注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米粒凍干制劑及制備方法
【專利說明】
[0001]技術領域:
本發明屬于藥物制劑領域，涉及注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米粒凍干制劑的制備方法。
[0002]【背景技術】:
惡性腫瘤嚴重威脅人類的健康，且近年來發病率急劇上升，其治療難度較大，死亡率僅次于心腦血管疾病，已成為嚴重地社會問題。雖然各種化學治療藥物不斷涌現，但都伴隨著嚴重地免疫系統抑制以及較大的毒副作用。難以提高患者的生存率以及生活質量；
紫杉烷類藥物具有較高的抗腫瘤活性，通過強化微管蛋白聚合作用和抑制微管蛋白解聚作用，形成穩定的非功能性微管束，從而抑制細胞的有絲分裂和增殖。但由于其水溶性較低，大大限制了紫杉烷類藥物在腫瘤治療中的應用。因此，尋找安全性高，生物相容性好的藥物運輸載體成為目前廣大科研工作者的主要任務。
[0003]白蛋白是一種內源性的蛋白，具有生物可降解，無毒，無抗原性等優點，其分子結構中存在多中藥物結合位點，對于不同種類的藥物均能有效負載，現以被美國食品藥品監督管理局(FDA)批準用于人體，因此白蛋白是一種理想的藥物運輸載體。
[0004]白蛋白載藥主要分為兩大類，一類是化學偶聯的白蛋白載藥體系，另一類是物理結合的白蛋白載藥體系。化學偶聯的白蛋白可以改善藥物的要帶動力學特征，但結合后形成了新的化學分子。物理結合形式的白蛋白給藥體系是一種更為理想的給藥模式，將藥物分子包裹或吸附在白蛋白納米粒內部或表面，可以明顯提高非水溶性藥物在水溶液中(即體內血液循環系統中)的穩定性與溶解度。同時，利用腫瘤組織的透過性增強以及滯留效應(EPR effect)可以使得白蛋白納米粒載藥體系達到革巴向給藥的目的。
[0005]由于白蛋白具有極好的水溶性，制備成納米粒之后其穩定性較差，因此，戊二醛等交聯劑經常被用來作為穩定劑從而得到穩定的納米顆粒，但戊二醛會非選擇性的結合白蛋白表面的氨基位點，在生物體內會釋放出醛類殘基，對生物體具有顯著的毒副作用，因此在一定程度上影響了紫杉烷類藥物對腫瘤的殺傷作用。本發明利用物理因素，通過將白蛋白加熱到一定溫度使其空間結構展開，利用微流控芯片的微流聚焦技術以及切向流技術，使空間結構舒展的白蛋白與紫杉烷類藥物均勻混合，之后利用物理因素使其快速降溫，將紫杉烷類藥物包載或吸附到白蛋白內部或表面，從而制備出粒徑均一，分散性好，具有較高藥物包封率，安全性高，生物相容性好的，可溶的紫杉烷類白蛋白納米粒制劑。
[0006]
【發明內容】
:
本發明的目的是克服現有白蛋白納米制備過程中添加過多有毒化學交聯劑，導致納米制劑毒性較大、生物相容性較差的缺陷，提供一種注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米粒凍干制劑的制備方法。
[0007]本發明提供的一種注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米粒凍干制劑，由以下組分組成(按份數比):紫杉烷類藥物0.1-20份，白蛋白20-70份，離子穩定劑15-60份，凍干骨架劑1-30 份。
[0008]本發明還提供了一種注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米粒凍干制劑的制備方法，其特征在于包括以下制備步驟:
1)離子穩定劑的配置，配置0.5-25%濃度的離子穩定劑；
2)將紫杉烷類藥物加入至無水乙醇中溶解，作為油相；紫杉烷類藥物在乙醇中的濃度在 l_50mg/ml ；
3)取白蛋白以及步驟I)配置的離子穩定劑以1:1-3的比例混合，作為水相；置于40-85°C的水浴鍋中孵育；
4)完成孵育后，將水相保持至40-85°C，油相與水相同時以1:2-5的比例的水流進行混合，通過在混合點的擠壓，碰撞以及白蛋白與紫杉烷類藥物的物理及化學吸附，形成白蛋白與紫杉烷類藥物均勻混合的納米膠束，通過在三通的出口端將液體快速降溫至0-10°C，形成穩定的紫杉烷類藥物白蛋白納米制劑；利用孔徑為50KD的中空纖維組件透濾濃縮至紫杉烷類藥物的濃度在5-20mg/ml ;
5)將步驟4)所得到的溶液濃縮，加入1-30%的常規凍干骨架劑，用0.22um的微孔濾膜過濾，凍干后即可得到注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米凍干制劑。
[0009]本發明所述的一種注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米粒凍干制劑，其特征在于: 步驟I)的離子穩定劑選用氯化鉀，氯化鈉，磷酸二氫鉀，磷酸氫二鉀，磷酸二氫鈉，磷酸二氫鈉中的任意一種。
[0010]本發明所述的一種注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米粒凍干制劑，其特征在于: 步驟2)的紫杉烷類藥物包括:紫杉醇，多西他賽，卡巴他賽。
[0011]本發明所述的一種注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米粒凍干制劑，其特征在于:步驟3)的白蛋白包括人血清白蛋白，牛血清白蛋白，羊血清白蛋白，驢血清白蛋白，馬血清白蛋白，兔血清白蛋白，豬血清白蛋白。
[0012]本發明的積極效果在于:
利用物理因素，通過將白蛋白加熱到一定溫度使其空間結構展開，利用微流控芯片的微流聚焦技術以及切向流技術，使空間結構舒展的白蛋白與紫杉烷類藥物均勻混合，之后利用物理因素使其快速降溫，將紫杉烷類藥物包載或吸附到白蛋白內部或表面，從而制備出粒徑均一，分散性好，具有較高藥物包封率，安全性高，生物相容性好的，可溶的紫杉烷類白蛋白納米粒制劑。本發明在制備紫杉烷類白蛋白納米粒制劑過程中未添加有毒的化學交聯劑，制備出的注射用紫杉烷類白蛋白納米粒制劑在注射過程中能減少對患者血管的刺激，減輕患者在用藥時的痛苦；同時避免交聯劑在生物體內釋放的有毒殘基對機體的損傷。本發明制備的注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米粒凍干制劑，經生理鹽水稀釋后的平均粒徑在200nm以下，能夠很好地利用腫瘤對于納米粒的增強滲透和滯留效應(EPR效應)，使更多的紫杉烷類藥物被動靶向聚集于腫瘤組織部位，從而提高紫杉烷類藥物的安全性、穩定性，并能延長藥物作用的時間，可降低藥物的毒副作用。本發明制備方法簡單，成本相對較低，生物相容性好，具有良好的應用前景。
[0013]【附圖說明】:
圖1為本發明中白蛋白納米粒的透射電子顯微鏡的圖像。
[0014]圖2為本發明中白蛋白納米粒在不同溶劑中的穩定性研究。
[0015]圖3為實施例5中不同濃度的紫杉醇化藥組、采用戊二醛作為化學交聯劑制備的紫杉醇白蛋白納米制劑組以及本方法制備的白蛋白納米凍干制劑對腫瘤細胞的抑制率的探究結果。
[0016]圖4為實施例6中生理鹽水組、紫杉醇化藥組、采用戊二醛作為化學交聯劑制備的紫杉醇白蛋白納米制劑組以及微流控芯片制備的白蛋白納米凍干制劑對荷瘤裸鼠作用的體內腫瘤生長曲線圖。
【具體實施方式】
[0017]下面通過具體實施例對本發明進行說明，但本發明并不限于此。
[0018]下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法，所述試劑盒材料，如無特殊說明，均可從商業途徑獲得。
[0019]實施例1.紫杉醇白蛋白納米凍干制劑的制備。
[0020](I)取20ml事先配制0.5%的氯化鉀溶液，與8ml人血白蛋白混合均勻，共同置于50 0C水浴鍋里孵育，作為水相。
[0021](2)準確稱取200mg紫杉醇溶于1ml的乙醇中，濃度為20mg/ml，作為油相。
[0022](3)將步驟(I)中孵育水相利用蠕動栗經熱交換器保持50°C，同時步驟(2)中的油相也在蠕動栗的作用下，以水相:油相栗速=2.5:1的比例同時進入微流控裝置的三通結構，在三通的出口端將混合的液體快速降溫至0-10°C。
[0023](4)將步驟(3)所得到的溶液利用中空纖維組件進行透慮濃縮，加入100mg甘露醇，用0.22um的微孔濾膜過濾后，得到注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米制劑的濃縮液，取一定量稀釋進行粒徑測定，平均粒徑129nm，將其凍干后即可得到注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米凍干制劑。
[0024]實施例2.紫杉醇白蛋白納米凍干制劑的制備。
[0025](I)取20ml事先配制5%的氯化鉀溶液，與8ml人血白蛋白混合均勻，共同置于50 0C水浴鍋里孵育，作為水相。
[0026](2)準確稱取300mg紫杉醇溶于1ml的乙醇中，濃度為30mg/ml，作為油相。
[0027](3)將步驟(I)中孵育水相利用蠕動栗經熱交換器保持70°C，同時步驟(2)中的油相也在蠕動栗的作用下，以水相:油相栗速=2.5:1的比例同時進入微流控裝置的三通結構，在三通的出口端將混合的液體快速降溫至0-10°C。
[0028](4)將步驟(3)所得到的溶液利用中空纖維組件進行透慮濃縮，加入100mg甘露醇，用0.22um的微孔濾膜過濾后，得到注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米制劑的濃縮液，取一定量稀釋進行粒徑測定，平均粒徑125nm，將其凍干后即可得到注射用紫杉烷類藥物白蛋白納米凍干制劑。
[0029]實施例3.多西他賽白蛋白納米凍干制劑的制備。
[0030](I)取20ml事先配制15%的氯化鉀溶液，與12ml人血白蛋白混合均勻，共同置于50 0C水浴鍋里孵育，作為水相。
[0031](2)準確稱取300mg多西他賽溶于1ml的乙醇中，濃度為30mg/ml，作為油