魚腦磷脂提取物及其在制備免疫調節劑中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物醫藥，具體地說是魚腦磷脂在預防和治療免疫低下中的應用；進 一步說是魚腦磷脂在制備預防和治療免疫低下的藥物或保健食品中的應用。
【背景技術】
[0002] 惡性腫瘤，已經成為人類死亡的第一位或第二位原因，1996年以來全球每年新確 診腫瘤病人1000萬以上，約有700萬人死于癌癥，惡性腫瘤大多發生于免疫力低下人群，因 此市場和臨床上對療效好、毒副反應小、免疫激活保健品和藥物需求量激增。
[0003] 白細胞介素是由多種細胞產生并作用與多種細胞的一類免疫細胞因子。白細胞介 素在傳遞信息，激活與調節免疫細胞，介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應中起重 要作用。目前至少發現了 38種白介素，其中多種白介素參與機體免疫調節。例如巨噬細胞 分泌的IL-1，能夠與抗原協同作用，活化T細胞、促進B細胞生長和分化，吸引中性粒細胞， 引起炎癥介質釋放；IL-2主要由T細胞產生，刺激NK細胞增殖，增強NK殺傷活性，目前IL-2 已通過生物工程技術大量生產，在腫瘤治療和提高免疫中起重要作用。此外，其他的白介素 如IL-6、腫瘤壞死因子TNF-a均參與殺死和抑制腫瘤細胞作用。
[0004] 由于腫瘤的頑固性，細胞毒性藥物難以克服腫瘤細胞及瘤體內乏氧部分的抗藥 性，而通過改善患者的免疫狀態卻有其獨特的優點。白細胞介素可以通過體液免疫、細胞免 疫調節機體的免疫能力，激活巨噬細胞、NK細胞等免疫細胞的活性，間接殺傷腫瘤細胞，參 與癌癥的治療，并且拮抗腫瘤患者由放療和化療導致的免疫抑制，因此不失為提高免疫力、 抗腫瘤的新途徑。
[0005] 已有研宄表明，魚腦磷脂具有多種生物活性，包括免疫調節的作用。作為棄物利用 的有效方式，魚腦磷脂相關研宄在吸引越來越多的關注。本發明的申請人長期從事魚腦磷 脂相關的研宄工作，對魚腦磷脂的提取方法及活性進行了系統而完整的探查。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的之一，在于提供一種魚腦磷脂提取物，所述提取物通過下述方法制 備：
[0007] (1)制備魚腦組織勻漿，向其中添加5~10U/g木瓜蛋白酶，攪拌均勻，并調節混合 物pH值為6~7,4°C冷藏4~6h;
[0008] (2)室溫條件下，按lg勻漿：1~3ml溶劑的比例向步驟⑴所得的混合物中加入 溶劑，攪拌，靜置十分鐘后抽濾，收集濾液，脫水旋干得提取物I;
[0009] 所述溶劑為氯仿和甲醇按照體積比2:1~2的混合物；
[0010] (2)將提取物I溶于氯仿后進行硅膠柱層析，以4~6倍柱體積的氯仿、2~4倍 柱體積丙酮依次洗脫（中性脂、糖脂和色素），然后用甲醇沖洗；
[0011] (3)甲醇洗脫組分脫除溶劑，即得魚腦磷脂提取物。
[0012] 本發明另一方面的目的，在于提供上述提取物的制備方法，所述方法包括如下步 驟：
[0013] (1)制備魚腦組織勻漿，向其中添加5~10U/g木瓜蛋白酶，攪拌均勻，并調節混合 物pH值為6~7,4°C冷藏4~6h;
[0014] (2)室溫條件下，按lg勻漿：1~3ml溶劑的比例向步驟⑴所得的混合物中加入 溶劑，攪拌，靜置十分鐘后抽濾，收集濾液，脫水旋干得提取物I;混合物與溶劑的比例優選 lg:2ml；
[0015] 所述溶劑為氯仿和甲醇按照體積比2:1~2的混合物；優選2:1 ;
[0016] (2)將提取物I溶于氯仿后進行硅膠柱層析，以4~6倍柱體積的氯仿、2~4倍 柱體積丙酮依次洗脫（中性脂、糖脂和色素），然后用甲醇沖洗；
[0017] (3)甲醇洗脫組分脫除溶劑，即得魚腦磷脂提取物。
[0018] 在本發明的研宄過程中，發明人發現，現有技術中用于提高魚腦磷脂提取率的木 瓜蛋白酶在本發明的用法條件下，對于腦磷脂的提取率并不產生很大影響，但卻有助于提 高提取物的免疫調節活性，提高提取物誘導免疫細胞產生白介素的能力。
[0019] 因此，本發明的再一目的在于提供所述的魚腦磷脂提取物在制備免疫調節劑中的 應用。尤其是作為白介素誘導劑類免疫調節劑的應用。
[0020] 本發明所述的魚腦磷脂提取物具有更好的免疫調節作用，可作用于多種免疫細 胞，增加IL-1、IL-2、IL-6、TNF-a的表達。有望應用于預防和治療免疫低下及抗腫瘤。
【具體實施方式】
[0021] 本發明公開了一種魚腦磷脂提取物及其制備方法，所述提取物通過下述方法制 備：
[0022] (1)制備魚腦組織勻漿，向其中添加5~10U/g木瓜蛋白酶，攪拌均勻，并調節混合 物pH值為6~7,4°C冷藏4~6h;
[0023] 該步驟中，所述的木瓜蛋白酶的添加量優選7~8U/g;pH值優選7 ;
[0024] (2)室溫條件下，按lg勻漿：1~3ml溶劑的比例向步驟⑴所得的混合物中加入 溶劑，攪拌，靜置十分鐘后抽濾，收集濾液，脫水旋干得提取物I;
[0025] 所述溶劑為氯仿和甲醇按照體積比2:1~2的混合物；
[0026] (2)將提取物I溶于氯仿后進行硅膠柱層析，以4~6倍柱體積的氯仿、2~4倍 柱體積丙酮依次洗脫（中性脂、糖脂和色素），然后用甲醇沖洗；
[0027](3)甲醇洗脫組分脫除溶劑，即得魚腦磷脂提取物。
[0028] 更為具體的實施方式中，所述的魚腦磷脂提取物的其制備方法包括如下步驟：
[0029] (1)制備魚腦組織勻漿，向其中添加7~8U/g木瓜蛋白酶，攪拌均勻，并調節混合 物pH值為7,4°C冷藏4~6h;
[0030] (2)室溫條件下，按lg勻漿：2ml溶劑的比例向步驟⑴所得的混合物中加入溶 劑，攪拌，靜置十分鐘后抽濾，收集濾液，脫水旋干得提取物I;
[0031] 所述溶劑為氯仿和甲醇按照體積比2:1的混合物；
[0032] (2)將提取物I溶于氯仿后進行硅膠柱層析，以4~6倍柱體積的氯仿、2~4倍 柱體積丙酮依次洗脫（中性脂、糖脂和色素），然后用甲醇沖洗；
[0033] (3)甲醇洗脫組分脫除溶劑，即得魚腦磷脂提取物。
[0034] 本發明另一方面闡述了所述魚腦磷脂提取物在制備免疫調節劑中的應用。尤其是 作為白介素誘導劑類免疫調節劑的應用。
[0035] 具體的實施方式中，所述的魚腦磷脂提取物可作為原料，應用于免疫調節劑類藥 物或食品組合物的制備。這些藥物或食物組合物可通過激活免疫細胞分泌白細胞介素發揮 作用，用于治療和預防免疫低下、腫瘤等。
[0036] 結合本領域現有技術，所述"藥物"可以毫無疑義地理解為各種藥物制劑，包括但 不限于加人各種醫藥輔料所制得的散劑、顆粒劑、片劑、膠囊、栓劑、懸浮液、乳化液、噴劑、 注射液或粉針劑等。根據不同劑型特點，在使用這些藥物進行治療時，可以通過各種相應的 途徑給藥，典型但不限于可經口服給藥、注射給藥及粘膜給藥。所謂"食品組合物"，即通常 意義的食品或保健品。
[0037] 以下為本發明的具體實施例，這些實施例僅為進一步說明本發明，不應當理解為 對本發明任何形式的限制。
[0038] 實施例1.