用于口服腸溶制劑制備的具有促腸吸收作用的利拉魯肽鹽的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥領域，具體涉及用于口服腸溶制劑制備的具有促腸吸收作用的利 拉魯肽鹽，明顯改善利拉魯肽口服吸收生物利用度。在糖尿病治療中的應用。
【背景技術】
[0002] 糖尿病是常見病，多發病，其患病率正隨著人們生活水平的提高，人口老齡化、生 活方式的改變而迅速增加。據統計我國現有糖尿病患者九千多萬，其中II型糖尿病患者占 90%左右，II型糖尿病的發病正趨向低齡化。糖尿病已成為居心血管病和腫瘤之后的第三 大非傳染性疾病，給社會和經濟帶來沉重的負擔。因此找到安全有效的降血糖及防治糖尿 病并發癥的藥物具有重要意義。
[0003] 利拉魯肽，英文通用名為Liraglutide，是一種人工合成的人胰高血糖素樣肽-1 類似物，由31個氨基酸殘基構成，其氨基酸序列為：H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser -Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε-(Ν-α -Palmitoyl-L-y-glu tamyl)) -Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-〇H。利拉魯肽是將天然 GLP-1 分子第34位賴氨酸被精氨酸取代，第26位賴氨酸上增加一個由谷氨酸介導的16碳棕櫚酰 脂肪酸側鏈，使其在保留天然功效的同時延長其酰化產物與蛋白結合時間，克服GLP-I易 降解的缺點。該藥物是由丹麥諾和諾德公司研制，2009年7月首次在歐盟上市。2010年1 月，在日本上市。2010年1月25日，美國食品與藥物管理局（FDA)批準利拉魯肽在美國上 市。2011年4月13日，獲中國食品藥品監督管理局批準，用于治療成人II型糖尿病。2011 年10月9日，正式在中國上市。該藥的商品名"諾和力"，適用于單用二甲雙胍或磺脲類藥 物最大可耐受劑量治療后血糖仍控制不佳的患者，與二甲雙胍或磺脲類藥物聯合應用，可 以對血糖進行有效的控制。目前，利拉魯肽已于2014年12月23日獲得美國FDA批準用于 減肥。利拉魯肽目前的給藥方式均采用皮下注射給藥。
[0004] 口服給藥是最普遍最易于被接受的給藥方式。但對很多藥物來說，口服給藥的吸 收效率并不好。比如蛋白、多肽、多糖、核酸等生物活性大分子由于酶降解、吸收差或不穩定 等因素，通常不能口服給藥。腸腔里生理環境復雜，藥物在腸腔中的總量還會由于水解、代 謝、胃腸道酶降解以及藥物由血漿向胃腸道的排泌而減少。因此，口服仍有許多問題需要解 決。
[0005] 成鹽是改善藥物分子理化性質、提高其成藥性的有效手段之一，可改變藥物的溶 解性，改善其依從性，提高其穩定性，減少其不良反應。由于利拉魯肽含有棕櫚酰側鏈，親脂 性較強，親水性較差，所以，為了改善其溶解性，本發明研究了利拉魯肽鹽。
[0006] 腸道吸收促進劑與透過性差的藥物共同服用時，會增加藥物的通過性，進而提高 其生物利用度。采用吸收促進劑促進藥物的吸收是比較普遍的方法（B. J. Aungst，J. Pharm. Sci. ，2000,89(4) :429-442)。
[0007] 目前，腸道促吸收劑有很多類型，其中中鏈脂肪酸及其鹽是常用的一類，其主要包 括辛酸鈉、癸酸鈉、十二碳酸鈉、月桂酸鈉和油酸鈉等。其中，癸酸鈉是一種低毒且有效的吸 收促進劑，并作為栓劑用于臨床，是一種被批準在藥品中使用的促吸收劑。其促吸收機理主 要是通過與膜的結合，使膜的結構產生紊亂，同時與細胞間緊密連接處的各種離子產生螯 合作用，導致肌動蛋白微絲收縮而暫時打開上皮緊密連接，調節緊密連接的孔徑促進吸收， 增加旁細胞轉運。癸酸鈉的這種螯合作用造成的腸細胞損傷具有可逆性，在停藥后可迅速 恢復，毒性較小，癸酸鈉促進藥物在腸道的吸收效果確切。（癸酸鈉增強黃連素對II型糖尿 病治療作用及作用機制研究，2011年，吉林大學，呂曉艷）
[0008] 利拉魯肽是否能夠口服應用，利拉魯肽成鹽后是否可以提高口服生物利用度，是 否能夠制備成腸溶制劑進行口服，現有技術沒有報道，為此，本發明將利拉魯肽與腸吸收促 進劑結合成鹽，以利拉魯肽鹽作為藥物活性成分，制備出一種利拉魯肽腸溶制劑，取得了意 想不到的效果。
【發明內容】
[0009] 本發明提供用于口服腸溶制劑制備的具有促腸吸收作用的利拉魯肽鹽，目的在于 通過利拉魯肽與腸吸收促進劑成鹽，改善利拉魯肽在腸道內的吸收，提高血藥濃度，改善生 物利用度，從而能廣泛應用于臨床。本發明采用的技術方法是：
[0010] 本發明所述利拉魯肽鹽是利拉魯肽與腸吸收促進劑反應形成的鹽，所述腸吸收促 進劑選自：癸酸鈉、癸酸鉀、苯磺酸、十二烷基苯磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鉀、辛酸鈉、辛酸 鉀、月桂酸鈉、月桂酸鉀、油酸鈉、油酸鉀。優選癸酸鈉，癸酸鉀。
[0011] 本發明所述利拉魯肽與腸吸收促進劑成鹽的方法是，利拉魯肽與腸吸收促進劑經 高效制備液相轉鹽制備成鹽，兩者的摩爾比為1:0.1-5。
[0012] 所述制備方法優選如：將利拉魯肽和癸酸鹽成鹽，兩者的摩爾比為1:0. 1-5,優選 1:0. 5-2. 5〇
[0013] 本發明的利拉魯肽鹽，優選利拉魯肽癸酸鈉，利拉魯肽辛酸鈉，利拉魯肽月桂酸 鈉。
[0014] 本發明得到的利拉魯肽鹽加入適當的藥用輔料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素、 滑石粉、交聯羧甲基纖維素鈉混合均勻，可制成相應的片劑、膠囊劑、顆粒劑、微丸劑等制 劑，優選的是口服腸溶制劑，本發明所述制劑是以本發明的利拉魯肽鹽作為藥物活性成分， 根據制劑學常規技術制備成口服藥物制劑，特別是口服腸溶制劑，如片劑、顆粒劑包裹上腸 溶衣，膠囊采用腸溶膠囊等。
[0015] 本發明進行了大量藥學研究及藥效動物實驗研究。研究表明，本發明的利拉魯肽 鹽口服腸溶制劑穩定性良好，載藥量大，影響因素試驗條件無明顯降解、聚集，且體內安全 性良好。本發明所采用的制備方法簡單，工藝條件易控制，適于大規模工業化生產，并易于 得到質量穩定的產品，批間差異小，便于質量控制。利拉魯肽口服腸溶制劑組降糖率不明 顯；利拉魯肽鹽的使用可以明顯的改善利拉魯肽藥物在腸道的吸收，提高血藥濃度，改善利 拉魯肽的生物利用度，增強療效。其中利拉魯肽癸酸鹽口服腸溶制劑組與皮下注射組降糖 率基本相當，效果最優。
[0016] 含利拉魯肽癸酸鹽口服腸溶制劑生物利用度明顯高于利拉魯肽口服制劑，生物利 用度在31%。
[0017] 為了說明的方便，現將文中所有的特殊詞匯作以說明，無特殊說明的情況下均按 以下內容進行理解：
[0018] 利拉魯肽鹽：利拉魯肽鹽指利拉魯肽與癸酸鈉、癸酸鉀、苯磺酸、十二烷基苯磺酸 鈉、十二烷基苯磺酸鉀、辛酸鈉、辛酸鉀、月桂酸鈉、月桂酸鉀、油酸鈉、油酸鉀所形成的鹽， 在本專利的情況下利拉魯肽與選自癸酸鈉、癸酸鉀、苯磺酸、十二烷基苯磺酸鈉、十二烷基 苯磺酸鉀、辛酸鈉、辛酸鉀、月桂酸鈉、月桂酸鉀、油酸鈉、油酸鉀任何一項的化合物形成的 復合物或混合物也稱為利拉魯肽鹽。
[0019] Hpmc :羥丙基甲基纖維素
[0020] 以下通過實驗數據進一步說明本發明的有益效果：
[0021] 利拉魯肽鹽口服腸溶制劑的穩定性考察
[0022] 取實施例2、實施例3、實施例4、實施例5制備的利拉魯肽鹽制劑各3份，分別置光 照（4500 ±500) lx、高溫（40 ±2) °C及高濕（70 ±5) %條件下放置10天，分別于第5天、10 天時取樣，觀察其外觀，測定主藥含量。各制劑外觀無顯著改變，實施例2-4主藥含量等無 顯著差異，制劑中利拉魯肽無明顯降解、聚集等現象。第5天、10天時取樣得到的各制劑主 藥含量數據見表1，其中主藥含量以實驗品實測主藥含量與對照品實測主藥含量的百分比 表不。
[0023] 表1各放置條件5天、10天主藥含量對比
[0025] 由上表可見，實施例2、實施例3、實施例4制備的利拉魯肽鹽口服腸溶制劑穩定性 較強，高溫、高濕、光照條件下放置10天，主藥含量無顯著減少。實施例5制備的利拉魯肽 未成鹽口服腸溶制劑主要含量下降明顯。表明成鹽后制劑穩定性明顯增加。
[0026] 利拉魯肽鹽口服腸溶制劑的體外釋藥試驗
[0027] 精密稱取實施例2、實施例3、實施例4、實施例5制備的利拉魯肽腸溶制劑于不同 的溶出杯中，加入PH6. 8的磷酸鹽緩沖液，胰蛋白酶，37°C條件下以100轉/分鐘攪拌，分別 于第15min、30min、45min、60min從溶液中吸取Iml測定利拉魯肽含量，計算利拉魯肽的累 積釋放量。結果見下表，表中釋放量以累計釋放的利拉魯肽占樣品制劑中利拉魯肽含量的 百分比表示。
[0028] 表2不同利拉魯肽鹽口服腸溶制劑60min內主藥釋放量對比
[0029]
[0030] 由表可見，制備的利拉魯肽鹽口服腸溶制劑60min后溶出大部分主藥，釋放作用 明顯，利拉魯肽成鹽樣品釋放主藥量明顯高于未成鹽利拉魯肽。不同利拉魯肽鹽口服腸溶 制劑60min內主藥釋放量趨勢對比詳見圖1。
[0031] 采用不同利拉魯肽鹽口服腸溶制劑對體內生物利用度的影響，配方中分別含利拉 魯肽鹽（癸酸鹽、辛酸鹽、月桂酸鹽）6mg、海藻糖30mg的口服腸溶制劑，并與空白組、皮下注 射組、利拉魯肽口服腸溶制劑組進行對比。
[0032] 表3組別及給藥情況
[0034] 表4不同利拉魯肽制劑體內生物利用度對比
[0035]
[0036] 結果表明：含利拉魯肽癸酸鹽口服腸溶制劑生物利用度明顯高于其他利拉魯肽口 服制劑，生物利用度在31%