一種低分子量肝素緩釋制劑及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種低分子量肝素緩釋制劑及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002]我國已經步入人口老齡化社會，老年人口數量逐漸增多。在老年人群體中，血栓類疾病是最為常見的疾病之一，發病率高，患者群廣，血栓形成的后遺癥嚴重影響病人的工作能力，甚至致殘。
[0003]在抗血栓類治療藥物中，肝素類藥物因其源自生命體內的生物成分，具有治療效果好、生物相容性、安全等優點而備受關注。在肝素類藥物中，低分子肝素(LMWH)具有抗凝血、抗血栓、調血脂等作用，臨床上主要用于治療和防治深部靜脈血栓、肺栓塞、播散性血管內凝血等疾病，已廣泛用于心血管疾病防治領域。LMWH是由普通未分級肝素(UFH)經化學或酶解聚的方法得到的低分子量(Mw)的肝素片段，或經分級法得到的低Mw的肝素組分，其Mw范圍一般為3000?8000Da，平均Mw為5000Da左右。
[0004]與UHl相比，LMWH具有皮下注射吸收好，半衰期長，生物利用度高，與血漿、血小板親和力小等優點。但LMWH存在體內半衰期短及其溶液劑靜脈注射時大出血副作用較為嚴重的不足，且需要頻繁給藥，大大降低了藥物的治療功效、用藥的安全性以及患者的順應性，因此研宄其緩釋注射劑具有重要的臨床意義。
[0005]CN101024086 A公開了殼聚糖及其衍生物與低分子量肝素形成的復合物及制劑與制備方法，該發明利用殼聚糖及其衍生物與低分子量肝素形成的納米/微米復合物作為載體來增加細胞對低分子肝素的攝取，利用殼聚糖及其衍生物的生物黏附性和短暫打開細胞間的緊密連接的特性進一步增加低分子肝素透過生物膜的量，通過復合物的形成提高低分子肝素的穩定性，從而提高用藥的生物利用度。但殼聚糖只有在強酸性條件下溶解、生理條件下溶解度低，同時殼聚糖具有較高的毒性和較差生物相容性，這些缺陷嚴重限制其在生物體內的應用。另外，殼聚糖及其衍生物與低分子量肝素形成的復合物及制劑未采用交聯手段將納米顆粒固化，顆粒在生理介質的干預下，容易導致低分子量肝素快速大量釋放，容易影響制劑的體內穩定性和治療效率。
[0006]因此，在本領域，期望得到一種能夠緩慢釋放LMWH，有效延長LMWH的體內半衰期，降低LMWH使用時大出血的風險，避免血藥濃度“峰谷”波動較大，使釋藥平穩，降低藥物的毒副作用，改善患者的順應性，提高對疾病的治療效率的低分子量肝素制劑。
【發明內容】
[0007]針對現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種低分子量肝素緩釋制劑及其制備方法和應用。
[0008]為達到此發明目的，本發明采用以下技術方案:
[0009]一方面，本發明提供了一種低分子量肝素制劑，所述低分子量肝素緩釋制劑包含由多肽和低分子量肝素形成的納米顆粒，所述多肽之間通過化學鍵進行交聯。
[0010]本發明的低分子量肝素緩釋制劑包含多肽和低分子量肝素，二者通過靜電作用形成納米顆粒，基于多肽分子之間的交聯使低分子量肝素具有緩釋功效，有效延長其血液半衰期，避免藥物“峰谷波動”，有效平穩釋藥，降低其溶液劑大劑量使用時大出血的風險，降低藥物的毒副作用，改善患者的順應性，提高對疾病的治療效率。
[0011]現報道的肝素制劑均未采用交聯手段，形成的納米顆粒僅基于靜電力的相互作用，穩定性差，在生理介質(如磷酸鹽緩沖液)的干預下容易導致肝素的突釋，無法有效保證用藥安全。本發明使用的多肽由生物體內的氨基酸構成，具有生物可降解、生物相容性好，生理條件下溶解度高等優勢，其安全性更好。同時本發明通過化學鍵如共價鍵、離子鍵、氫鍵等共同作用將多肽交聯，通過多肽的緩慢降解達到緩慢釋放肝素的效果，降低肝素的副作用，降低LMWH使用時大出血的風險，減少了給藥頻率，改善患者的順應性，制劑的體內穩定性更優，保證臨床的用藥安全及提高了對疾病的治療效率。
[0012]在本發明所述的低分子量肝素緩釋制劑中，所述多肽與低分子量肝素的質量比為 1:100 ?100:1，例如 1:100、1:90、1:80、1:70、1:60、1:50、1:40、1:30、1:20、1:15、1:10、1:5、1:3、1:1、2:1、5:1、8:1、10:1、15:1、18:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1、50:1、60:1、70:1、80:1、90:1 或 100: 1，優選 1:20 ?1:100，進一步優選 1:20 ?1:50，在所選的優選比例下，顆粒的粒徑更加均勻，更容易控制在10nm以下，而且電位更加可控，工藝的重現性好。
[0013]在本發明所述的低分子量肝素緩釋制劑中，所述多肽的分子量為500?50000Da，例如 500Da、lOOODa、1500Da、2000Da、2500Da、3000Da、4000Da、6000Da、8000Da、lOOOODa、15000Da、20000Da、25000Da、30000Da、35000Da、40000Da、45000Da 或 50000Da，優選 1000 ?30000Dao
[0014]優選地，所述多肽為由精氨酸、組氨酸、賴氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、丙氨酸或亮氨酸中的任意一種或至少兩種形成的多肽。
[0015]優選地，所述化學鍵為二硫鍵、離子鍵或氫鍵中的任意一種或至少兩種。
[0016]在本發明所述的低分子量肝素緩釋制劑中，所述低分子量肝素的分子量< 8000Da,例如 7500Da、7000Da、6500Da、6000Da、5500Da、5000Da、4500Da、4000Da、3500Da或 3000Da，優選 3000 ?7000Da。
[0017]優選地，所述低分子量肝素為肝素鈉、達肝素鈉、那曲肝素鈣、磺達肝素鈉或依諾肝素鈉中的任意一種或至少兩種的組合。
[0018]在本發明所述的低分子量肝素緩釋制劑中，所述納米顆粒的平均粒徑為50?200nm，例如 50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、llOnm、120nm、130nm、140nm、150nm、160nm、170nm、180nm、190nm 或 200nm，優選 60 ?150nm。
[0019]在本發明所述的低分子量肝素緩釋制劑中，所述納米顆粒的表面電位為-20?20mV，例如-20mV、_18mV、-15mV、_13mV、_10mV、_8mV、-5mV、0mV、5mV、8mV、10mV、13mV、15mV、18mV、20mV，優選-20 ?_5mV。
[0020]在本發明所述的低分子量肝素緩釋制劑中，所述低分子量肝素緩釋制劑為凍干粉針劑、無菌粉針劑或納米溶液劑中的任意一種。
[0021]另一方面，本發明提供了如第一方面所述的低分子量肝素緩釋制劑的制備方法，所述制備方法采用自組裝技術、冷凍干燥技術、均質技術、乳化技術、包埋技術或噴霧干燥技術中的任意一種或至少兩種的組合，優選自組裝技術、均質技術和冷凍干燥技術的組合。
[0022]自主裝技術可有效調控顆粒的粒徑大小，具有顆粒粒徑可控、工藝穩定、易于生產的優勢；通過均質技術可更進一步的有效控制制劑的粒徑分布，排除大顆粒對制劑安全性的影響；通過冷凍干燥技術，有效降低藥物和輔料的降解速率(如水解和氧化等)，提高制劑的長期穩定性。通過以上多重技術的控制，期待得到粒徑均勻、穩定性好、療效確切的緩釋納米制劑。
[0023]作為優選技術方案，本發明所述的低分子量肝素緩釋制劑的制備方法包括以下步驟:
[0024](I)將多肽加入葡萄糖溶液中，形成多肽溶液，而后加入Traut’ s試劑，攪拌反應制得巰基化多肽；
[0025](2)向巰基化多肽中加入葡萄糖