靶向腫瘤相關成纖維細胞的脂質體載藥系統的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及藥物制劑技術及腫瘤治療領域，特別涉及一種腫瘤相關成纖維細胞靶向的脂質體載藥系統。具體涉及將腫瘤相關成纖維細胞特異性表達蛋白高親和力結合的多肽修飾包載腫瘤相關成纖維細胞選擇性或者非選擇性藥物的脂質體，制備新型腫瘤相關成纖維細胞靶向載藥脂質體及其醫藥用途。
【背景技術】
[0002]在抗腫瘤研宄中，主動靶向脂質體給藥系統的研宄已經相當成熟，但在目前的研宄中，絕大部分的靶向制劑均是靶向腫瘤細胞本身的。雖然靶向腫瘤細胞給藥系統能夠達到直接的腫瘤抑制作用，但是由于腫瘤是一個復雜而異質化組織，除了腫瘤細胞本身之外的成分在腫瘤的進展中發揮巨大的作用，特別是腫瘤微環境中的腫瘤相關成纖維細胞，都能夠間接影響腫瘤增殖以及納米制劑的抗腫瘤療效。本發明通過構建針對腫瘤相關成纖維細胞的靶向載藥脂質體，實現腫瘤的間接治療作用。
[0003]腫瘤微環境，即腫瘤細胞產生和生活的內環境，其中包括了腫瘤細胞與其周圍的成纖維細胞(腫瘤相關成纖維細胞)、免疫和炎癥細胞(腫瘤相關巨噬細胞)、膠質細胞和腫瘤內皮細胞等基質細胞，同時也包括細胞外基質、腫瘤微血管等生物活性分子。腫瘤微環境中細胞-細胞相互作用，細胞-細胞基質相互作用能夠誘導產生大量的生長因子、誘導因子和細胞因子等，在基質細胞在在腫瘤的發生發展中具有至關重要的作用，是腫瘤細胞賴以生存的物質基礎。因此，以腫瘤微環境為治療靶標成為新的抗腫瘤研宄熱點。
[0004]在實體腫瘤微環境的基質細胞中，數量最豐富的是腫瘤相關成纖維細胞。在腫瘤進展中，腫瘤相關成纖維細胞旁分泌多種細胞因子，作用于腫瘤細胞和腫瘤基質細胞:高表達固生蛋白C，增強癌細胞的侵襲性；分泌成纖維細胞活化蛋白，促進腫瘤的局部浸潤等；分泌表皮生長因子等，誘導腫瘤細胞的耐藥性。除此之外，腫瘤相關成纖維細胞還能通過合成大量膠原蛋白，形成致密的腫瘤組織，導致腫瘤內異常升高的間質壓，為腫瘤細胞提供物理屏障作用，進一步削弱納米制劑在腫瘤內部的穿透性。這也是納米制劑體內抗腫瘤療效不佳的主要原因之一。
[0005]基于腫瘤相關成纖維細胞對腫瘤發生、發展以及納米制劑腫瘤治療效果的重要作用，借鑒傳統靶向腫瘤細胞納米制劑的思路，本發明擬構建一種新型主動靶向腫瘤相關成纖維細胞的納米載藥系統，采用腫瘤相關成纖維細胞高表達蛋白的高親和力配體(例如，FHKHKSPALSPVGGG和SCDYNHHWC分別是腫瘤相關成纖維細胞特異性高表達的固生蛋白C和成纖維細胞活化因子的高親和力配體)修飾脂質體，并包載腫瘤相關成纖維細胞選擇性(Navitoclax)或者非選擇性藥物(阿霉素、紫杉醇等常見化療藥物)，可將藥物靶向遞送至腫瘤相關成纖維細胞內，靶向作用于腫瘤相關成纖維細胞，并發揮出抗腫瘤作用。同時，本發明的靶向脂質體，還可通過改善腫瘤微環境，增強化療藥物納米制劑抗腫瘤藥效的作用。
[0006]其中FHKHKSPALSPVGGG (!7H多肽)是在2012年通過噬菌體篩選技術獲得的，能夠與腫瘤相關成纖維細胞特異性表達的固生蛋白(TNC)高親和力結合的多肽配體(MeeYoung Kim, Ok Ran Kim, et.al.(2012).Select1n and Characterizat1n of Tenascin CTargeting Peptide.Molecules and Cells.33.71-77)。
[0007]S⑶YNHHWC(SC多肽)是在2012年通過噬菌體篩選技術得到的，能夠與腫瘤相關成纖維細胞特異性表達的成纖維細胞活化蛋白(FAP)結合的多肽配體(一種結合FAP的多月太，劉敏，2012105258148)。
【發明內容】
[0008]本發明的目的是構建一種靶向腫瘤相關成纖維細胞的脂質體載藥系統，以實現主動靶向的同時特異性抑制腫瘤相關成纖維細胞的目的。具體是將載藥脂質體表面用腫瘤相關成纖維細胞特異性表達蛋白的高親和力配體修飾。本發明的靶向腫瘤相關成纖維細胞的脂質體載藥系統可以通過抑制腫瘤組織內腫瘤相關成纖維細胞直接發揮抗腫瘤作用，也可以通過改善腫瘤微環境，增強化療藥物納米制劑的抗腫瘤藥效。
[0009]本發明通過以下技術方案實現上述目的:
[0010]本發明提供一種靶向腫瘤相關成纖維細胞的載藥脂質體，該脂質體表面用腫瘤相關成纖維細胞特異性表達蛋白的高親和力配體修飾。
[0011]本發明提供的靶向腫瘤相關成纖維細胞的載藥脂質體，修飾用的配體選自FHKHKSPALSPVGGG 0?多肽)、SCDYNHHWC (SC多肽)以及包括上述序列的線性多肽、環狀多肽。其中，FHKHKSPALSPVGGG多肽是通過噬菌體篩選技術得到的能夠與腫瘤相關成纖維細胞特異性表達的固生蛋白高親和力結合配體，SCDYNHHWC多肽也是通過噬菌體篩選技術得到的能夠與腫瘤相關成纖維細胞特異性表達的成纖維活化蛋白高親和力結合配體。根據本領域專業人員的常識，基于相同序列的線性肽和環肽修飾脂質體，都能實現脂質體對相應受體或蛋白的靶向作用。
[0012]本發明提供的靶向腫瘤相關成纖維細胞的載藥脂質體，脂質體的組成包括磷脂、膽固醇、聚乙二醇修飾的磷脂和導向化合物。這些成份的使用量基于本領域中脂質體制備中各組份的常用使用范圍。例如，脂質體各組分之間的摩爾比可為:磷脂:膽固醇=5:1?1:5，磷脂:聚乙二醇修飾的磷脂=1000:1?1000:100，磷脂:導向化合物=1000:0.1?
1000:100ο
[0013]藥物與脂質體的比例可為1:100?1:1。
[0014]本發明提供的靶向腫瘤相關成纖維細胞的載藥脂質體，所述導向化合物是通過將配體連接在聚乙二醇修飾的磷脂的聚乙二醇末端或通過配體連接在磷脂上或通過配體修飾在膽固醇上得到的，優選是將配體連接在聚乙二醇修飾的磷脂的聚乙二醇末端。
[0015]本發明提供的靶向腫瘤相關成纖維細胞的載藥脂質體，所述磷脂以及聚乙二醇修飾的磷脂中的磷脂可選自大豆磷脂(SPC)，二月桂酰卵磷脂(DLPC)、二肉豆蔻酰卵磷脂(DMPC)、二棕櫚酰卵磷脂(DPPC)、二硬脂酰卵磷脂(DPPC)、二硬脂酰卵磷脂(DSPC)、1-肉豆蔻酰-2 -棕櫚酰卵磷脂(MPPC)、1-棕櫚酰-2 -肉豆蔻酰卵磷脂(PMPC)、1-棕櫚酰-2 -硬脂酰卵磷脂(PSPC)、1 -硬脂酰-2 -棕櫚酰卵磷脂(SPPC)、蛋黃卵磷脂(EPC)、氫化豆磷脂(HSPC)、二油酰基卵磷脂(DOPC)、二月桂酰磷脂酰甘油(DLPG)、二棕櫚脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二肉豆蔻酰磷脂酸(DMPA)、二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸(DMPS)、二棕櫚酰磷脂酰二絲氨酸(DPPS)、腦磷脂酰絲氨酸(PS)、腦神經鞘磷脂(BSP)、二棕櫚酰神經鞘磷脂(DPSP)、二硬脂酰神經鞘磷脂(DSSP)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、氫化大豆磷脂酰乙醇胺(HSPE)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)之一種或多種。其中，所述磷脂優選為優選大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂和氫化大豆卵磷脂，所述聚乙二醇修飾的磷脂優選為二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、氫化大豆磷脂酰乙醇胺(HSPE)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、大豆磷脂酰乙醇胺(SPE)中的一種，更優選為二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)。
[0016]本發明提供的靶向腫瘤相關成纖維細胞的載藥脂質體，所述導向化合物是配體連接在二硬脂酰磷脂酰乙醇胺一聚乙二醇的聚乙二醇末端得到的，連接方法一般是通過配體多肽末端氨基與二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇活潑酯反應或通過本領域其它常見的合成方法，得到配體共價連接在二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇末端。其中，所述導向化合物優選為二硬脂酰磷脂酰乙醇胺一聚乙二醇一 FHKHKSPALSPVGGG。
[0017]本發明提供的靶向腫瘤相關成纖維細胞的載藥脂質體，所述藥物選自腫瘤相關成纖維細胞選擇性作用藥物或非選擇性作用藥物。其中按重量百分數計算，藥物與總脂材的比例可為1:100?1:1，具體可根據脂質體處方所能包載藥物的量以及藥物的劑量等確定。腫瘤相關成纖維細胞選擇性作用藥物是指能夠對腫瘤相關成纖維細胞產生選擇性細胞殺傷作用，而對普通的成纖維細胞以及其他正常細胞沒有作用或者毒性較低的藥物；非選擇性作用藥物則是常規的細胞毒類藥物，對腫瘤細胞、腫瘤相關成纖維細胞以及其他細胞均能產生殺傷抑制作用，不具有選擇性