用于人腫瘤的溶瘤脊髓灰質炎病毒的制作方法
【專利說明】用于人腫瘤的溶瘤脊髓灰質炎病毒
[0001]本發明是利用由美國政府提供的資金完成的。根據國立衛生研宄院的資助條款ROl CA87537、P50 NS20023、R01 CA124756 和 ROl CA140510，美國政府享有一定的權利。
[0002]發明的
技術領域
[0003]本發明涉及抗腫瘤治療領域。具體地，其涉及溶瘤病毒抗腫瘤治療。
[0004]發明背景
[0005]PVS-RIPO是一種溶瘤脊髓灰質炎病毒(PV)重組體。其由減活I型(薩賓)PV疫苗組成，所述疫苗含有人鼻病毒2型(HRV2)的外源內部核糖體進入位點(IRES)。IRES是位于PV基因組5’非翻譯區內的、介導病毒的、不依賴m7G-帽翻譯的順式作用遺傳因子。
[0006]PVS-RIPO溶瘤治療已經在組織培養試驗(6、7、10、15-17)和動物腫瘤模型中被報道，但并未在人臨床試驗中報道。由于組織培養、動物模型和人之間的差異，療效是不可預測的。而且，用于臨床前研宄的病毒制劑通常是不純的，所以任何活性在調查中都不能歸因于藥劑。
[0007]本領域沒有提供這樣的溶瘤病毒藥劑的實例:其中腫瘤模型中的生物活性正確預測了患者中的療效。此原因是，溶瘤病毒治療是在(a)感染的惡性細胞、(b)非惡性腫瘤微環境和(C)宿主免疫系統之間的復雜三角關系的結果。這種錯綜復雜的系統還沒有在任何動物模型中重現。
[0008]在本領域中不斷需要鑒定和開發對于人有效的抗癌治療，尤其是對腦腫瘤患者。
[0009]發明概述
[0010]根據本發明的一個方面，提供了一種治療攜帶實體腫瘤的人的方法，所述實體腫瘤表達NECL5(CD155、HVED、Necl-5、PVS、TAGE4;柄蛋白(nectin)樣 5 ;柄蛋白樣蛋白 5)。將嵌合脊髓灰質炎病毒構建體直接施用至人體內腫瘤。該嵌合脊髓灰質炎病毒包括帶有在所述脊髓灰質炎病毒的三葉草和所述脊髓灰質炎病毒的開放閱讀框之間的所述脊髓灰質炎病毒5’非翻譯區中的人鼻病毒2(HRV2)內部核糖體進入位點(IRES)的脊髓灰質炎病毒的薩賓I型菌株。
[0011]這些及其它的實施方式一一在閱讀本說明書之后將對本領域技術人員顯而易見一一向本領域提供了治療腫瘤的方法，包括腦腫瘤。
[0012]附圖簡述
[0013]圖1A-1B (原圖8)。瘤內PVS-RIPO輸注誘導腫瘤逐步退化。圖1A.根據模擬(□)或PVS-RIPO( ■)治療的腫瘤體積。圖1B.在所示間期下從腫瘤中回收的平均病毒。
[0014]圖2(原圖12)。來自2012年4月16日的MRI。顯示疾病進展的軸位增強Tl加權 MRI ο
[0015]圖3(原圖13)。來自2012年5月9日的MRI。輸注PVS-RIPO前獲得的軸位增強Tl加權MRI。
[0016]圖4(原圖14)。來自2012年5月11日的MRI。顯示腦內Gd-DTPA對比劑和可推測地PVS-RIPO分布的軸位增強Tl加權MRI。
[0017]圖5(原圖15)。來自2012年6月6日的MRI。顯示疾病穩定性的軸位增強Tl加權 MRI ο
[0018]圖6(原圖16)。來自2012年7月9日的MRI。揭示對疾病進展關注的軸位增強Tl加權MRI。
[0019]圖7(原圖17)。來自2012年7月11日的18-FDG PET掃描。結果提示了在MRI所關注的區域沒有代謝亢進活性。
[0020]發明詳述
[0021]發明人已經開發了用于人的病毒構建體。先前，病毒構建體的實驗室級制劑已經在細胞培養和動物模型中進行測試。但這些測試不足以把任何效果都歸因于除粗制實驗室級制劑中的其它成分外的病毒構建體本身。而且，正如本領域所熟知，細胞培養和動物模型并不能預測人體內的療效。
[0022]由于脊髓灰質炎病毒是一種潛在的病原，所以必須采取額外的預防措施以確保致病因子不被引入到受試者。利用良好的制造工序和純化，制成足夠純的制劑以準許在試驗中引入人中。
[0023]可以使用直接將制劑施用至腫瘤的任何技術。直接施用不依賴于動脈血管系統而進入腫瘤。可以將制劑涂在腫瘤的表面、注射到腫瘤內、在手術過程中灌輸到腫瘤部位內/處、通過導管輸注到腫瘤內等。可以使用的一個具體技術是對流增強輸送。
[0024]任何人腫瘤都可以得到治療，包括兒童腫瘤和成人腫瘤。腫瘤可以在任何器官內，例如，腦、前列腺、乳房、肺、結腸和直腸，各種類型的腫瘤都可以得到治療，包括，例如，成膠質細胞瘤、成神經管細胞瘤、癌、腺癌等。其它腫瘤的實例包括腎上腺皮質癌、肛門癌、闌尾癌、I級(間變性)星細胞瘤、II級星細胞瘤、III級星細胞瘤、IV級星細胞瘤、中樞神經系統的非典型畸胎樣/橫紋肌樣腫瘤、基底細胞癌、膀胱癌、乳腺肉瘤、支氣管癌、支氣管肺泡癌、宮頸癌、顱咽管瘤、子宮內膜癌、子宮內膜子宮癌、成室管膜母細胞瘤、室管膜細胞瘤、食管癌、鼻腔嗅神經母細胞瘤、尤文氏肉瘤、顱外生殖細胞腫瘤、性腺外生殖細胞腫瘤、肝外膽管癌、纖維組織細胞瘤、膽囊癌、胃癌、胃腸道類癌腫瘤、胃腸道間質腫瘤、妊娠滋養細胞腫瘤、妊娠滋養細胞腫瘤、神經膠質瘤、頭頸癌、肝細胞癌、肝門部膽管癌、咽下癌、眼內黑素瘤、胰島細胞瘤、卡波西肉瘤、朗格漢斯組織細胞增生癥、大細胞未分化肺癌、喉癌、唇癌、肺腺癌、惡性纖維組織細胞瘤、髓質上皮瘤、黑素瘤、梅克爾細胞癌、間皮瘤、內分泌瘤形成、鼻腔癌、鼻咽癌、成神經細胞瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢透明細胞癌、上皮性卵巢癌、卵巢生殖細胞腫瘤、胰腺癌、乳頭狀瘤病、鼻竇癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、松果體實質腫瘤、松果體母細胞瘤、垂體瘤、胸膜肺母細胞瘤、腎細胞癌、15號染色體變化的呼吸道癌、成視網膜細胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、鱗狀非小細胞肺癌、鱗狀頸部癌、幕上原始神經外胚層腫瘤、幕上原始神經外胚層腫瘤、睪丸癌、喉癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、腎盂癌、尿道癌、子宮肉瘤、陰道癌、外陰癌和腎母細胞瘤。
[0025]任選地，根據NECL5表達可將患者進行分組。例如可以在RNA或蛋白水平下利用探針、引物或抗體對其進行測定。NECL5表達可指導用本發明的嵌合脊髓灰質炎病毒治療或者不治療的決策。NECL5表達還可用于指導治療的進攻性(aggressiveness)，包括治療的劑量、頻率和持續時間。
[0026]治療方案可包括一一除嵌合脊髓灰質炎病毒構建體的遞送之外一一腫瘤的手術切除、腫瘤的手術減小、化學治療、生物治療、放射治療。這些形式是多種疾病狀態中的標準治療(standard of care)，并且患者不必被拒絕該標準治療。可以在標準治療之前、期間或之后施用嵌合脊髓灰質炎病毒。可以在標準治療失敗之后施用嵌合脊髓灰質炎病毒。
[0027]申請人已發現，嵌合脊髓灰質炎病毒的臨床藥物制劑具有極好的遺傳穩定性和同質性。這是特別有利的，因為已知脊髓灰質炎病毒在培養物和天然生物儲蓄泡(reservoirs)中是高度易變的。可以使用用于遺傳穩定性和同質性的任何合適的分析。用于穩定性的一種分析涉及對在39.5攝氏度下無生長能力進行測試。另一種分析涉及集群測序(bulk sequencing) ο還有另一個分析涉及對靈長類神經毒力進行測試。
[0028]盡管申請人不希望被任何特定的作用機理所限制，但相信多種機理可有助于其療效。這些包括癌細胞的裂解、免疫細胞的募集和對癌細胞的特異性。此外，病毒是神經減活的。
[0029]上述公開內容對本發明進行了總體描述。本文公開的所有參考文獻都通過引用明確并入。更加全面的理解可以通過參考以下具體實施例而獲得，在此提供的實施例僅用于說明的目的，而并不意在限制本發明的范圍。
[0030]實施例1
[0031]動物腫瘤模型。PVS-RIPO的IND指導的療效試驗是在無胸腺小鼠的HTB-15GBM異種移植模型中進行的。PVS_RIP0(大多來自臨床)以‘針對小鼠調整過的(mouse-adjusted) ’、FDA批準的最大起始劑量[為小鼠中減少的腫瘤大小將FDA批準的最大起始劑量(10e8TCID)調整到(6.7X10e6 TCID)]施用。輸送模擬預期的臨床路徑，即，緩慢的瘤內輸注。在這些條件下，15天后PVS-RIPO誘導所有動物中的完全腫瘤退化(圖8A)。盡管到第10天病毒從所治療的腫瘤中回收，但水平最多是適中的，這表明直接病毒性腫瘤細胞殺傷單獨并不能說明治療效果(圖8B)。
[0032]來自動物腫瘤模型的證據表明，PVS-RIPO的瘤內接種引起直接病毒誘導的腫瘤細胞殺傷并引發針對感染/殺傷的腫瘤的強有力的宿主免疫反應(3、7、10)。對病毒輸注的反應特征在于強烈的局部炎癥反應，導致腫瘤的免疫浸潤(immune infiltrat1n)。最終對PVS-RIPO輸注的緩慢組織反應導致腫瘤塊的死亡和其疤痕取代。
[0033]實施例2
[0034]臨床試驗。IND第14，735號‘PVSRIP0針對復發性成膠質細胞瘤的劑量發現和安全性研宄(Dose-finding and Safety Study of PVSRIP0 Against RecurrentGl1blastoma)’在2011年6月19日被FDA批準并在2011年10月27日被IRB批準。復發性成膠質細胞瘤(GBM)患者的I/II期臨床試驗(NCT01491893)目前正在招募患者。
[0035]至今為止已經有兩名人受試者按IRB批準的方案使用PVS-RIPO進行治療。來自第一名受試者的初步發現將在實施例3中進行描述。
[0036]實施例3
[0037]第一名受試者的初步發現。患者是一名21歲女護士生，其被確診有右額GBM(WHOIV級)。在20歲，2011年6月她被首次確診，伴有嚴重頭疼和對于疑似鼻竇感染的不成功治療的病史。腦成像在2011年6月17日獲得并顯示出大的右額團塊，大小5X6cm。2011年6月22日她接受了右額團塊次全切除術，病理學確認為GBM(WHO IV級)。考慮到患者的年齡、她良好的身體狀況