一種基于響應面優化的亳菊總黃酮提取液的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種亳菊中總黃酮的提取方法，具體涉及一種基于響應面優化的亳菊 中總黃酮的提取方法。
【背景技術】
[0002] 養生保健酒已有數千年的歷史，是中醫藥科學的重要組成部分。隨著科學技術的 進步，從中藥浸酒的傳統工藝的基礎上已發展到利用萃取、浸提和生物工程等現代化手段， 提取中藥中的有效成分制成的功能性養生保健酒。
[0003] 作為亳州典型的地道藥材和四大名菊之一的亳菊，其中的有效成分主要是黃酮類 物質，具有疏風散熱、解暑明目、擴張冠狀動脈、降低血壓、預防高血脂、抗菌、抗病毒、抗炎、 抗衰老等功效。將亳菊的功能性成分與酒進行有效地融合，獲得具有最佳營養配方和舒適 口感的亳菊保健酒意義重大，而將亳菊中的功能性成分盡可能多地提取出來，尤為重要。黃 酮類化合物由于具有廣泛的藥用活性，常被用來評價菊花提取物品質優劣的重要指標。
[0004]目前文獻報道的菊花萃取方法有水煎法、酸堿浸提法、超聲提取法和超臨界萃取 法。水則、法的提取率較低，超聲提取法和超臨界萃取法等新型提取工藝因提取效率較尚而 受到廣泛關注，但由于在生產中存在投資過大，操作繁瑣等問題而限制了上述方法在工業 生產中的普及應用。而乙醇回流提取，具有無噪音、無污染、能耗低、提取率高等特點，屬環 境友好的提取方法。
【發明內容】
[0005] 本發明是為克服現有技術的不足，提供一種以乙醇為提取溶劑的亳菊總黃酮提取 液的制備方法。
[0006] 本發明應用響應面設計軟件對乙醇濃度、提取時間、提取次數三個因素進行響應 面條件優化，獲得較優的提取方法。
[0007] 本發明解決技術問題，采用如下技術方案：
[0008] 本發明基于響應面優化的亳菊總黃酮提取液的制備方法，其特點在于按如下步驟 進行：
[0009] (1)將亳菊通過粉碎機粉碎成亳菊粗粉；
[0010] (2)在亳菊粗粉中加入50%~90%的乙醇以50°C~90°C的溫度回流提取1~3 次，每次提取1~3. 5h，合并提取液；所述亳菊粗粉質量與回流提取所用乙醇總體積的比為 1:8 ~20g/mL;
[0011] (3)將提取液冷卻、離心，所得上清液即為亳菊總黃酮提取液。
[0012] 優選的，本發明基于響應面優化的亳菊總黃酮提取液的制備方法是按如下步驟進 行：
[0013] (1)將亳菊通過粉碎機粉碎成亳菊粗粉；
[0014] (2)在亳菊粗粉中加入78%的乙醇以85°C的溫度回流提取2次，合并提取液；第 一次回流提取時亳菊粗粉質量與所用乙醇體積的比為1: 7g/mL，提取時間為2h;第二次回 流提取時亳菊粗粉質量與所用乙醇體積的比為l:3g/mL，提取時間為I. 5h;
[0015] (3)將提取液冷卻、離心，所得上清液即為亳菊總黃酮提取物。
[0016] 其中，步驟（3)所述離心是在15°C下、以8000r/min的速度離心lOmin。
[0017] 通過本發明的優化方法，最終得到的亳菊總黃酮提取液中總黃酮的含量為 0.1277g/L〇
[0018] 與現有技術相比，本發明的積極效果是：
[0019] 本發明的方法操作簡單，所用溶劑為乙醇，廉價無毒，所得亳菊總黃酮提取液中總 黃酮含量達〇? 1277g/L。
[0020] 本發明通過響應面分析法對亳菊中總黃酮的提取工藝進行優化：首先利用單因素 實驗設計考察乙醇濃度、料液比（亳菊粗粉質量（單位為g)與所用乙醇體積（單位為mL) 的比）、提取溫度、提取時間、提取次數五個因素對黃酮提取量的影響。綜合發現乙醇濃度、 提取時間、提取次數對黃酮提取量影響顯著，再利用響應面實驗設計考察上述3個因素，得 到亳菊中總黃酮的最佳提取條件。
【附圖說明】
[0021] 圖1為實施例2中提取數據的方差分析；
[0022] 圖2為實施例2中提取數據的殘差正態概率分布圖；
[0023] 圖3為實施例2中預測值與實際值對應關系圖；
[0024] 圖4為實施例2中各因素的等高線分析，由左到右、由上到下分別為AB因素、BC因 素、AC因素和C因素的等尚線分析；
[0025] 圖5為實施例2中響應面提取優化的優化組合。
【具體實施方式】
[0026] 以下提供本發明基于響應面優化的亳菊總黃酮提取液的制備方法的具體實施方 式。
[0027] 應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解， 在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些 等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
[0028] 下述實施例中所得亳菊總黃酮提取物中總黃酮含量測定方法如下：
[0029] (1)儀器與試藥
[0030] 上海元夕儀器有限公司UV-9000分光光度計；蘆丁對照品；水為超純水，其它試劑 均為分析純。
[0031] (2)檢測條件
[0032]檢測波長：510nm。
[0033] (3)對照品溶液的制備
[0034] 精密稱取干燥至恒重的無水蘆丁IOmg于50mL容量瓶內，加適量95%乙醇溶解并 定容，搖勾，得0. 200mg/mL蘆丁對照母液。
[0035] (4)標準曲線的建立
[0036]精密量取蘆丁對照母液 2.OmL，4.OmL，6.OmL，8.OmL，10.OmL，12.OmL，14.OmL， 16.OmL分別置于25mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液lmL，混勻，放置6min，加10%硝酸鋁 溶液lmL，搖勾，放置6min，加10 %氫氧化鈉溶液10mL，用30 %乙醇定容至刻度，搖勾，靜置。 15min后，測試510nm下的吸光度值。以不含蘆丁的空白溶液作參比。以吸光度為縱坐標， 蘆丁對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線，并計算回歸方程為：Y= 0. 0850X-0. 0006。相關 系數為0.9972。
[0037] (5)含量測定
[0038] 吸取提取液10mL，用提取時的乙醇濃度溶解并定容至50mL，搖勻，得待測液。吸取 3mL待測液于25mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液lmL，混勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶 液lmL，搖勻，放置6min，加10%氫氧化鈉溶液10mL，用30%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置。 15min后，測試510nm下的吸光度值。以不含提取液的空白溶液作參比。結合標準曲線，即 獲得提取液中總黃酮的含量。
[0039] 實施例1
[0040] 本實施例根據本發明提供的方法，選用不同條件進行亳菊中總黃酮的提取優化。
[0041] 1、乙醇濃度對亳菊總黃酮提取液中總黃酮含量的影響
[0042] 稱取IOg亳菊粗粉，用IOOmL濃度分別為50 %，60 %，70 %，80 %，90 %的乙醇溶液 作為浸提溶劑，在70°C下回流提取2h，所得提取液冷卻后在15°C下、以8000r/min的速度離 心lOmin，獲得相應亳菊總黃酮提取液。按上述方法測定所得提取液的吸光度及總黃酮含 量，如表1所示。可以看出，當乙醇濃度為80%時，提取液中總黃酮的含量最大。
[0043]表1不同乙醇濃度下所得亳菊總黃酮提取液的吸光度和總黃酮含量
[0046] 2、料液比對亳菊總黃酮提取液中總黃酮含量的影響~
[0047]稱取IOg亳菊粗粉，分別用 80mL，100mL，120mL，140mL，160mL，180mL，200mL(即料 液比分別為1:8、1:10、1:12、1:14、1:16、1:18、1:20)濃度為80 %的乙醇溶液作為浸提溶 劑