驅蟲斑鳩菊酚酸部位的制備方法及用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種驅蟲斑鳩菊酚酸部位的制備方法，以及白癜風藥物的用途，屬于 民族醫(yī)藥技術領域。
【背景技術】
[0002] 白癜風（vitiligo, OMM :#193200)是一種常見的后天性色素脫失性疾病，主要特 征為皮膚和毛發(fā)黑素細胞選擇性破壞導致的色素脫失。白癜風在不同地域和種族間有較大 的差異，膚色較深的人群更易患病，我國白癜風的患病率為〇. 09% -2. 7%。
[0003] 白癜風的損害可發(fā)生于全身任何部位的皮膚、粘膜和毛發(fā)，但暴露部位，及易摩擦 部位，均較易發(fā)生。皮損多呈對稱分布，或沿神經(jīng)節(jié)段分布。色素完全脫失斑為乳白色，邊 界清楚，大小形態(tài)不同，生長于白斑區(qū)的毛發(fā)也可變白，嚴重者白斑可泛發(fā)全身。白癜風組 織病理特征為皮損區(qū)黑素細胞的減少或消失，細胞中黑素顆粒缺失，早期可在皮損周邊發(fā) 現(xiàn)以淋巴細胞為主的炎性細胞浸潤。
[0004] 白癜風發(fā)病機制不明，目前存在多種發(fā)病機制假說，但任何一種假說都有其局限， 且不同類型白癜風發(fā)病機理可能不同。白癜風的病因和發(fā)病機制主要有自身免疫假說、遺 傳假說、黑素細胞自身破壞假說等。
[0005] 驅蟲斑鳩菊，Vernonia anthelmintica (L. )Willd，別名印度山茴香，是菊科 (Asteraceae)斑鳩菊屬（Vernonia) -年生高大草本，藥用部位為成熟的果實，秋季采收、 晾干。其性三級干熱，功效主要是清除異常粘液質(zhì)、驅蟲、消腫、散寒止痛，是歷代傳統(tǒng)維吾 爾醫(yī)治療白癜風的主要經(jīng)典藥物。
[0006] 驅蟲斑鳩菊果實中含有倍半萜內(nèi)酯類、黃酮類、括環(huán)氧十八碳烯酸及其甘油酯類、 三萜類和留醇類和咖啡?；鼘幩犷惖榷喾N化合物。
[0007] 驅蟲斑鳩菊在民間用藥歷史悠久，有著長期穩(wěn)定的臨床應用，因此其開發(fā)應用前 景廣闊。維吾爾醫(yī)藥理論中，驅蟲斑鳩菊性三級干熱，功效主要是清除異常粘液質(zhì)、驅蟲、消 月中、散寒止痛。驅蟲斑鳩菊種子為主藥的上市藥品和制劑有驅蟲斑鳩菊注射液、卡力孜然蜜 膏、復方驅蟲斑鳩菊丸、復方卡力孜然酊、復方卡力孜然片、驅白巴布斯片等。黃酮類化合物 及黃酮部位治療白癜風已有報道，但是酚酸類化合物及酚酸部位治療白癜風未見報道。
[0008] 目前驅蟲斑鳩菊的提取物、黃酮部位以及黃酮類化合物治療白癜風已有較多報 道，但是酚酸部位及酚酸類化合物未見報道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0009] 本發(fā)明目的在于，提供一種驅蟲斑鳩菊酚酸部位的制備方法和用途。該方法是將 干燥的驅蟲斑鳩菊果實粉碎，采用有機溶劑提取，樹脂分離純化獲得驅蟲斑鳩菊提取物，主 要成分為咖啡酰基奎寧酸、二咖啡酰基奎寧酸等酚酸類化合物。測定酚酸含量的質(zhì)量百分 比20% -99%。驅蟲斑鳩菊酚酸部位中主要活性成分3, 4-二咖啡酰基奎寧酸、3, 5-二咖啡 酰基奎寧酸和4, 5-二咖啡?；鼘幩岬暮糠謩e為3-26%、5-34%和5-40%。經(jīng)初步實 驗證明：通過本發(fā)明所述的方法獲得的驅蟲斑鳩菊酚酸部位具有增加毛囊中黑素細胞、促 進黑素合成的作用，可用于治療白癜風。本發(fā)明所述的方法工藝簡單，生產(chǎn)成本低，有效成 分穩(wěn)定，易于質(zhì)量控制。本發(fā)明為白癜風治療提供了新的藥用部位及化合物。
[0010] 本發(fā)明所述的一種驅蟲斑鳩菊酚酸部位的制備方法，按下列步驟進行：
[0011] a.將干燥的驅蟲斑鳩菊果實粉碎后，用濃度為0-95%甲醇、乙醇或水溶液，室 溫-95°C提取1-5次，提取時間0. 5-3小時，冷卻至室溫，過濾，合并提取液，減壓濃縮至無醇 味，得到醇提物，驅蟲斑鳩菊果實與甲醇或乙醇水溶液的固液比為1:3-30 ;
[0012] b.將步驟a得到的提取物用濃度為0-15%甲醇、乙醇或水溶液溶解分散后，過濾， 再用樹脂分離，先用水洗去雜質(zhì)，再用濃度為10-95%甲醇或乙醇洗脫，收集甲醇或乙醇洗 脫液，減壓濃縮除盡溶劑，干燥，即得到含有3, 5-二咖啡?；鼘幩帷?, 5-二咖啡酰基奎寧 酸和3, 4-二咖啡?；鼘幩岬尿屜x斑鳩菊酚酸部位。
[0013] 步驟 b 中所述的樹脂為 DM-130、AB-8、HPD-450、NKA-9、HPD-100、D101、HPD-400、 HPD-500、HPD-600、HPD-300、HPD-417、聚酰胺或十八烷基硅烷鍵合硅膠。
[0014] 所述方法獲得的驅蟲斑鳩菊酚酸部位中含有酚酸類化合物為質(zhì)量百分比 20% -99%。
[0015] 所述方法獲得的驅蟲斑鳩菊酚酸部位中主要活性成分3, 4-二咖啡酰基奎寧酸、 3, 5-二咖啡酰基奎寧酸和4, 5-二咖啡?；鼘幩岬暮糠謩e為3-26%、5-34 %和5-40%。
[0016] 所述的方法獲得的驅蟲斑鳩菊酚酸部位在制備防治白癜風的藥物中的用途。
[0017] 本發(fā)明所述的驅蟲斑鳩菊酚酸部位的制備方法和用途，通過該方法獲得的驅蟲斑 鳩菊酚酸部位經(jīng)藥效學試驗證明，具有顯著的治療白癜風的作用，且在在相同臨床等效劑 量下，驅蟲斑鳩菊酚酸部位作用優(yōu)于白癜風膠囊。
【附圖說明】
[0018] 圖1為本發(fā)明HE染色觀察皮膚組織形態(tài)學變化圖；
[0019] 圖2為本發(fā)明酚酸部位對白癜風小鼠皮膚含黑色素毛囊數(shù)的影響（黑色素染色， 200倍）圖。
【具體實施方式】
[0020] 實施例1 :驅蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0021] 將干燥的驅蟲斑鳩菊果實藥材IOkg粉碎，加入30倍體積的水溶液，加熱回流提取 3次，溫度95°C，時間3小時，冷卻至室溫，過濾，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到醇提 物；
[0022] 將得到的醇提物用濃度為5%乙醇分散至含生藥100g/L，過濾，再用AB-8型大孔 吸附樹脂柱，先用1倍柱體積水洗脫，再用8倍柱體積濃度為40%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫 液，減壓濃縮，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡?；鼘幩帷?, 5-二咖啡酰基奎寧酸 和3, 4-二咖啡?；鼘幩岬尿屜x斑鳩菊酚酸部位390g。
[0023] 實施例2 :驅蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0024] 將干燥的驅蟲斑鳩菊果實藥材IOkg粉碎，加入3倍體積濃度為95%乙醇，加熱回 流提取5次，室溫，時間3小時，冷卻至室溫，過濾，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到醇 提物；
[0025] 將得到的醇提物用濃度為5%乙醇分散至含生藥50g/L，離心（4000轉/分鐘）， DM-130型大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積水洗脫，再用1倍柱體積濃度為95%乙醇洗脫， 收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡?；鼘幩?、4, 5-二咖 啡?；鼘幩岷?, 4-二咖啡?；鼘幩岬尿屜x斑鳩菊酚酸部位420g。
[0026] 實施例3 :驅蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0027] 將干燥的驅蟲斑鳩菊果實藥材IOkg粉碎，加入15倍體積濃度為30%乙醇，加熱回 流提取3次，溫度75°C，時間2小時，冷卻至室溫，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到醇提 物；
[0028] 將得到的提取物用濃度為10 %甲醇分散至含生藥80g/L，離心（4000轉/分 鐘），HPD-100型大孔吸附樹脂柱，先用4倍柱體積水洗脫，再用6倍柱體積濃度為50 %乙 醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡?；鼘幩帷?4, 5-二咖啡酰基奎寧酸和3, 4-二咖啡?；鼘幩岬尿屜x斑鳩菊酚酸部位440g。
[0029] 實施例4 :驅蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0030] 將干燥的驅蟲斑鳩菊果實藥材IOkg粉碎，加入18倍體積的濃度為60%甲醇，加熱 回流提取2次，溫度50°C，時間0. 5小時，冷卻至室溫，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到 醇提物；
[0031] 將得到的提取物用濃度為15%甲醇分散至含生藥100g/L，離心（4000轉/分鐘）， NKA-9型大孔吸附樹脂柱，先用5倍柱體積水洗脫，再用5倍柱體積濃度為60%甲醇洗脫， 收集甲醇洗脫液，減壓濃縮，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡?；鼘幩?、4, 5-二咖 啡酰基奎寧酸和3, 4-二咖啡?；鼘幩岬尿屜x斑鳩菊酚酸部位460g。
[0032] 實施例5 :驅蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0033] 將干燥的驅蟲斑鳩菊果實藥材IOkg粉碎，加入12倍體積濃度為10%乙醇加熱回 流提取2次，溫度80°C，時間2小時，冷卻至室溫，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到醇提 物；
[0034] 將得到的提取物用濃度為10 %乙醇分散至含生藥30g/L，過濾，再用DlOl型大孔 吸附樹脂柱，先用8倍柱體積水洗脫，再用6倍柱體積濃度為80%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫 液，減壓濃縮，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡?；鼘幩?、4, 5-二咖啡酰基奎寧酸 和3, 4-二咖啡酰基奎寧酸的驅蟲斑鳩菊酚酸部位564g。
[0035] 實施例6 :驅蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0036] 將干燥的驅蟲斑鳩菊果實藥材IOkg粉碎，加入18倍體積濃度為95 %乙醇，加熱回 流提取2次，溫度60°C，時間1小時，冷卻至室溫，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到醇提 物；
[0037] 將得到的提取物用水分散至含生藥50g/mL，離心（4000轉/分鐘），用HPD400型 大孔吸附樹脂柱，先用6倍柱體積水洗脫，再用6倍柱體積濃度為65%甲醇洗脫，收集甲醇 洗脫液，減壓濃縮，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡?；鼘幩?、4, 5-二咖啡酰基奎 寧酸和3, 4-二咖啡?；鼘幩岬尿屜x斑鳩菊酚酸部位490g。
[0038] 實施例7 :驅蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0039] 將干燥的驅蟲斑