生物改性蓖麻蛋白質在制備抗乳腺癌藥品中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種藥物的新用途，尤其是生物改性蓖麻蛋白質在制備抗乳腺癌藥品 中的應用。
【背景技術】
[0002] 乳腺是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的，乳腺癌是發生存乳腺上皮組織 的惡性腫瘤。
[0003] 乳腺癌的治療已經進入綜合治療時代，形成了局部治療與全身治療并重的治療模 式，已較成熟的治療方法為手術治療、放射治療、化學治療、、內分泌治療和生物靶向治療。
[0004] 中醫藥治療乳腺癌以調節與平衡、增強機體抗病能力、提高免疫系統功能為主。
[0005] 201110371596. 2公開了一種可高效高特異性滅殺乳腺癌細胞的藥物，所述藥物 T-VISA-BiKDD脂質體，包括脂質體和被脂質體包被的T-VISA-BiKDD治療載體。
[0006] 201010257844. 6公開了一種抗乳腺癌轉移的中藥組合物，由生曬參、巴戟天、荔枝 核、黃精、刺五加、路路通組成。
[0007] 201110197692.X公開了黃酮類化合物的抗乳腺癌用途，所述的黃酮類化合物是從 小葉蓮中分離得到的。
[0008] 201110280031. 3公開了針對乳腺癌Her2/new的納米抗體或多肽涉及對乳腺癌過 表達表皮生長因子受體2 (Her2/new)的多肽和納米抗體及制備納米抗體和多肽的方法。
[0009] 201110222789. 1公開了一種治療乳腺癌的中藥組合物及其制備方法，該中藥組合 物是由鱉甲、牡蠣、昆布、海藻、地骨皮、沙參、山楂、木香、西洋參、柴胡、茯苓、羚羊角、血竭、 王不留行、甘草組成。
[0010] 201010128441. 1公開了蛇床子素衍生物及其制備方法和在制備抗乳腺癌藥物中 的應用，該方法是用蛇床子素五起始原料，經還原溴化、催化偶聯劑制得蛇床子素衍生物。
[0011] CN102892784A公開了用于治療乳腺癌的方法，該發明涉及包含胃泌素原抗體的組 合物治療和阻止乳腺癌或乳腺癌復發的方法。
[0012] CN103153328A公開了肽在乳腺癌和/或骨轉移灶的治療中的用途，該發明涉及式 環-(Arg-Gly-Asp-NMe-Vae)的肽和/或其制藥可接受的衍生物、溶劑化物和/或鹽在制 造用于治療人的乳腺癌和/或骨轉移灶的藥物中的用途。
[0013] CN103384530A公開了乳腺癌治療劑，該發明涉及治療或預防患者的癌的方法，包 括給患者施用治療有效量的RANKL抑制物。
[0014] CN101528768公開了與乳腺癌相關的基因和多肽，該發明認為在乳腺癌中人基因 A7322顯著提高，這些基因及其編碼的多肽可以用作診斷或用作開發抗乳腺癌藥物中的靶 分子。
[0015] CN101171344公開了乳腺癌分類的相關材料和方法，該發明提供了新的基因表達 標志物，該標志物可用作治療響應的預測性標志物。
[0016] CN103189391A公開了新抗原結合蛋白，該抗原結合蛋白與HER3受體相結合。該發 明還涉及所述抗原結合蛋白在治療乳腺癌等癥的治療及預防中的應用。
[0017] 蓖麻是大戟科蓖麻屬植物，蓖麻種子含有蓖麻毒素、血細胞凝集素等成分，蓖麻毒 素是一種蛋白質毒素，存在于蓖麻籽的蛋白質中。
[0018] 蓖麻毒素是由兩條多肽鏈組成，N-末端的氨基酸是異亮氨酸（lie)和丙氨酸 (Ala)，根據末端氨基酸命名為Ile鏈（即A鏈）和Ala鏈（即B鏈)，兩鏈間由一個二硫鍵連 接。
[0019] 實驗證明：以二硫鍵結合A鏈、B鏈的蓖麻毒素毒性很強，但是分離的A鏈、B鏈混 合在一起卻沒有毒性，故毒素的兩鏈以二硫鍵的結合對毒性是重要的，這是一個奇妙的現 象。
[0020] 201210316220. 6公開了蓖麻蛋白的生物改性工藝，該發明生物改性過程首先誘導 昆蟲逐漸嗜硫到一定程度后加入到含蓖麻毒素的培養基中，可以對蓖麻毒素A鏈與B鏈間 的雙硫鍵快速進行切割，并與切割后的A鏈和B鏈分別產生抗性應答物，既消除蓖麻毒素的 毒性，又充分利用A鏈與B鏈的生物活性制備出一種獨特蛋白。
【發明內容】
[0021] 本發明的目的是提供一種生物改性蓖麻蛋白質在制備抗乳腺癌藥品中的應用，利 用生物改性蓖麻蟲體為原料，經過分離純化蛋白質，再用此蛋白質制備各種劑型的藥品，本 過程工藝簡要明了，藥品成分明確，一致性好，療效明顯。
[0022] 本發明的目的是通過以下技術方案實現的： (1)將1000 g生物改性蓖麻蟲體在常溫膨化裝置（200520108339. X)中常溫條件下膨化 粉碎。
[0023] 本步驟中，所述膨化壓力為0? l~5MPa，時間為10~60min。
[0024] (2)膨化粉碎后的物料加入到膨脹溶劑體系提取裝置（201210179076. 6)中，加入 膨脹溶劑并加壓至2~10MPa，形成膨脹溶劑體系，提取出生物改性蓖麻蛋白質粗品。
[0025] 本步驟中，所述膨脹溶劑由]-IOKg液態二氧化碳、100~500mL甲醇及 100~300gNH 3 ? H2O組成或由l~10Kg液態二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化銨組 成。
[0026] 本步驟中，所述提取溫度為10~20°C，時間為10~30min。
[0027] (3)收集含有生物改性蓖麻蛋白質粗品的溶液并且用微孔過濾器過濾去掉雜質。
[0028] 本步驟中，所述微孔過濾器的孔徑為0. 5~50Mm。
[0029] (4)用超濾機超濾處理，收集含有相應分子量的生物改性蓖麻蛋白質超濾溶液。
[0030] 本步驟中，所述超濾機的孔徑為50~100nm。
[0031] (5)超濾液溶解在適宜的溶劑中用固相萃取柱分離，收集洗脫成分。
[0032] 本步驟中，所述溶劑為乙腈。
[0033] (6)將洗脫成分溶解在合適的溶劑體系中，用超聲駐波液相制備色譜 (200920274485. 8)分離純化。
[0034] 本步驟中，所述溶劑體系由正丁醇-乙酸乙酯-水(體積比1. 25:3. 75:5)組成或 4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比）組成。
[0035] (7)純化后的生物改性蓖麻蛋白質用真空冷凍干燥機制備成凍干蛋白粉。
[0036] 本步驟中，所述真空冷凍干燥溫度為_30~50°C、時間為18~26h。
[0037] (8)賦予不同的藥用輔助材料，分別制備成注射劑、口服劑、栓劑，可用于制備抗乳 腺癌藥品。
[0038] 本發明的優點和有益效果如下：通過本發明分離純化的生物改性蓖麻蛋白 質用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法及葡聚糖凝膠G-75凝膠過濾法測得相對分子量為 12. 1~13. 2KPa ;用等電聚焦發測定其等電點為pH8. 0~9. 2 ;常規化學法分析結果表明其不 含糖類和磷酸基團；紫外分光光度法分析在260nm和280nm測定純化的生物改性蓖麻蛋白 質含量為98. 1%;分子結構屬非典型、非單一的昆蟲蛋白質，鏈內與鏈間不含二硫鍵，其三 級結構構象單元以無規卷曲為主，a螺旋與0折疊的含量比例基本相當。本發明制備的 生物改性蓖麻蛋白質制劑質量穩定，結構清楚，藥理明晰，療效明顯，含量可檢可測，劑型多 樣，成本較低，適合工業化生產。
【具體實施方式】
[0039] 下面結合實施例對本發明的技術方案作進一步的說明，但并不局限如此，凡是對 本發明技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的精神和范圍，均應涵 蓋在本發明的保護范圍中。
[0040] 實施例1: (1) 將1000 g生物改性蓖麻蟲體干燥品裝入常溫膨化裝置（200520108339. X)中，對 膨化裝置內充入二氧化碳氣體并加壓至〇. l~5MPa，時間10~60min，然后迅速釋放壓力至常 壓，生物改性蓖麻蟲體被膨化成粉體； (2) 膨化粉碎后的生物改性蓖麻粉體加入到膨脹溶劑體系提取裝置（201210179076. 6) 中，加入l~10Kg液態二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH3 *H20,加壓至2~10MPa，形成 膨脹溶劑體系，保持溫度l〇~20°C，時間10~30min，生物改性蓖麻粉體中的蛋白質溶解，然 后降壓至常壓，生成生物改性蓖麻蛋白粗品與甲醇-NH 3 ? H2O的混合液； (3) 收集含有生物改性蓖麻蛋白粗品的溶液，用孔徑0. 5~50Mm