一種膜法提取蘿芙木總生物堿的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫藥技術領域的藥物分離方法，具體涉及一種膜法提取蘿芙木總生物堿的方法。
【背景技術】
[0002]蘿芙木為夾竹桃科蘿芙木屬，是天然的藥用植物，種類包括蛇根木、催吐蘿芙木、中國蘿芙木、云南蘿芙木等130余種。蘿芙木植物中約含200多種生物堿，可以用于治療多種疾病。其中利血平生物堿具有顯著降壓作用。除利血平外，多種蘿芙術生物堿如蛇根堿、利血胺、蘿芙木甲素、馬蹄堿、蘿芙木亭堿等均具有類似的降壓活性。因此，其生物總堿是制備抗血壓藥如“蘿芙木片”、“降壓靈”的原料，主要成分為利血平。
[0003]傳統的對蘿芙木生物總堿的提取是先通過酸醇溶液浸提，將濾液減壓濃縮得浸膏，酸化去沉淀，上清液氨化得沉淀，最后用有機溶劑如氯仿或丙酮多次溶解干燥所得。因浸提液中含有果膠、蛋白質、色素等大分子雜質，故沉淀時間長，常需過夜。同時這些大分子形成膠體性質可吸附部分活性成分，往往因除雜廢棄而降低了總生物堿提取率和活性成分利血平的含量。用來溶解或萃取所需的氯仿等有機溶劑量大，存在一定的安全毒性。總生物堿干燥后的制劑存在崩解緩慢，溶解與加工性能不佳。最終大量溶劑的回收利用需減壓蒸餾，人工和能耗高。
【發明內容】
[0004]本發明所要解決的技術問題在于提供一種膜法提取蘿芙木總生物堿的方法。該方法是將蘿芙木浸提液依次經過超濾除雜和納濾濃縮后干燥所得。本發明改變其傳統生物堿經堿沉和有機溶劑萃取等方式，提高了總生物堿和活效成分利血平的提取效率，且浸提液可以循環利用，降低有機溶劑用量。
[0005]為解決上述技術問題，本發明的技術解決方案是:
一種膜法提取蘿芙木總生物堿的方法，包括如下步驟:
(1)蘿芙木生物堿浸提液的獲得:蘿芙木根、莖或葉粉碎，常溫下進行浸提，普通過濾得到蘿芙木生物堿浸提液；
(2)超濾:運行膜工藝，將步驟(I)中的蘿芙木生物堿浸提液使用超濾膜超濾，以去除原浸提液中大分子物質等雜質；保留超濾透過液用于后續納濾濃縮，該超濾透過液簡稱超濾液；
(3)納濾:運行膜工藝，將上述超濾液進行納濾，得到高濃度的蘿芙木總生物堿。
[0006]進一步包括步驟(4)總生物堿的制備:收集納濾濃縮液，減壓蒸餾回收乙醇等有機溶劑，干燥后得到總生物堿。
[0007]優選地，所述步驟(I)中，浸提所需浸提液采用酸性極性有機溶劑，即可以采用酸性乙醇、甲醇或丙酮，且蘿芙木與浸提液料液比可以為Ig:15?20mL。
[0008]優選地，所述步驟(I)中，浸提方式采用超聲輔助浸提和/或靜態浸提，并可適當攪拌；超聲輔助浸提時，先靜置浸提20?30min，再超聲輔助處理20?30min，再靜置20?30min浸提；超聲處理的功率為250-500W，頻率為40kHz ;采用靜態浸提時為12_24h。
[0009]優選地，所述步驟(I)中，酸性極性有機溶液為含體積比50%-80%的乙醇或甲醇或丙酮、含體積比0.2-1.0%的醋酸、檸檬酸、鹽酸或硫酸，其余為水。優選70%乙醇和1.0%的醋酸組合。
[0010]優選地，所述步驟(I)中，在保持料液比不變的前提下，濾渣進一步重復浸提1-3次，首選重復浸提I次，合并濾液備用。
[0011]優選地，所述步驟(2)中，所述的超濾膜截留分子量為10000-60，000 Dalton ;首選為 10，000 Dalton。
[0012]優選地，所述步驟(2)中，工作壓力為0.5-1.010^，首選為0.6-0.710^;工作溫度為10-45 °C，首選為25-35 °C，也可選擇室溫或自然工作溫度。
[0013]優選地，所述步驟(2)中，超濾膜材料為陶瓷膜或有機膜，有機膜具體包括聚偏氟乙烯(PVDF)、聚醚砜(PES)、聚丙烯(PP)、聚乙烯(PE)、聚砜(PS)、聚丙稀腈(PAN)、聚氯乙稀(PVC)中的一種。
[0014]優選地，所述步驟(3)中，納濾膜選擇截留分子量200_500Da的復合納濾膜或無機材料納濾膜.優選地，所述步驟(3)中，納濾所用復合納濾膜材質包括聚酰胺(PA)、磺化聚醚砜(SPES)、磺化聚砜(SPS)和聚乙烯醇(PVA)等有機膜中的一種。
[0015]優選地，所述步驟(3)中，納濾中的膜組件運行壓力為1.0-3.5 MPa，首選1.5-2.5MPa ;溫度范圍為10_45°C，首選為25_35°C ;納濾濃縮2_8倍，首選濃縮倍數為2_3倍。
[0016]優選地，所述步驟(4)中，干燥方法采用真空干燥或噴霧干燥或烘箱干燥中一種；干燥過程避光，溫度40-60 °C。
[0017]采用上述方案后，本發明具有如下有益效果:
1.在超濾階段:分別對浸提液和超濾液的濁度、固形物、蛋白質和總生物堿中有效成分利血平進行分析。濁度采用分光光度法、固形物采用重量法、蛋白質采用考馬斯亮藍法、利血平成分分析采用高效液相色譜法(HPLC)法。HPLC法的具體條件為:C18反向色譜柱，流動相為甲醇-0.04% 二乙胺水(70:30);流速I m L/min ;柱溫30 °C ;檢測波長268 nm ;進樣量 10_20yL0
[0018]與浸提液相比，超濾液濁度減少了 98.0%，固形物和蛋白質的去除率達到95%以上，色譜分析超濾液中活性成分利血平含量保持不變。
[0019]綜上所述，超濾后的濾過液濁度大大減小，澄清度高，固形物、蛋白質等雜質去除率高。利血平的含量沒有損失，總生物堿的品質得到提高。
[0020]2.納濾濃縮工藝的效果:
納濾濃縮條件在運行壓力為1.0-3.5 M Pa，濃縮倍數為2-8倍，溫度控制在10-45°C左右，進行納濾濃縮。在納濾過程中濾液有自然升溫的現象，升溫幅度與運行時間和運行壓力相關，一般升高5-8°C。此升溫幅度對生物堿成分性質無影響，反而會促進膜通量。結合膜通量和能耗，以濃縮2-5倍為宜，最佳濃縮倍數為2倍。如果膜通量過小或膜后壓力改變過大，及時對膜進行清洗。
[0021]收集納濾濃縮液和納濾透析液樣品，測定其生物堿中有效成分利血平含量(方法同上)。
[0022]經色譜檢測發現納濾透過液中利血平含量極低，濃縮液中利血平含量在95%以上。說明生物堿有效成分截留效果好。
[0023]由于生物堿成分保留在濃縮液中，納濾透析液澄清透明，可以作浸提液循環利用。
[0024]3.采用本發明方法與常規制備方法比較:
常規制備總生物堿:步驟I得到的浸提液經減壓回收乙醇，浸膏用蒸餾水稀釋鹽酸調pH 2.0-3.0，靜置去沉淀，上層酸水氨水調pH 9.0-10.0，靜置5_6小時或過夜后過濾留沉淀。沉淀用水洗至濾液為中性，用丙酮加熱溶解并過濾，濾液減壓回收丙酮，干燥得到總生物堿(降壓靈)稱量并與納濾提取作比較，計算總生物堿得率，并比較在稀醋酸溶液中的溶解速度。
[0025]用膜法制備:三份粉碎的蘿芙木藥材一一蘿芙木根粉1、蘿芙木根粉2和云南蘿芙木葉。分別測得總生物堿的得率在1.31%、1.12%、0.152%。
[0026]使用常規方法制備:總生物堿的得率為0.79%,0.55%、和0.074%，膜法制備總生物喊得率是常規方法1.5-2.0倍。
[0027]分析原因:蘿芙木原浸提液中含有多糖、樹膠、蛋白質和色素等大分子物質成分，對總生物堿提取易造成干擾，生物堿與大分子成分形成膠體狀態，不易沉淀下來或被吸附，造成總生物堿的流失以及活性成分利血平含量降低。膜法提取經過超濾，多糖、蛋白質等大分子物質成分及其它雜質得到了去除，總生物堿完全保留下來，因而納濾濃縮后總生物堿的產量得到大大提高。
[0028]常規方法制備得到的總生物堿為焦褐色，粘性大不易分散；膜法制備所得總生物堿為棕黃色，輕壓即碎呈粉末狀。用稀冰醋酸溶解，前者溶解緩慢需攪拌，且有少量膠狀殘留；后者在稀冰醋酸中溶解迅速。
[0029]總之，本發明所述方法改變了傳統的生物堿“堿沉+有機溶劑萃取”分離得到生物堿的方式，利用膜技術達到除雜和濃縮富集制備總生物堿的目的，工藝簡捷，不破壞和污染活性成分，蘿芙木總生物堿和活性成分利血平的提取率高。納濾透析液可以直接作浸提液循環利用，大大降低了能耗，減少溶劑用量和廢水排放，提高了經濟效益。
【附圖說明】
[0030]圖1是本發明的步驟流程圖。
【具體實施方式】
[0031]下面結合附圖和具體實施例對本發明作進一步