包括芳香族防腐劑和抗氧化劑的高濃度因子vii多肽制劑的制作方法【專利說明】包括芳香族防腐劑和抗氧化劑的高濃度因子VlI多肽制劑[0001]本申請是國際申請日為2008年4月30日、國際申請號為PCT/EP2008/055348、進入國家階段的申請號為200880014075.8、發明名稱為"包括芳香族防腐劑和抗氧化劑的高濃度因子VII多肽制劑"的PCT申請的分案申請。
技術領域：
[0002]本發明涉及新的可即用因子VII多肽制劑（下文中：液體水性藥物組合物），包括高濃度的因子VII多肽、緩沖劑及至少一種芳香族防腐劑和至少一種抗氧化劑的組合。【
背景技術：
】[0003]參與凝血級聯的因子VII已被證明是治療各種病理學狀況的有效治療劑。因此，越來越需要包括活化因子VII多肽的制劑，所述制劑是藥學上可接受的并顯示一致的和預定的臨床功效。[0004]現在商品化供應的重組制備的因子VII多肽組合物NovoSeven?(NovoNordiskA/S，Denmark)是，例如，以小瓶（約3.OmL容積）存在，包含I.2mg重組人因子711&，5.8411^恥(：1，2.9411^〇3(：12,21120,2.6411^617617,0.1411^聚山梨醇酯80和60.011^甘露醇。使用前將該產品用2.OmL注射用水（WFI)重建為pH5.5,從而得到因子VII多肽的濃度為約〇?6mg/mL。[0005]對于需要施用更大量（例如10_20mg)活化因子VII多肽（例如rhFVIIa)的治療應用，利用像NovoSeven?組合物的制劑是不方便的，因為通常需要通過注射施用相當大的體積（例如15-30mL)。[0006]因此，需要包括相對較高濃度的活化因子VII多肽的液體藥劑。[0007]因子VII多肽的液體制劑容易通過自溶作用降解。這對高濃度制劑來說是特別嚴重的，限制了液體穩定性。包含因子VII抑制劑/穩定劑的因子VII多肽的液體制劑先前已經被描述過。但是，這些因子VII抑制劑/穩定劑必須與因子VII多肽分子一起注射，而因子VII抑制劑/穩定劑對人類的影響通常是不知道的。[0008]WO2005/002615Al公開了一種液體、水性藥物組合物，包括因子VII多肽；適于維持pH范圍為約5.0到約9.0的緩沖劑；至少一種包含金屬的試劑，其中所述金屬選自由除了鋅以外的氧化態+11的第一過渡系金屬組成的組；和非離子型表面活性劑。這種類型的一些離子，例如銅，具有已知的毒性，這使該類型的一些制劑不適合給人類施用。[0009]WO2005/016365Al公開了一種液體、水性藥物組合物，包括至少0.0lmg/mL的因子VII多肽（i);適于維持pH范圍為約5.0到約9.0的緩沖劑（ii);和至少一種包括-C(=N-Z1-RO-NH-Z2-R2基序的穩定劑（iii)(例如苯甲脒或精氨酸）。這種類型的一些化合物，例如L-精氨酸，已知具有降低血壓的作用，這使該類型的一些制劑不適合給人類施用。[0010]液體制劑對于注射藥劑來說是有益的。如果數個注射劑量來自于相同小瓶，防腐劑經常是管理機構的要求。大量不同的化合物已經在注射產品中被用作防腐劑（S.Nema，N.R.WashkuhnandR.J.Brendel：Excipientsandtheiruseininjectableproducts，PDAJournalofPharmaceuticalScienceandTechnology51(4)，166-171)〇[0011]"Etstudieafmikrotiterpladersanvendelseiformuleringsscreeningafproteiner-medrFVIIasommodelstof''，CatharinaMargretheLerche和CharlottePetersen(PharmaceuticalUniversityofDenmark，2004)公開了包含lmg/mL活化因子VII和2mg/mL間-甲酚的制劑，但不含抗氧化劑。這些作者令人驚訝的發現，在間甲酚存在的條件下，在25°C溫育4周后約30%的蛋白分子被氧化，表明含防腐劑的制劑對蛋白的穩定性非常有害。【
發明內容】[0012]本發明人發現芳香族防腐劑與抗氧化劑組合抑制因子VII多肽（例如rFVIIa)的活性，并增強含高濃度因子VII多肽的制劑的穩定性。這些化合物已經被批準給人注射。本發明基于以下假設，抑制作用與化合物的芳香族本性有關。[0013]本發明的第一個方面涉及一種液體、水性藥物組合物，包括[0014]至少lOmg/mL的因子VII多肽⑴；[0015]適于維持pH范圍為約5.0到約9.0的緩沖劑（ii);[0016]至少一種濃度為至少0.lmg/mL的芳香族防腐劑（iii);和[0017]至少一種濃度為至少0.lmg/mL的抗氧化劑（iv);[0018]所述組合物任選的包括其他組分，前提條件是這類其他組分不是選自下列的因子VII多肽穩定劑：(a)包含金屬的試劑，其中所述金屬選自由除了鋅以外的氧化態+11的第一過渡系金屬組成的組；和（b)包括-C(=N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基序的穩定劑。[0019]本發明的第二個方面涉及用做藥物的本文限定的液體、水性藥物組合物。[0020]本發明的第三個方面涉及本文限定的液體、水性藥物組合物在制備用于治療因子VII應答性綜合征的藥物中的用途。[0021]本發明的第四個方面涉及一種治療因子VII應答性綜合征的方法，所述方法包括給需要其的受試者施用有效量的本文限定的液體、水性藥物組合物。[0022]本發明的第五個方面涉及一種氣密容器，包含本文限定的液體、水性藥物組合物和任選的惰性氣體。[0023]本發明的第六個方面涉及一種用于制備本文限定的組合物的試劑盒，所述試劑盒包括：[0024](a)第一容器，包括至少凍干形式的因子VII多肽（i);[0025](b)第二容器，包括水性重建液體，所述液體至少包括緩沖劑（ii)和至少一種芳香族防腐劑（iii)。【附圖說明】[0026]圖1.選擇的芳香族防腐劑（苯酚和間甲酚）存在條件下rFVIIa的酰胺分解活性。[0027]圖2.選擇的防腐劑（苯酚和間甲酚）濃度增加的條件下15mg/mLrFVIIa的濁度。[0028]圖3.30mM間甲酚和泊洛沙姆-188濃度增加的條件下15mg/mLrFVIIa的濁度。[0029]圖4.30mM間甲酚存在或缺失的條件下，包含5mg/mLrFVIIa的樣品中重鏈片段的形成。將樣品在37°C維持3天。【具體實施方式】[0030]如上所述，本發明在于開發一種新的穩定的液體、水性藥物組合物，其包括高濃度的因子VII多肽。[0031]更具體地，所述液體、水性藥物組合物包括[0032]至少lOmg/mL的因子VII多肽⑴；[0033]適于維持pH范圍為約5.0到約9.0的緩沖劑（ii);[0034]至少一種濃度為至少lmg/mL的芳香族防腐劑（iii);和[0035]至少一種濃度為至少0?lmg/mL的抗氧化劑（iv);[0036]所述組合物任選的包括其他組分，前提條件是這類其他組分不是選自下列的因子VII多肽穩定劑：(a)包含金屬的試劑，其中所述金屬選自由除了鋅以外的氧化態+11的第一過渡系金屬組成的組；和（b)包括-C(=N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基序的穩定劑。[0037]因子VII多肽⑴[0038]藥物組合物的生物學效應主要地歸因于因子VII多肽的存在，盡管也可以包括其他活性成分與因子VII多肽的組合。[0039]如本文使用的，術語"因子VII多肽"包括野生型因子VII(即具有美國專利號4,784,950公開的氨基酸序列的多肽），顯示與野生型因子VII相比生物活性基本上相同或提高的因子VII變體，以及因子VII衍生物和因子VII綴合物。術語"因子VII"旨在包括未切割（酶原）形式的因子VII多肽，以及已經被蛋白水解加工產生它們相應生物活性形式的因子VII多肽，它們可以被命名為因子Vila。通常，因子VII在殘基152和153之間被切割得到因子Vila。術語"因子VII多肽"還包括了包含變體、衍生物和綴合物的多肽，其中與野生型因子Vila的活性相比，因子Vila生物活性已經基本上被改變或稍微降低。這些多肽包括，但不限于，因子VII或因子Vila，其中已經導入特定的氨基酸序列改變，這改變或破壞所述多肽的生物活性。[0040]血液凝固中因子Vila的生物活性來源于它的下列能力：⑴結合組織因子（TF)和（ii)催化因子IX或因子X的蛋白水解切割產生活化的因子IX或X(分別為因子IXa或Xa)〇[0041]為了本發明的目的，可以通過測量制品促進血液凝固的能力來定量因子VII多肽的生物活性（"因子VII生物活性"），參見本文描述的分析4。在該分析中，生物活性可以表示為相對于對照樣品凝血時間的減少，并通過與包含1單位AiL因子VII活性的合并人血清標準品相比轉化為"因子VII單位"。可選擇地，因子Vila生物活性可以通過以下方式定量：⑴在包括嵌入類脂膜的TF和因子X的系統中測量因子VII多肽（例如，因子Vila)產生活化的因子X(因子Xa)的能力（Persson等，J.Biol.Chem.272J99I9-I992H997);(ii)在含水體系中測量因子X水解（"InVitroProteolysisAssay(體外蛋白水解分析）"，參見下文的分析2);(iii)利用基于表面等離子體共振的裝置測量因子VII多肽（例如，因子Vila)與TF的物理結合（Persson，FEBSLetts.413:359-363，1997);(iv)測量因子VII多肽（例如，因子Vila)對合成底物的水解（"InVitroHydrolysisAssay(體外水解分析）"，參見下文的分析I);或（v)在不依賴TF的體外系統中測量凝血酶的產生（參見下文的分析3)。[0042]與野生型因子Vila相比生物活性基本上相同或提高的因子VII變體包括當在如上所述的凝血分析（分析4)，蛋白水解分析（分析2)或TF結合分析中的一種或更多種中檢測時，顯示至少約25%，優選的至少約50%，更優選的至少約75%和最優選的至少約90%的在相同的細胞類型中產生的因子Vila的特異活性的那些。與野生型因子Vila相比生物活性基本上降低的因子VII變體是當在如上所述的凝血分析（分析4)，蛋白水解分析（分析2)或TF結合分析中的一種或更多種中檢測時，顯示低于約25%，優選的低于約10%，更優選的低于約5%和最優選的低于約1%的在相同的細胞類型中產生的野生型因子Vila的特異活性的那些。與野生型因子VII相比生物活性基本上改變的因子VII變體包括，但不限于，顯示不依賴于TF的因子X蛋白水解活性的因子VII變體，和結合TF但不切割因子X的因子VII變體。[0043]因子VII的變體，不論是否顯示與野生型因子VII基本上相同或更好的生物活性，或，可選擇地，顯示與野生型因子VII相比基本上改變或降低的生物活性，包括但不限于，通過一個或更多個氨基酸的插入、缺失或取代而具有不同于野生型因子VII序列的氨基酸序列的多狀。[0044]如本文使用的術語"因子VII衍生物"意在指顯示與野生型因子VII相比基本上相同或提高的生物活性的FVII多肽，其中親本肽的一個或更多個氨基酸已經被遺傳和/或化學和/或酶修飾，例如通過烷化，糖基化，PEG化，酰化，酯形成或酰胺形成等等。這包括但不限于PEG化的人因子Vila，半胱氨酸-PEG化的人因子Vila及其變體。因子VII衍生物的非限制性實例包括糖基聚乙二醇化的FVII衍生物，如WO03/31464和美國專利申請US20040043446,US20040063911,US20040142856,US20040137557,US20040132640,W02007022512和US20070105755(NeoseTechnologies，Inc.)所公開的；FVII綴合物，如WO01/04287,美國專利申請20030165996，TO01/58935，TO03/93465(MaxygenApS)和WO02/02764,美國專利申請20030211094(UniversityofMinnesota)所公開的。[0045]術語"提高的生物活性"是指i)具有與重組野生型人因子Vila相比基本上相同或增加的蛋白水解活性的FVII多肽，或ii)具有與重組野生型人因子Vila相比基本上相同或增加的TF結合活性的FVII多肽，或iii)具有與重組野生型人因子Vila相比基本上相同或增加的血漿半衰期的FVII多肽。術語"PEG化的人因子Vila"表示人因子Vila，具有與人因子當前第1頁1 2 3 4 5