抗補體活性評價研 究，從紫花地丁（Violayedoensis)干燥全草乙醇提取物的石油醚萃取部位分離得到5個 倍半廠類化合物，并證實除aristolactone(4)僅對補體系統經典途徑有活性外，其余的化 合物對補體系統經典途徑和旁路途徑均有不同程度的抑制作用。
[0007] 本發明的抗補體活性倍半萜類化合物具有式I的化學結構：
[0008]
[0009] 本發明所述的吉馬烷內酯倍半萜化合物為地丁素A(yedoensinA，l)、地丁素 B(yedoensinB，2)、銀袋內酯乙（versicolactoneB，3)、aristolactone(4)和madolin U(5);其中，各取代基及化合物名稱如表1所示。
[0010] 表 1.
[0012] 本發明中，當沒有雙鍵、R1為在C-I和10之間形成環氧、R2為CH3時，化合物為地 丁素六(1);當雙鍵在八1° (14)位、1?1為（1-〇〇11、1?2為112時，化合物為地丁素8(2) ;當雙鍵在 A9(1。）位、R1為a-0H，R2為CH3時，化合物為銀袋內酯乙（3);當雙鍵在A1(1。）位、R1為H、 R2為CH3時，化合物為aristolactone(4);當雙鍵在A1(](14)位、R1為〇H、R2為H2時，化合物 為madolinU(5)〇
[0013] 本發明所述的倍半萜類化合物通過下述方法制備：
[0014] 取干燥的紫花地丁全草20kg，粉碎，用95 %乙醇室溫冷浸（50LX5次），合并 提取液并濃縮至無醇味，浸膏加水稀釋至2. 5L，依次以等體積石油醚^0-9(TC)、乙酸 乙酯、正丁醇萃取（各2. 5LX3次），合并石油醚萃取液并濃縮至干，即得石油醚萃取 物323g;石油醚萃取部位（200g)經硅膠柱色譜分離，依次以石油醚-乙酸乙酯（石 油醚，50:1，30:1，20:1，10:1，5:1，1:1)梯度洗脫，得到7個流份（Fr.A-G)，其中流份 Fr.E(22. 2g)再經硅膠柱色譜（石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑，30:1，20:1，15:1，10:1，5:1) 和SephadexLH-20柱色譜（氯仿-甲醇，1:1)反復純化，最后通過半制備HPLC[甲醇-水 (65:35)為洗脫劑]分離得到5個倍半萜類化合物，分別為地丁素A(l，16mg)、地丁素 13(2,511^)、銀袋內醋乙（3,711^)、&1'181:〇1&。1:〇116(4,711^)和1]1&(1〇1;[111](5,811^)。
2. 4Hz, H-14a)，5. 10 (1H, d,J=2. 4Hz, H-14b)，5.OO(1H, s, H-6)，4. 93 (1H, s, H-12a)，4. 83 ( 1H，s, H-12b)，3. 85 (1H, m, H-l)，2. 49-2. 53 (3H, m, H-3a, 7)，2. 29 (1H, m, H-2a)，2. 25 (1H, m，H -3b)，2. 10 (1H, m, H-2b)，I. 84 (3H, s, H-13)，I. 69-1. 84 (2H, m, H-9)，I. 46-1. 60 (2H, m, H-8); 13C-NMR (100MHz，acetone-d6) S :174. 3 (C-15), 152. 2 (C-10),148.8 (C-5), 147. 6 (C-Il),13 8. 2(C-4), 113. 6(C-14), 112. 2 (C-12),82. 8 (C-6),75. 2 (C-I),52. 0 (C-7),35. 8 (C-2),32. 2 (C-8), 24. 8(C-9), 21. 3(C-13), 20. 2(C-3) ;ESI-MS:m/z271[M+Na]+。
[0021] 本發明上述的吉馬烷內酯倍半萜類化合物通過經典途徑和旁路途徑體外抗補體 活性試驗測定，結果表明上述倍半廠類化合物中除aristolactone(4)僅對補體系統經典 途徑有活性外，其它化合物對補體系統的經典途徑和旁路途徑均有抑制作用（如表2所 示）。
[0022] 表2.化合物1-5對補體系統經典途徑和旁路途徑的抑制作用（Mean土SD，n= 3)
[0023]
[0024] 其中，CH5。是對經典途徑50 %抑制溶血所需供試品的濃度；AP5。是對旁路途徑 50%抑制溶血所需供試品的濃度；NE:無活性。
[0025] 本發明的倍半萜類化合物可制備抗補體藥物。
[0026] 本發明的倍半萜類化合物可進一步制備治療與補體相關疾病的藥物；所述的與補 體相關疾病包括系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、急性呼吸窘迫綜合征等疾病。
【附圖說明】：
[0027]圖1.紫花地丁醇提物石油醚萃取部位倍半萜類化合物1-5的提取分離流程圖。
【具體實施方式】
[0028] 實施例1.制備吉馬烷內酯倍半萜類化合物
[0029] 取干燥的紫花地丁全草20kg，粉碎，用95 %乙醇室溫冷浸（50LX5次），合并 提取液并濃縮至無醇味，浸膏加水稀釋至2. 5L，依次以等體積石油醚^0-9(TC)、乙酸 乙酯、正丁醇萃取（各2. 5LX3次），合并石油醚萃取液并濃縮至干，即得石