一種穩定的抗vegf抗體制劑及其用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物技術領域，具體地涉及一種穩定的抗VEGF抗體制劑及其用途。
【背景技術】
[0002] 治療用抗VEGF單克隆抗體藥物，能夠特異性結合VEGF-A并抑制VEGF-A與 VEGF-Rl和VEGF-R2的結合，阻斷PI3K-Akt/PKB和Ras-Raf-MEK-ERK等信號通路的傳導，抑 制血管內皮細胞的生長、增殖和遷移以及血管新生，降低血管滲透性，阻斷腫瘤組織的血液 供應,抑制腫瘤細胞的增殖和轉移,誘導腫瘤細胞凋亡,產生抗腫瘤作用。
[0003] 目前已知的多數抗VEGF抗體制劑的穩定性不高，儲存中易發生物理變化（例如聚 集和片段化）、化學變化（例如脫酰胺、氧化），導致聚合物和電荷異構體的增多，使得產品 的質量一致性和安全性受到潛在影響。因此有必要開發一種新型抗VEGF抗體制劑以提高 抗體的穩定性，從而提高產品質量的均一性和臨床使用安全性。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種穩定的抗VEGF抗體制劑及其用途。
[0005] 本發明第一方面提供了一種抗體液體制劑，所述制劑包括：
[0006] (i)治療有效量的抗VEGF單克隆抗體；
[0007] (ii)含I. 0-5. Omg/ml醋酸鈉的醋酸鈉-醋酸緩沖體系；
[0008] (iii)滲透壓調節劑；以及任選的
[0009] (iv)表面活性劑，
[0010] 其中，所述制劑的pH為5. 0-6.0。
[0011] 在另一優選例中，所述抗VEGF單克隆抗體為貝伐單抗（Bevacizumab)的抗體。
[0012] 在另一優選例中，所述抗VEGF抗體的濃度為15-35mg/ml。
[0013] 在另一優選例中，所述抗VEGF抗體的濃度為20-30mg/ml，優選為22-28mg/ml，最 優選為25mg/ml。
[0014] 在另一優選例中，所述醋酸鈉的濃度為1. 0-5. Omg/ml，優選為I. 5-3. 3mg/ml。
[0015] 在另一優選例中，所述制劑的pH為5. 0-6. 0,優選為5. 0-5. 5。
[0016] 在另一優選例中，所述抗VEGF抗體為單克隆抗體。
[0017] 在另一優選例中，所述單克隆抗體為全長抗體。
[0018] 在另一優選例中，所述單克隆抗體為IgGl抗體。
[0019] 在另一優選例中，所述單克隆抗體為人源化抗體。
[0020] 在另一優選例中，所述單克隆抗體為包含抗原結合區的抗體片段。
[0021] 在另一優選例中，所述抗體片段為Fab或F(ab' )2片段。
[0022] 在另一優選例中，所述單克隆抗體結合VEGF。
[0023] 在另一優選例中，所述制劑的pH為5. 0-6. 0,優選為5. 0-5. 5,最優選為5. 2。
[0024] 在另一優選例中，所述滲透壓調節劑為多元醇。
[0025] 在另一優選例中，所述滲透壓調節劑包括山梨醇、蔗糖、海藻糖或甘露醇。
[0026] 在另一優選例中，所述滲透壓調節劑的濃度為20-100mg/ml，優選為40-80mg/ml。
[0027] 在另一優選例中，所述表面活性劑的濃度為0· 2-1. Omg/ml，優選為0· 4-0. 7mg/ ml 〇
[0028] 在另一優選例中，所述的滲透壓調節劑用于將所述的制劑滲透壓調節為 270_330m0sm/L。
[0029] 在另一優選例中,所述表面活性劑包括聚山梨酯。
[0030] 在另一優選例中，所述聚山梨酯包括聚山梨酯80、山梨酯20。
[0031] 在另一優選例中，所述制劑具有下組的一種或多種特征：
[0032] (a)所述制劑在2_8°C保存至少2年，且純度下降的百分比低于5% ;
[0033] (b)所述制劑適合靜脈注射。
[0034] 在另一優選例中，所述制劑包括：
[0035] (a) 15_35mg/ml 抗 VEGF 單克隆抗體；
[0036] (b) 1. 0-5. Omg/ml 醋酸鈉；
[0037] (c)20_100mg/ml 多元醇；
[0038] (e)0. 2-1. Omg/ml聚山梨酯80或聚山梨酯20，
[0039] 并且所述制劑的pH為5. 0-6. 0。
[0040] 本發明第二方面，提供了一種本發明第一方面所述制劑的用途，所述制劑用于制 備治療VEGF相關性疾病的藥物。
[0041] 在另一優選例中，所述的VEGF相關性疾病指由于VEGF過表達造成的病理性狀態， 優選地，包括結直腸癌、非小細胞肺癌、乳腺癌、腎細胞癌、多形性膠質母細胞瘤和卵巢癌。 [0042] 本發明第三方面，提供了一種藥盒，所述的藥盒含有一容器以及位于所述容器內 的本發明第一方面所述的制劑。
[0043] 在另一優選例中，所述的容器的容積為3、5、10、20ml。
[0044] 本發明第四方面，提供了一種制備穩定的抗VEGF抗體制劑的方法，其特征在于， 包括步驟：
[0045] (a)將治療有效量的抗VEGF抗體、含L 0-5. Omg/ml醋酸鈉的緩沖體系、滲透壓調 節劑以及任選的表面活性劑進行混合；
[0046] (b)將混合后的混合物pH值調整至pH為5. 0-6. 0 ;
[0047] 從而獲得一種穩定的抗VEGF抗體制劑。
[0048] 在另一優選例中，所述的穩定的抗VEGF抗體制劑在在2_8°C保存至少2年，且抗 VEGF抗體純度下降的百分比低于5 %。
[0049] 應理解，在本發明范圍內中，本發明的上述各技術特征和在下文（如實施例）中具 體描述的各技術特征之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【具體實施方式】
[0050] 本發明人經過廣泛深入的研究發現，抗VEGF抗體與特定濃度的含醋酸鈉的緩沖 體系、多元醇（如甘露醇、山梨醇、蔗糖或海藻糖）、以及表面活性劑（如聚山梨酯）組成的 液體制劑在pH為5. 0-6. O的條件下，不僅在外觀、濁度等方面保持優異的穩定性，而且制劑 的物理和化學穩定性得到顯著地提高，制劑中聚合物和電荷異構體的生成速率明顯降低， 制劑的存放時間得到有效延長。在此基礎上完成了本發明。
[0051] 如本文所用，所述"液體制劑"是指如下形式的制備物，使得容許活性組分的生物 學活性有效，且不含別的對會施用該制劑的受試者有不可接受的毒性的成分。受試者包括 哺乳動物，優選為人。
[0052] 如本文所用，所述"抗體穩定性"是指一種抗體在貯藏后基本上保留其物理穩定性 和/或化學穩定性和/或生物學活性。貯藏期一般基于制劑的預定貨架期來選擇。多種用 于測量抗體穩定性的分析技術是本領域所公知的。
[0053] 可以在選定溫度下用選定時間測定穩定性。優選的是，所述制劑在室溫或30°C至 40°C下能穩定至少1個月和/或在大約2-8°C下穩定至少2年，且抗VEGF抗體純度的下降 小于5%。
[0054] 如果在通過對顏色和/或透明度進行肉眼檢查，或通過UV光散射或通過大小排阻 層析測定時基本沒有表現出明顯的聚集，沉淀和/或變性的跡象，則制劑中的抗體保持它 的物理穩定性。
[0055] 如果在特定時間化學穩定性使得抗體被認為仍然保留了下面所定義的生物學活 性，則在制劑中，所述抗體保持它的化學穩定性。可以通過檢測和定量所述抗體的化學改變 形式評估化學穩定性。化學改變可能涉及大小改變（例如，剪切），例如，可以通過采用大 小排阻層析，SDS-PAGE和/或矩陣輔助的激光解析離子化/飛行時間質譜分析（MALDI/T0F MS)進行評估。其他類型的化學改變包括電荷改變（例如，因為脫酰胺導致的改變），例如， 可以通過離子交換層析對它進行評估。
[0056] 如果一種制劑中的抗體具有它預期用途的生物學活性，則所述抗體在制劑中保持 它的生物學活性。例如，如果所述制劑中的抗體的生物學活性為在制備所述制劑時所表現 出的生物學活性的大約70%-130% (在測定的誤差范圍內）內，就認為保持了它的生物學 活性（例如，通過抗原結合測定確定）。
[0057] 如本文所用，所述"治療有效量"或"有效量"表示在藥理學含義上，在本發明的范 圍內，在預防或治療疾病方面的有效