一種降低家畜體細(xì)胞數(shù)的復(fù)合抗氧化制劑及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種降低家畜體細(xì)胞數(shù)的復(fù)合抗氧化制劑及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]奶牛乳房炎又名牛乳腺炎，是奶牛最常見的疾病，主要是由于奶牛乳腺受化學(xué)、物理以及微生物等刺激和侵襲導(dǎo)致機(jī)體的機(jī)械性屏障和免疫系統(tǒng)異常而引起的。奶牛乳房炎不僅對(duì)患牛機(jī)體和精神狀態(tài)造成一定的損傷和影響，而且會(huì)降低奶牛的產(chǎn)奶量以及牛乳中乳蛋白、乳糖和脂肪的含量。據(jù)報(bào)道，我國(guó)臨床型奶牛乳房炎感染率約為33.42%，而隱性型乳房炎的感染率高達(dá)46.3% -85.6%左右。全世界每年因奶牛乳房炎導(dǎo)致奶產(chǎn)量的損失量在380萬(wàn)噸左右。病原微生物入侵乳腺后能否引起乳房炎除了取決于病原體的毒力以外，還與機(jī)體的本身免疫力密切相關(guān)。
[0003]褪黑素(Melatonin，MT)是由哺乳動(dòng)物和人類的松果體產(chǎn)生的一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素，具有很好的抗氧化和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力的作用。自從20世紀(jì)80年代MT對(duì)免疫系統(tǒng)有調(diào)節(jié)作用被發(fā)現(xiàn)以后，褪黑素對(duì)機(jī)體免疫功能的影響也越來越受到關(guān)注。增加光照會(huì)使小鼠血漿內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量、淋巴細(xì)胞百分率、中性粒細(xì)胞的吞噬指數(shù)明顯降低，但外源注射褪黑素后，白細(xì)胞數(shù)量，淋巴細(xì)胞百分率和中性粒細(xì)胞的吞噬指數(shù)均顯著回升。暴露于持續(xù)光照下的大鼠，松果體摘除后，血清中性粒細(xì)胞的數(shù)量減少，其粘附與吞噬的晝夜節(jié)律也消失。褪黑素除了影響機(jī)體的細(xì)胞免疫功能外，對(duì)體液免疫也有重要影響，給大齡小鼠注射褪黑素，其血清IgM、IgG較正常對(duì)照組顯著升高，胸腺和脾臟重量明顯增加，T、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞的數(shù)量和活性也相應(yīng)的增加。本發(fā)明的應(yīng)用可以使體細(xì)胞數(shù)在30-100萬(wàn)/mL的高產(chǎn)奶牛的體細(xì)胞數(shù)降低50%以上，明顯高于維生素E、維生素C和茶多酚等(13.9%，劉仕軍等，2010)其它生物抗氧化制劑。本研宄將由褪黑素和維生素C(Vitamin C，Vc)組成的復(fù)合抗氧化制劑應(yīng)用到提高奶牛機(jī)體免疫力的研宄中，通過皮下注射的方式，提高奶牛體內(nèi)的MT濃度，研宄復(fù)合抗氧化制劑對(duì)正常奶牛體細(xì)胞數(shù)的影響，提高奶牛機(jī)體免疫力從而達(dá)到降低體細(xì)胞數(shù)量、提升奶牛健康程度和提高牛奶質(zhì)量的目的。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種降低家畜體細(xì)胞數(shù)的復(fù)合抗氧化制劑及其制備方法與應(yīng)用。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0006]一種降低家畜體細(xì)胞數(shù)的復(fù)合抗氧化制劑，所述制劑為針劑，其有效成分為褪黑素和維生素C。
[0007]進(jìn)一步地，所述褪黑素的濃度為2g/L_30g/L。
[0008]作為優(yōu)選，所述褪黑素的濃度為2.32g/Lo
[0009]進(jìn)一步地，所述維生素C的濃度為lg/L-14.3g/L。
[0010]作為優(yōu)選，作為優(yōu)選，所述維生素C的濃度為8.8g/L。
[0011]更進(jìn)一步地，所述制劑的輔料為為75%乙醇溶液。
[0012]本發(fā)明進(jìn)一步提供了所述制劑的制備方法，所述方法為:將維生素C溶于75%乙醇溶液，然后添加褪黑素，整個(gè)操作過程需在暗室內(nèi)(避光)進(jìn)行。
[0013]本發(fā)明還提供了所述制劑在提高家畜乳汁質(zhì)量上的應(yīng)用。
[0014]所述家畜為奶牛、乳肉兼用牛或奶山羊；優(yōu)選為奶牛。
[0015]在本發(fā)明的一個(gè)【具體實(shí)施方式】中，研宄對(duì)象為中國(guó)荷斯坦奶牛。
[0016]本發(fā)明的有益效果在于:
[0017]本發(fā)明通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在荷斯坦奶牛連續(xù)4天頸部皮下注射2mL本發(fā)明復(fù)合抗氧化制劑，降低了奶牛產(chǎn)奶樣中的體細(xì)胞數(shù)，并為進(jìn)一步開展抗氧化制劑對(duì)降低奶牛體細(xì)胞數(shù)的研宄提供有益的參考。
[0018]本發(fā)明提供的復(fù)合抗氧化制劑的有效成分為褪黑素和維生素C，天然無(wú)害，不會(huì)存在獸藥殘留、休藥期和棄奶期的問題，不僅節(jié)約了生產(chǎn)成本而且減輕了牛場(chǎng)工作人員的工作負(fù)擔(dān)。
[0019]當(dāng)奶牛體細(xì)胞數(shù)高于10萬(wàn)/ml時(shí)，使用本發(fā)明提供的復(fù)合抗氧化制劑，可以使牛奶中的體細(xì)胞數(shù)顯著降低50%左右。充分說明了本發(fā)明所述的復(fù)合抗氧化制劑可以有效降低奶牛體細(xì)胞數(shù)。
【附圖說明】
[0020]圖1為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例I中體細(xì)胞數(shù)在60-100萬(wàn)/mL的奶牛注射復(fù)合抗氧化制劑后1-6天體細(xì)胞數(shù)變化曲線。
[0021]圖2為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例I中體細(xì)胞數(shù)在60-100萬(wàn)/mL的奶牛注射復(fù)合抗氧化制劑后6-16天體細(xì)胞數(shù)變化曲線。
[0022]圖3為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例I中體細(xì)胞數(shù)在30-50萬(wàn)/mL的奶牛注射復(fù)合抗氧化制劑后1-6天體細(xì)胞數(shù)變化曲線。
[0023]圖4為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例I中體細(xì)胞數(shù)在30-50萬(wàn)/mL的奶牛注射復(fù)合抗氧化制劑后6-16天體細(xì)胞數(shù)變化曲線。
[0024]圖5為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例I中體細(xì)胞數(shù)在10-20萬(wàn)/mL的奶牛注射復(fù)合抗氧化制劑后1-16天體細(xì)胞數(shù)變化曲線。
[0025]圖6為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例I中體細(xì)胞數(shù)在0-10萬(wàn)/mL的奶牛注射復(fù)合抗氧化制劑后1-16天體細(xì)胞數(shù)變化曲線。
[0026]圖7為本發(fā)明對(duì)比例I中體細(xì)胞數(shù)在60-100萬(wàn)/mL的奶牛皮下注射維生素C和維生素E(Vitamin E，Ve)制劑后1_16天的細(xì)胞數(shù)變化曲線。
[0027]圖8為本發(fā)明對(duì)比例2中體細(xì)胞數(shù)在60-100萬(wàn)/mL的奶牛皮下注射本發(fā)明不同配比的制劑后1-16天的細(xì)胞數(shù)變化曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0028]以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0029]以下實(shí)施例中使用的試劑和材料均為市售商品。
[0030]褪黑素要求純度達(dá)到99.9 %。
[0031]實(shí)施例1復(fù)合抗氧化制劑及其制備方法
[0032]原料:褪黑素、維生素C ;
[0033]制備方法:準(zhǔn)確稱量880mg維生素C、232mg褪黑素，先將880mg維生素C用75%乙醇溶液溶解于10mL容量瓶，攪拌均勻，然后再加入232mg褪黑素，攪拌均勻，定容至100mL，最后分裝成2mL的注射劑量，所有操作均在暗室中完成。
[0034]實(shí)施例2復(fù)合抗氧化制劑及其制備方法
[0035]同實(shí)施例1，區(qū)別在于，所述褪黑素的濃度為2g/L，所述維生素C的濃度為lg/L。
[0036]實(shí)施例3復(fù)合抗氧化制劑及其制備方法
[0037]同實(shí)施例1，區(qū)別在于，所述褪黑素的濃度為30g/L，所述維生素C的濃度為14.3g/L0
[0038]實(shí)驗(yàn)例I復(fù)合抗氧化制劑在降低奶牛體細(xì)胞數(shù)和提高牛奶質(zhì)量上的應(yīng)用
[0039]I材料與方法
[0040]1.1實(shí)驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)
[0041]2013年9月I日一2013年9月30日在三元綠荷朝陽(yáng)北牛場(chǎng)。
[0042]1.2復(fù)合抗氧化制劑的制備與用法
[0043]復(fù)合抗氧式化劑中褪黑素和維生素C的濃度分別為2g/L-30g/L和lg/L_14.3g/L，采用頸部皮下注射的方法。
[0044]1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0045]選擇泌乳天數(shù)、產(chǎn)奶量相近的荷斯坦奶牛80頭，根據(jù)體細(xì)胞數(shù)多少分4組，即60-100萬(wàn)/mL、30_50萬(wàn)/mL、10-20萬(wàn)/mL、0_10萬(wàn)/mL，每組20頭。試驗(yàn)牛飼喂方式、擠奶方式及日常管理均按奶牛場(chǎng)現(xiàn)有規(guī)程運(yùn)行，即所有試驗(yàn)牛均采用散欄飼養(yǎng)、飼喂全混合日糧、自由飲水，日擠奶三次。
[0046]1.4實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0047]每天只采集第一次擠奶的奶樣，連續(xù)4天在采樣后注射復(fù)合抗氧化制劑2ml，從第五天開始停止注射，只采集奶樣，之后的第六、八、十、十三和十六天繼續(xù)采集奶樣。
[0048]1.5體細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定
[0049]收集到的奶樣加入三滴飽和重鉻酸鉀溶液，放置冰箱4°C冷藏，之后送至全國(guó)奶牛生產(chǎn)性能測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行體細(xì)胞數(shù)的測(cè)定。
[0050]1.6數(shù)據(jù)處理
[0051]所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
[0052]2結(jié)果與分析
[0053]2.1皮下注射實(shí)施例1復(fù)合抗氧化制劑對(duì)體細(xì)胞數(shù)在60-100萬(wàn)/