五味子醇提物及其在制備抗肝纖維化藥物中的應用
【技術領域】：
[0001] 本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及五味子醇提物在制備抗肝纖維化藥物或保健 食品中的應用。
【背景技術】：
[0002] 肝炎、肝纖維化、肝硬化和肝癌，是目前臨床上的常見病、多發病，嚴重威脅著人們 的健康和生命。肝炎是一種世界性肝病，目前全球約有3億肝炎患者，我國乙肝病毒感染者 約有1億多人，其中經過肝纖維化后，發展成肝癌的約有30-40萬人。另外，目前中國環境 污染造成的化學毒物或毒素性肝損傷，以及酗酒人群增加導致的酒精性肝病，慢性肝病患 者在2000萬人的基數上不斷攀升。每年用于肝病的醫療、保健費用達1000多億元。由于 在肝病治療方面缺乏有效的治療藥物，肝損傷長時間得不到治愈，導致大量慢性肝炎出現， 其中很大一部分會轉變成肝硬化和肝癌。
[0003] 肝纖維化是肝臟對各種病因（病毒、寄生蟲感染、藥物性損傷）所致慢性肝損傷的 修復反應，是大多數慢性肝病共有的病理特征，是進一步向肝硬化發展，甚至惡變的主要中 間環節。有研宄發現肝纖維化甚至早期肝硬化都是可以逆轉的，阻斷或延緩肝纖維化的發 生發展，對于多種伴隨肝纖維化的慢性肝病的治療具有重要意義。早期預防肝纖維化的發 生發展或促進其逆轉，是防止肝硬化發生發展的重要策略。目前對治療肝損傷、肝纖維化、 肝硬化和肝癌的藥物研宄有很多，其主要運用抗病毒、抗纖維化等治療措施，但嚴重的副作 用問題日益突出。因此，致力于抗肝纖維化藥物的研宄開發，將具有很大的社會效益和經濟 效益。
[0004] 五味子為木蘭科植物五味子的干燥成熟果實，主要產于西北和東北地區。五味子 的干燥成熟果實是民間常用的滋補性中藥，在傳統中醫學中具有斂肺滋腎，生津止汗，澀精 止瀉，寧心安神等功效，可用于肺虛咳嗽、津虧口渴、盜汗、慢性腹瀉等病癥的治療。五味子 中主要含有五味子多糖、揮發油和木脂素成分。現代藥理研宄表明，醇提物成分具有多種生 物活性：保肝、抗氧化、抗老年癡呆、調節血壓、改善膽固醇血癥、抗癌等作用。
[0005] 目前尚無文獻報道五味子醇提物具有抗肝纖維化功效。
【發明內容】
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[0006] 本發明的目的在于提供一種五味子醇提物；本發明的另一目的在于提供該五味子 醇提物的制備方法；本發明的第三目的在于提供五味子醇提物的新的醫藥用途，具體是在 制備抗肝纖維化藥物或保健食品中的應用。
[0007] 本發明的第一方面，提供一種五味子醇提物，所述的五味子醇提物是根據如下方 法制備得到的：
[0008] (A)提取：將五味子藥材粉碎后，投入提取罐，加入80 %-95 %乙醇，提取溫度 60-80°C，乙醇水用量為藥材重量的5-30倍，提取次數1-3次，提取時間為1-3小時，合并提 取液；
[0009] (B)濃縮：將上述提取液合并后進行過濾，濃縮至無醇狀態；
[0010] (C)萃取：取⑶中濃縮液加水稀釋，用乙酸乙酯萃取1-5次，合并萃取液，濃縮至 干；
[0011] (D)純化：取（C)中濃縮干的樣品，用1-2倍重量的乙酸乙酯溶解，拌上正相硅膠， 烘干后上樣，硅膠與樣品的重量比為0. 5:至2 :1之間，然后過正相柱層析；上樣體積與裝 柱硅膠體積比例為5-25 : 1 ;上樣流速為l-4ml.miiT1;吸附時間為2-8h;以石油醚乙酸乙 酯體系做洗脫劑，石油醚：乙酸乙酯分別按照10 :1，5 :1，1 :1，1 :5依次，洗脫，用量為2-10 倍柱體積，洗脫流速為2-6Bv? 1T1，收集洗脫比例為1 :1至1 :10比例的餾分，濃縮至干，得 五味子提取物。
[0012] 本發明的第二方面，提供一種五味子醇提物的制備方法，所述的制備方法如下：
[0013] (A)提取：將五味子藥材粉碎后，投入提取罐，加入80 %-95 %乙醇，提取溫度 60-80°C，乙醇水用量為藥材重量的5-30倍，提取次數1-3次，提取時間為1-3小時，合并提 取液；
[0014] (B)濃縮：將上述提取液合并后進行過濾，濃縮至無醇狀態；
[0015] (C)萃取：取⑶中濃縮液加水稀釋，用乙酸乙酯萃取1-5次，合并萃取液，濃縮至 干；
[0016] (D)純化：取（C)中濃縮干的樣品，用1-2倍重量的乙酸乙酯溶解，拌上正相硅膠， 烘干后上樣，硅膠與樣品的重量比為0. 5:至2 :1之間，然后過正相柱層析；上樣體積與裝 柱硅膠體積比例為5-25 : 1 ;上樣流速為l-4ml.miiT1;吸附時間為2-8h;以石油醚乙酸乙 酯體系做洗脫劑，石油醚：乙酸乙酯分別按照10 :1，5 :1，1 :1，1 :5依次，洗脫，用量為2-10 倍柱體積，洗脫流速為2-6Bv? 1T1，收集洗脫比例為1 :1至1 :10比例的餾分，濃縮至干，得 五味子提取物。
[0017] 本發明的第三方面，提供了五味子醇提物在制備抗肝纖維化藥物或保健食品中的 應用。
[0018] 所述的五味子醇提物是用以下工藝方法制得的：
[0019] (A)提取：將五味子藥材粉碎后，投入提取罐，加入80 %-95 %乙醇，提取溫度 60-80°C，乙醇水用量為藥材重量的5-30倍，提取次數1-3次，提取時間為1-3小時，合并提 取液；
[0020] (B)濃縮：將上述提取液合并后進行過濾，濃縮至無醇狀態；
[0021] (C)萃取：取⑶中濃縮液加水稀釋，用乙酸乙酯萃取1-5次，合并萃取液，濃縮至 干；
[0022] (D)純化：取（C)中濃縮干的樣品，用1-2倍重量的乙酸乙酯溶解，拌上正相硅膠， 烘干后上樣，硅膠與樣品的重量比為0. 5:至2 :1之間，然后過正相柱層析；上樣體積與裝 柱硅膠體積比例為5-25 : 1 ;上樣流速為l-4ml.miiT1;吸附時間為2-8h;以石油醚乙酸乙 酯體系做洗脫劑，石油醚：乙酸乙酯分別按照10 :1，5 :1，1 :1，1 :5依次，洗脫，用量為2-10 倍柱體積，洗脫流速為2-6Bv? 1T1，收集洗脫比例為1 :1至1 :10比例的餾分，濃縮至干，得 五味子提取物。
[0023] 上述步驟中，最關鍵的是步驟A、C和步驟D。
[0024]如果不是用乙酸乙酯萃取，而采用其它萃取方法，無法更好地將木脂素類成分萃 取出來，采用乙酸乙酯萃取木脂素類成分的含量高。
[0025]所述的快速正相柱層析中的"快速"是指本發明采用上樣體積比例為5-25 : 1;上 樣流速為l_4ml?miiT1;吸附時間為2-8h;分別先以水、15%除雜；以石油醚乙酸乙酯體系 做洗脫劑，石油醚乙酸乙酯用量為2-10倍柱體積，洗脫流速為2-6Bv?h'
[0026] 本發明所得的五味子醇提物，其中總木脂素類成分的含量（重量百分比）為： 25%，五味子甲素：2%，五味子乙素：12%，五味子丙素：3%。
[0027]本發明所述的五味子醇提物在制備抗肝纖維化藥物或保健食品中的應用，所述的 藥物是由藥物活性成分五味子醇提物成分和藥學上可接受的輔料組成的藥物組合物。
[0028] 所述的藥學上可接受的輔料是指藥學領域常規的藥物輔料，其中，稀釋劑、賦形劑 如水等；粘合劑如纖維素衍生物、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等；填充劑如淀粉等；崩裂劑如碳 酸鈣或碳酸氫鈉；也可以在組合物中加入其他輔助劑如香味劑和/或甜味劑。
[0029]所述的藥物組合物可采用醫學領域常規的方法，將五味子醇提物作為活性成分， 與藥學上可接受的輔料制成各種劑型。當口服時，可將其制備成常規的固體制劑如片劑、粉 劑或膠囊劑等；用于注射時，可將其制備成注射液。在各種制劑中，活性成分的重量含量為 0? 1 %~99. 9%，優選的重量含量為0? 5~90%。
[0030] 所述的藥物組合物可以用于制備抗肝纖維化藥物制劑。
[0031] 可以按劑型通過腹腔注射、皮下注射、靜脈注射、肌肉注射、淋巴結內注射、粘膜用 藥等途徑應用于需要治療的個體。個體可以是人或動物。劑量一般為1~1000 mg/公斤體 重/天，具體可根據個體的年齡、病情等進行變化。
[0032] 本發明人研宄發現五味子醇提物具有顯著的抗肝纖維化活性。本發明經動物實驗 證明：五味子醇提物可顯著降低CCl4誘導的肝纖維化大鼠血清中ALT、AST的濃度，改善肝 組織病理癥狀，提高大鼠肝臟III型膠原的含量，具有良好的抗肝纖維化活性，因此可用于 制備抗肝纖維化藥物或食品。
【附圖說明】：
[0033] 圖I:BDL的HE染色，A為假手術組（空白對照組），B為模型組，C為給藥組（五 味子醇提物組）；
[0034] 圖2:BDL的S-red染色，A為假手術組（空白對照組），B為模型組，C為給藥組 (五味子醇提物組）；
[0035] 圖3 :CCL4造模給藥后HE染色，A為假手術組（空白對照組），B為模型組，C為給 藥組（五味子醇提物組）；
[0036] 圖4 =CCL4造模給藥后S-red染色，A為假手術組（空白對照組），B為模型組，C為 給藥組（五味子醇提物組）。
【具體實施方式】：
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