一種負載胰島素的納米微粒的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥物納米技術領域，具體涉及一種負載胰島素的納米微粒的制備方法。
【背景技術】
[0002]糖尿病是一種以血糖增高為特征的代謝疾病。糖尿病的代謝紊亂可導致全身各個器官的功能及結構異常，甚至可導致病人的死亡。全球糖尿病患者遍布世界各個地區，尤其在發展中國家快速增長。2010年由糖尿病及其相關疾病引起的死亡人數已經達到396萬，而且在2030年全球糖尿病患者預計達到4.39億之多。
[0003]目前皮下注射胰島素給藥是臨床治療糖尿病的主要手段。但是皮下注射常引起患者局部不適(疼痛、癢、皮下脂肪萎縮和感染)，且一日多次注射的低順從性、不方便性以及偶然的藥劑瞬間過量引起的低血糖在糖尿病患者中常有發生，給病人帶來極大的經濟、身體以及心理負擔。
[0004]因此，每日多次注射胰島素非常不方便，而且不符合人體生理代謝模式。而胰島素口服給藥可有效克服注射胰島素的缺點，是胰島素的理想替代給藥方式。但現有技術制備的口服胰島素的應用效果不甚理想。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于克服現有技術缺陷，提供一種負載胰島素的納米微粒的制備方法。
[0006]本發明的具體技術方案如下:
[0007]一種負載胰島素的納米微粒的制備方法，包括如下步驟:
[0008](I)將胰島素溶解于稀鹽酸水溶液中，制得濃度為I?15mg/mL的胰島素溶液；
[0009](2)將上述胰島素溶液加入到有機溶液中，超聲處理形成W/0初乳，上述胰島素溶液與上述有機溶液的體積比為1:3?8，上述有機溶液中含有濃度為10?45mg/mL的聚合物、濃度為I?15mg/mL的DSPE-PEG和濃度為I?15mg/mL的大豆卵磷脂，上述聚合物包括聚乳酸、聚羥基乙酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚原酸酯、聚己內酯；
[0010](3)將上述W/0初乳加入到去離子水中，超聲處理形成W/0/W復乳，攪拌過夜，得納米懸浮液；
[0011](4)將凍干保護劑加入到上述納米懸浮液中，使凍干保護劑的濃度達到0.5?5%，得原料液；
[0012](5)將上述原料液通過單線微射流霧化器(為CN 202823728 U所公開)霧化后噴入到盛有液氮的保溫灌中，該單線微射流霧化器的參數為:進樣流量2.5?8g/min、共振頻率14?16kHz、噴嘴大小50?60 μπι，且該單線微射流霧化器的噴嘴距離液氮液面高度為10?20cm，液氮處于不斷攪拌之中；
[0013](6)將上述保溫罐轉移到真空冷凍干燥機中，凍干48?56h，得到粒徑為100?200nm的所述負載胰島素的納米微粒，于O?4°C密封保存。
[0014]在本發明的一個優選實施方案中，所述胰島素溶液的濃度為I?10mg/mL。
[0015]在本發明的一個優選實施方案中，所述步驟(2)為:將上述胰島素溶液加入到有機溶液中，超聲處理形成W/0初乳，，上述胰島素溶液與上述有機溶液的體積比為1:4?7，上述有機溶液中含有濃度為10?40mg/mL的聚合物、濃度為I?10mg/mL的DSPE-PEG和濃度為I?10mg/mL的大豆卵磷脂。
[0016]在本發明的一個優選實施方案中，步驟(2)中所述有機溶液的溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、二氯甲烷-丙酮混合有機溶劑或二氯甲烷-乙腈混合有機溶劑。
[0017]在本發明的一個優選實施方案中，所述凍干保護劑為PVA。
[0018]本發明的有益效果是:
[0019]1、本發明所制備的納米微粒在胃腸條件下穩定，保護所負載的胰島素；
[0020]2、本發明所制備的納米微粒的外層為大豆卵磷脂，可增加該納米微粒對細胞親和力進而增強細胞攝取率、改善納米微粒的理化性質(如zeta電位)、以及藥物體外釋放性能(如緩釋觸發釋放和控釋)；
[0021]3、本發明所制備的納米微粒表面容易通過靶向修飾或小分子吸附方式進行表面改性；
[0022]4、本發明的制備方法簡單、反應條件溫和，所制備的納米微粒的包封率達到92 %以上，粒徑分布均一，復溶于水后的粒徑變化不大，長期儲存穩定性好，整個制備過程不影響納米微粒的穩定性、胰島素的活性和體外釋放。
【附圖說明】
[0023]圖1為本發明實施例8所制得的負載胰島素的納米微粒透射顯微鏡表征圖。
[0024]圖2為本發明實施例8所制得的負載胰島素的納米微粒粒徑表征圖。
[0025]圖3為本發明實施例8制得的載有胰島素微粒的光學顯微鏡表征圖。
[0026]圖4為本發明實施例8制得的負載胰島素的納米微粒的復溶后的體外釋放和新制的體外釋放對比圖。
[0027]圖5為本發明實施例8所制得的負載胰島素的納米微粒復溶于水后得到的納米粒透射電鏡圖。
【具體實施方式】
[0028]以下通過【具體實施方式】結合附圖對本發明的技術方案進行進一步的說明和描述。
[0029]下述實施例制備的納米微粒的包封率達到92%以上，粒徑分布均一，復溶于水后的粒徑變化不大，長期儲存穩定性好，整個制備過程不影響納米微粒的穩定性、胰島素的活性和體外釋放。
[0030]實施例1
[0031](I)將胰島素溶解于300 μ L稀鹽酸水溶液中，制得濃度為I?10mg/mL的胰島素溶液；
[0032](2)將上述胰島素溶液加入到ImL有機溶液中，超聲處理Imin形成W/0初乳，，上述有機溶液中含有濃度為10?40mg/mL的聚合物、濃度為I?10mg/mL的DSPE-PEG和濃度為I?10mg/mL的大豆卵磷脂，上述聚合物為聚乳酸，有機溶液的溶劑為二氯甲烷；
[0033](3)將上述W/0初乳加入到6mL去離子水中，超聲處理Imin形成W/0/W復乳，攪拌過夜，得納米懸浮液；
[0034](4)將PVA加入到上述納米懸浮液中，使PVA的濃度達到0.5 %，得原料液；
[0035](5)將上述原料液通過單線微射流霧化器(為CN 202823728 U所公開)霧化后噴入到盛有液氮的保溫灌中，該單線微射流霧化器的參數為:進樣流量2.5g/min、共振頻率14kHz、噴嘴大小50 μ m，且該單線微射流霧化器的噴嘴距離液氮液面高度為10cm，液氮處于不斷攪拌之中；
[0036](6)將上述保溫罐轉移到真空冷凍干燥機中，凍干48h，得到粒徑為100?200nm的所述負載胰島素的納米微粒，于4°C密封保存。將得到的納米微粒復溶于水，等到的溶液用動態光散射測定后與干燥前的粒徑比值為?1.3。
[0037]實施例2
[0038](I)將胰島素溶解于300 μ L稀鹽酸水溶液中，制得濃度為I?10mg/mL的胰島素溶液；
[0039](2)將上述胰島素溶液加入到ImL有機溶液中，超聲處理Imin形成W/Ο初乳，，上述有機溶液中含有濃度為10?40mg/mL的聚合物、濃度為I?10mg/mL的DSPE-PEG和濃度為I?10mg/mL的大豆卵磷脂，上述聚合物為聚羥基乙酸，有機溶液的溶劑為三氯甲烷；
[0040](3)將上述W/Ο初乳加入到6mL去離子水中，超聲處理Imin形成W/0/W復乳，攪拌過夜，得納米懸浮液；
[0041 ] (4)將PVA加入到上述納米懸浮液中，使PVA的濃度達到I %，得原料液；
[0042](5)將上述原料液通過單線微射流霧化器霧化后噴入到盛有液氮的保溫灌中，該單線微射流霧化器的參數為:進樣流量2.5g/min、共振頻率14kHz、噴嘴大小50 μ m，且該單線微射流霧化器的噴嘴距離液氮液面高度為15cm，液氮處于不斷攪拌之中；
[0043](6)將上述保溫罐轉移到真空冷凍干燥機中，凍干48h，得到粒徑為100?200nm的所述負載胰島素的納米微粒，于4°C密封保存。將得到的納米微粒復溶于水，等到的溶液用動態光散射測定后與干燥前的粒徑比值為?1.1o
[0044]實施例3
[0045](I)將胰島素溶解于300 μ L稀鹽酸水溶液中，制得濃度為I?10mg/mL的胰島素溶液；
[0046](2)將上述胰島素溶液加入到ImL有機溶液中，超聲處理Imin形成W/Ο初乳，，上述有機溶液中含有濃度為10?40mg/mL的聚合物、濃度為I?10mg/mL的DSPE-PEG和濃度為I?10mg/mL的大豆卵磷脂，上述聚合物為聚乳酸-羥基乙酸共聚物，有機溶液的溶劑為二氯甲烷-丙酮混合有機溶劑；
[0047](3)將上述W/Ο初乳加入到6mL去離子水中，超聲處理Imin形成W/0/W復乳，攪拌過夜，得納米懸浮液；
[0048](4)將PVA加入到上述納米懸浮液中，使PVA的濃度達到1.5%，得原料液；
[0049](5)將上述原料液通過單線微射流霧化器霧化后噴入到盛有液氮的保溫灌中，該單線微射流霧化器的參數為:進樣流量2.5g/min、共振頻率14kHz、噴嘴大小50 μ m，且該單線微射流霧化器的噴嘴距離液氮液面高度為20cm，液氮處于不斷攪拌之中；
[0050](6)將上述保溫罐轉移到真空冷凍干燥機中，凍干48h，得到粒徑為100?200nm的所述負載胰島素的納米微粒，于4°C密封保存。將得到的納米微粒復溶于水，等到的溶液用動態光散射測定后與干燥前的粒徑比值為?1.1o
[0051]實施例4
[0052](I)將胰島素溶解于300 μ L稀鹽酸水溶液中，制得濃度為I?10mg/mL的胰島素溶液；
[0053](2)將上述胰島素溶液加入到2mL有機溶液中，超聲處理Imin形成W/Ο初乳，，上述有機溶液中含有濃度為10?40mg/mL的聚合物、濃度為I?10mg/mL的DSPE-PEG和濃度為I?10mg/mL的大豆卵磷脂，上述聚合物為聚原酸酯，有機溶液的溶劑為二氯甲烷-乙腈混合有機溶劑；
[0054](3)將上述W