Creg蛋白用于預防或治療心肌梗死的醫藥用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及 E1A 激活基因阻遏子（Cellular Repressor of ElA-stimulated Genes，CREG)的醫藥用途，具體涉及CREG蛋白或其活性片段用于制備預防或治療心肌梗死 的藥物的用途。本發明還涉及CREG蛋白或其活性片段用于制備預防和/或治療心肌梗死 后心室重構、心肌梗死后心力衰竭的藥物的用途。
【背景技術】
[0002] 冠心病（Coronary Heart Disease, CHD)是嚴重威脅人類健康和生命的重大疾病 之一，其主要表現形式一急性心肌梗死（Acute Myocardial Infarction, AMI)和梗死后心 力衰竭是導致CHD患者死亡的重要原因。2013年發布的《中國心血管病研究報告》指出，中 國每年新發AMI至少50萬人，現患心肌梗死約有250萬人。AMI的高發病率、高致殘率和高 死亡率已成為我國重大公共衛生問題。
[0003] AMI發生時的心肌缺血是引起心肌損傷、壞死的主要原因。心肌缺血數秒內，心肌 細胞膜通透性增加，細胞內超微結構改變，細胞器腫脹、水腫、胞質外泄等，最終導致心肌細 胞死亡。心肌細胞為終末分化細胞，缺乏增殖及分化能力。因此，死亡心肌細胞不能由其 他心肌細胞分化補充，只能由心肌間質的成纖維細胞填充，使心室逐步發生重構，最終引起 AMI患者發生心力衰竭和死亡。目前，AMI的治療手段主要包括藥物溶栓、冠狀動脈介入治 療、冠狀動脈旁路手術等，雖然這些手段可在一定程度上緩解患者心肌缺血的癥狀，但是難 以對抗AMI后的心肌細胞損傷及心力衰竭。因此，尋找對抗心肌細胞損傷的藥物，從根本上 抑制AMI后心力衰竭，在AMI治療和改善其愈后中具有重要意義。
[0004] CREG基因是1998年美國哈佛大學醫學院Gill等從子宮頸內膜癌Hela細胞cDNA 文庫中克隆的一個細胞分化調控基因（Veal E, Mol Cell Biol, 1998 ;18(9):5032-5041)。 CREG蛋白是一種小分子量的分泌型糖蛋白，在成熟組織細胞中廣泛表達，具有維持組織和 細胞成熟分化的功能。CREG蛋白主要定位于細胞核周的高爾基體和溶酶體中，參與溶酶 體酶的轉運和細胞外因子的內吞（Schahs P，Exp Cell Res，2008,314(16):3036-3047; Kowalewski-Nimmerfall E, Biochim Biophys Acta, 2014, 1843 (12) : 2900-2912)。并且，已 有大量研究表明CREG蛋白參與多種心血管系統疾病的發生與進展。但是，CREG蛋白對AMI 后心肌細胞損傷及心力衰竭的作用及機制尚不清楚。
【發明內容】
[0005] 本發明的發明人通過大量實驗，令人驚奇地發現，小鼠AMI后心肌組織中CREG蛋 白表達水平明顯下降，CREG雜合子（CREG +/)小鼠AMI后死亡率明顯增加，心功能指標左室 射血分數（Ejection Fraction, EF% )和左室短軸縮短率（shortening fraction，FS% ) 均明顯降低，并且心肌纖維化程度加重，心室重構更明顯，向發生AMI后的小鼠外源性補充 CREG蛋白能明顯改善AMI后的心功能，EF%和FS%值顯著增加，并且心肌纖維化程度減輕， 心室重構現象改善，表明外源性補充CREG蛋白可用于預防或治療AMI以及AMI后的心力衰 竭及心室重構，本發明基于以上發現而完成。
[0006] 本發明第一方面涉及CREG蛋白或其活性片段在制備藥物中的用途，所述藥物用 于選自以下幾項中的一項或多項：
[0007] 1)預防和/或治療急性心肌梗死；
[0008] 2)預防和/或治療急性心肌梗死后心力衰竭；
[0009] 3)預防和/或治療急性心肌梗死后心室重構；
[0010] 4)改善急性心肌梗死后的心功能。
[0011] 本發明還涉及編碼CREG蛋白或其活性片段的核酸分子、表達CREG蛋白或其活性 片段的重組載體或重組細胞在制備藥物中的用途，所述藥物用于選自以下幾項中的一項或 多項：
[0012] 1)預防和/或治療急性心肌梗死；
[0013] 2)預防和/或治療急性心肌梗死后心力衰竭；
[0014] 3)預防和/或治療急性心肌梗死后心室重構；
[0015] 4)改善急性心肌梗死后的心功能。
[0016] 在本發明的實施方案中，所述重組載體含有編碼CREG蛋白或其活性片段的核酸 分子。
[0017] 本發明還涉及能夠抑制CREG蛋白或其活性片段表達下調或促進CREG蛋白或其 活性片段表達上調的試劑在制備藥物中的用途，所述藥物用于選自以下幾項中的一項或多 項：
[0018]1)預防和/或治療急性心肌梗死；
[0019] 2)預防和/或治療急性心肌梗死后心力衰竭；
[0020] 3)預防和/或治療急性心肌梗死后心室重構；
[0021] 4)改善急性心肌梗死后的心功能。
[0022] 本發明還涉及檢測CREG蛋白或其活性片段表達水平的試劑在制備試劑盒中的用 途，所述試劑盒用于選自以下幾項中的一項或多項：
[0023]1)急性心肌梗死的診斷和/或患病風險評估；
[0024] 2)急性心肌梗死后心力衰竭的診斷和/或患病風險評估；
[0025] 3)急性心肌梗死后心室重構的診斷和/或患病風險評估；
[0026] 4)急性心肌梗死后心功能的預測和/或評估。
[0027] 本發明還涉及CREG蛋白或其活性片段用于篩選預防和/或治療急性心肌梗死、急 性心肌梗死后心力衰竭和/或急性心肌梗死后心室重構的藥物的用途。
[0028] 在本發明的實施方案中，CREG蛋白或其活性片段可以作為靶蛋白用于篩選預防和 /或治療急性心肌梗死、急性心肌梗死后心力衰竭和/或急性心肌梗死后心室重構的藥物； 例如能夠抑制CREG蛋白或其活性片段表達下調和/或促進CREG蛋白或其活性片段表達上 調的試劑可以作為預防和/或治療急性心肌梗死、急性心肌梗死后心力衰竭和/或急性心 肌梗死后心室重構的藥物。
[0029] 本發明還涉及組合物，其含有CREG蛋白或其活性片段、編碼CREG蛋白或其活性片 段的核酸分子、表達CREG蛋白或其活性片段的重組載體或重組細胞、或者能夠抑制CREG蛋 白或其活性片段表達下調的試劑，以及任選的藥學上可接受的載體或賦形劑，所述組合物 用于選自以下幾項中的一項或多項：
[0030] 1)預防和/或治療急性心肌梗死；
[0031] 2)預防和/或治療急性心肌梗死后心力衰竭；
[0032] 3)預防和/或治療急性心肌梗死后心室重構；
[0033] 4)改善急性心肌梗死后的心功能。
[0034] 本發明還涉及試劑盒，其含有檢測CREG蛋白或其活性片段表達水平的試劑，所述 試劑盒用于選自以下幾項中的一項或多項：
[0035] 1)急性心肌梗死的診斷和/或患病風險評估；
[0036] 2)急性心肌梗死后心力衰竭的診斷和/或患病風險評估；
[0037] 3)急性心肌梗死后心室重構的診斷和/或患病風險評估；
[0038] 4)急性心肌梗死后心功能的預測和/或評估。
[0039] 在本發明中，所述CREG蛋白為重組CREG蛋白，來源于哺乳動物，特別是來源于人。 在本發明的實施方案中，所述CREG蛋白的GenBank號為NP_003842. 1。在本發明的實施方 案中，所述CREG基因的GenBank號為NM_003851. 2〇
[0040] 在本發明中，所述CREG蛋白的活性片段是指具有CREG蛋白功能的片段，其可以 為CREG蛋白的一部分，也可以為CREG蛋白的氨基酸序列經過缺失、添加或替換后得到的片 段；制備或得到CREG蛋白活性片段的方法為本領域所公知，例如該活性片段為包含CREG蛋 白與配體或受體結合的部分的片段，或者經過氨基酸的缺失、添加或替換后仍保留CREG蛋 白功能的片段。本領域技術人員公知，CREG蛋白上有一些關鍵的氨基酸和活性密切相關， 突變后會影響蛋白的活性，例如，CREG蛋白第136及137位賴氨酸突變為丙氨酸，或者CREG 蛋白第141-144位氨基酸缺失突變后，都會影響蛋白的活性和功能（Sacher M，PNAS，2005; 102 (51) : 18326-18331)。本領域技術人員可以根據需要避開上述這些可能影響活性的位 點，對其它位點進行缺失、添加或替換等改造，使得改造后的CREG蛋白仍具有CREG蛋白的 活性或功能。
[0041] 在本發明的實施方案中，所述CREG蛋白或其活性片段為糖基化蛋白或非糖基化 蛋白。
[0042] 在本發明中，所述糖基化CREG蛋白是指CREG蛋白的第160、193和216位氨基酸 存在糖基化修飾。
[0043] 在本發明中，所述非糖基化CREG蛋白是指CREG蛋白的氨基酸位點沒有糖基化修 飾。
[0044] 本領域技術人員公知，蛋白在真核細胞（例如酵母細胞、哺乳動物細胞）中表達時 可能發生糖基化修飾，在原核細胞中表達時通常不會發生糖基化修飾。糖基化CREG蛋白和 非糖基化CREG