一種sd大鼠多發性抽動癥動物模型的構建方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種動物模型的構建方法，具體地說涉及一種IDPN注射誘導SD大鼠 多發性抽動癥動物模型的構建方法。
【背景技術】
[0002] 多發性抽動癥（Tourette Syndrome，簡寫為TS)又稱抽動-穢語綜合征。其臨床 特征為慢性、波動性、多發性運動肌快速抽搐，并伴有不自主發聲和語言障礙。該病以肢體 抽掣及喉中發出怪聲或口出穢語為主要臨床表現，起病在2~12歲之間，男孩發病率較女 孩約高3倍。一般首發癥狀為簡單運動抽動，以面部肌肉的抽動最多，呈間斷性，少數患者 的首發癥狀為簡單的發聲抽動。隨病程進展，抽動的部位增多，逐漸累及到肩部、頸部、四肢 或軀干等部位，表現形式也由簡單抽動發展為復雜抽動，由單一運動抽動或發聲抽動發展 成兩者兼有，發生頻度也增加。其中約30%出現穢語癥或猥褻行為。多數患者每天都有抽 動發生，少數患者的抽動呈間斷性，但發作間隙期不會超過2月。病程持續迀延，超過一年 以上，給患者及患者家庭帶來了沉重的經濟和心理負擔，嚴重影響了他們的生活質量。
[0003] 但是由于TS的發病機理尚有許多不明之處，特別是現階段還沒有完全模擬人類 TS的動物模型，深入了解TS病理機制存在著很大阻礙，導致目前還沒有特效的治療方法， 所以構建出模擬人類TS的理想動物模型，并在此基礎上闡明TS的發病機制與病因，最終找 到有效的治療方法是當務之急。
[0004] 就現階段研宄結果來看，TS發病與腦內單胺類遞質，尤其是多巴胺（DA)系統遞質 含量變化密切相關，可以由TS模型鼠單胺類遞質失衡，尤其是由DA遞質失衡的病理特點 來判斷是否有TS發病跡象，現有技術中化學誘發性TS動物模型主要有（1)苯丙胺（AMP) 模型，造模后因造模劑量不同，小鼠嗅探、咬等行為表現出程度差異；（2)阿撲嗎啡（APO)模 型，造模后小鼠活動性增高，出現短暫攀爬行為；（3)亞氨基二丙腈（IDPN)模型，造模后模 型鼠中樞神經興奮性增加，空間認知能力受損；上述模型中，AMP、APO表面效度短暫，在中 醫藥防治TS中使用受限，而IDPN表面效度明顯、穩定、持久且建模時間短，主要表現為ECC 綜合癥，但是現有IDPN模型基本給藥量大，對模型鼠造成的毒性大，不符合國際動物模型 的倫理性要求；不利于對模型鼠的后續病理分析。
【發明內容】
[0005] 為此，本發明所要解決的技術問題在于現有IDPN誘發TS模型給藥量大，對模型鼠 造成的毒性大，不符合國際動物模型的倫理性要求；且對老鼠造成了不可逆性的傷害，使得 后期的給藥效果受到干預，模型鼠癥狀表現不佳；此外小鼠腦組織體積小，取樣分析有限。 從而提出一種既能滿足給藥量小又能使得模型癥狀明顯的大鼠多發性抽動癥動物模型的 構建方法。
[0006] 為解決上述技術問題，本發明的技術方案為：
[0007] 本發明提供了一種SD大鼠多發性抽動癥動物模型的構建方法，包括如下步驟：
[0008] (1)選擇體重為40-60g的SD大鼠 72只，分為空白對照組和若干組IDPN注射組；
[0009] ⑵將IDPN稀釋為22. 5mg/ml，按照注射量為225mg · kg-1 · Cf1采用腹腔注射的方 法向一組IDPN注射組的大鼠注射所述IDPN，向所述空白對照組的大鼠注射與所述IDPN注 射組同體積的0. 9%的氯化鈉溶液，1次每天；
[0010] (3)連續注射5-6天后，對大鼠進行行為學評測、腦紋狀體單胺類遞質含量和氨基 酸類神經遞質的變化分析。
[0011] 進一步地，所述步驟（2)中，注射IDPN過程中，給藥位點深度為8-10mm，給藥速度 為 0·1-0. 2ml/s。
[0012] 進一步地，所述行為學評測內容包括刻板運動評測和自主活動評測。
[0013] 進一步地，所述單胺類遞質包括5-羥吲哚乙酸、5-羥色胺、多巴胺、3,4_二羥基苯 乙酸、高香草酸和去甲腎上腺素。
[0014] 進一步地，所述氨基酸類神經遞質包括谷氨酸、Y-氨基丁酸、谷氨酰胺、甘氨酸和 Tau蛋白。
[0015] 所述空白對照組有12只SD大鼠，所述IDPN注射組共5組，每組12只大鼠。
[0016] 本發明的上述技術方案相比現有技術具有以下優點：
[0017] (1)本發明提供的SD大鼠多發性抽動癥動物模型的構建方法，包括如下步驟： a.選擇體重為40-60g的SD大鼠72只，分為空白對照組和若干組IDPN注射組；b.將IDPN 稀釋為22. 5mg/ml，按照注射量為225mg · kg-1 · Cf1采用腹腔注射的方法向一組IDPN注射 組的大鼠注射所述IDPN，向所述空白對照組的大鼠注射與所述IDPN注射組同體積的0. 9% 的氯化鈉溶液，1次每天；c.連續注射6-7天后，對大鼠進行行為學評測、腦紋狀體單胺類遞 質含量和氨基酸類神經遞質的變化分析。本發明所采用的模型鼠為SD大鼠，可以全面提供 TS動物模型，進而全面提供TS的發病機制，并且采用最小的造模劑量，從而降低IDPN對大 鼠的毒性，避免大鼠腦組織遭到不可逆性的破壞，從而達到最佳的分析狀態，同時大鼠腦體 積和質量都較大，易于取樣分析。
[0018] (2)本發明提供的SD大鼠多發性抽動癥動物模型的構建方法，連續注射IDPN5-6 天后，即可對大鼠進行行為學評測、腦紋狀體單胺類遞質含量和氨基酸類神經遞質的變化 分析，較現有技術提高了制樣和分析效率；本模型對大鼠的行為學評測結果可以反應多發 性抽動癥患兒中樞神經興奮性的特點，本模型還反映了多發性抽動癥患兒腦單胺類神經遞 質失衡，尤其是DA遞質失衡的病理特點和多發性抽動癥患兒腦氨基酸類神經遞質，尤其是 興奮性氨基酸Glu表達失衡的病理特點，為提供完全模擬人類TS的動物模型打下了良好的 基礎。
[0019] (3)本發明提供的SD大鼠多發性抽動癥動物模型的構建方法，還進一步限制了注 射IDPN過程中，給藥位點深度為8-10mm，給藥速度為0. 1-0. 2ml/s，在此特定的給藥位點和 給藥速度下，提高了對大鼠 TS模型后續的數據分析精度，同時本動物模型的構建方法還縮 短了模型鼠的建立時間，提高了構建效率。
【具體實施方式】
[0020] 為了使本發明的內容更容易被清楚的理解，下面根據本發明的具體實施例，對本 發明作進一步詳細的說明。
[0021] 實施例1
[0022] L 材料
[0023] 動物：SD大鼠，7