通過膽固醇生物合成抑制劑的雌激素受體β的誘導和治療癌癥的方法
【專利說明】通過膽固醇生物合成抑制劑的雌激素受體β的誘導和治 療癌癥的方法
[0001] 本申請要求2012年6月27日提交的美國臨時申請號61/665, 116的優先權權益， 其公開內容通過引用結合到本文中，如同其全文寫在本文中一樣。
[0002] 資助聲明 本發明在政府的支持下，按照國家衛生研宄院授予的資助號R56CA86916下取得。US政 府具有對本發明的一定權益。
[0003] 本文公開一種治療癌癥的新方法，使用組合藥物以改進癌癥治療的方法，和用于 治療癌癥包括三-陰性乳腺癌的聯合療法。
[0004] 雌激素受體（"ER"）已長期靶向癌癥療法，特別是乳腺癌療法。存在兩大類受體， 每一類有進一步的亞型。雌激素受體-a (ERa )是促-增殖蛋白；其誘導細胞增殖和腫瘤 生長。ERf3是乳腺癌細胞中細胞生長的負調節劑。盡管ERa表達在乳腺腫瘤發生期間， 特別是在早期階段增加，但ERf3減少。ERa和ERf3優先地形成功能性異二聚體，其以與 ERa同二聚體的親和力類似的親和力結合DNA，且大于ER β同二聚體的親和力，和ER β被 認為是作為ER a轉錄活性的負調節劑起作用。因此，根據促進ER β活性將造成腫瘤抑制 的理論，ERf3激動劑已被開發為潛在的抗癌劑。
[0005] ERf3廣泛表達于人體內，已在結腸、食管、胃、腦、肺、前列腺、睪丸、胰腺和血管的 腫瘤中被檢測到，和ERI3在其它癌癥中的作用已有充分的記錄。例如，ERI3表達的喪失不 僅與乳腺癌的晚期相關，而且還與結腸癌和前列腺癌的晚期相關。ERf3蛋白表達也隨著更 具侵襲性的黑色素瘤而逐漸減小。還已證實選擇性ERf3激動劑在何杰金氏淋巴瘤細胞系 和異種移植物研宄中的抗增殖和促凋亡作用。最后，ERf3激動劑還促進ERf3在神經膠質 瘤細胞中的表達和腫瘤-抑制功能二者。總之，這些發現促使針對ERf3調節劑，特別是激 動劑的大量研宄。
[0006] 雌激素當然是調節一系列廣泛的身體過程的類固醇激素，因而雌激素受體涉及非 癌癥過程也是不足為奇的。例如，最近數據提示ERf3的一個功能可能是調節免疫應答，并 提示ERf3-選擇性配體可以是治療慢性腸和關節炎癥的治療上有用的藥物。另外，ERf3調 節已被建議作為一種用于子宮內膜異位癥和代謝性疾病例如肥胖癥和代謝綜合征的療法。 并且盡管ERa和ERf3在動脈壁中表達且在動脈粥樣硬化的進展期間發現表達的變化，但 各自參與的性質值得進一步研宄。例如，ERf3在人中的表達與冠狀動脈鈣化和動脈粥樣硬 化相關，然而ERa和ERf3在人大動脈中的表達隨著動脈粥樣硬化的進展而減少。
[0007] 本文公開了涉及這樣的發現的方法和組合物，即膽固醇生物合成抑制劑在 ER a -陽性和ER a -陰性乳腺癌細胞系二者（包括三陰性細胞）中誘導抗增殖蛋白，雌激素 受體β (ER β )。膽固醇生物合成抑制劑有效地減少乳腺癌細胞的生長，并破壞ER a -陽性 乳腺癌細胞中的促-增殖ERa。然而，OSC的膽固醇生物合成抑制劑與ERf3激動劑一起的 組合比單獨使用分開的配體額外地抑制乳腺癌細胞的生長。這種作用在三-陰性細胞中尤 其顯著。另外地，使用SiRNA敲除實驗在腫瘤細胞中ERf3的下調防止由膽固醇生物合成抑 制劑介導的細胞-殺死作用。
[0008] 因此，本文公開了通過誘導ER β使細胞對化學治療劑敏感來治療癌癥的方法。雖 然這種方法可在其中涉及ERf3信號傳導的任何組織和細胞類型中實施，但在一個實施方 案中，癌癥是乳腺癌。在進一步的實施方案中，癌癥是ER β -陰性乳腺癌，和在又一個實施 方案中，癌癥是三-陰性乳腺癌（即，對于PR、ERa和HER-2為陰性）。在另一個實施方案 中，癌癥是卵巢癌。在某些實施方案中，誘導通過給予膽固醇生物合成抑制劑進行。在進 一步的實施方案中，膽固醇生物合成抑制劑是氧化鯊烯環化酶（"0SC"）的抑制劑，例如Ro 48-8071〇
[0009] 還公開用于治療癌癥的組合療法，其包括膽固醇生物合成抑制劑和ERf3激動劑。 在一個實施方案中，癌癥是乳腺癌。在進一步的實施方案中，癌癥是ER β -陰性乳腺癌，在 又一個實施方案中，癌癥是三-陰性乳腺癌（即，對于PR、ERa和HER-2為陰性）。在另一 個實施方案中，癌癥是卵巢癌。在進一步的實施方案中，膽固醇生物合成抑制劑是氧化鯊烯 環化酶（"0SC"）的抑制劑，例如Ro 48-8071。
[0010] 通過本文公開的方法和組合物治療的癌癥可具有不同的類型和/或來源，例如乳 腺、前列腺、肺、結腸、卵巢、胰腺、肝、甲狀腺、胃、子宮、淋巴瘤、腦、皮膚、腎、口、喉、舌、鼻、 食管和膀胱癌癥，以及白血病和淋巴瘤，及其耐藥表型。
[0011] 附圖簡述 圖I. Ro 48-8071治療對ERa、ER0和Bcl-2蛋白在T47-D乳腺癌細胞中的表達的影 響。
[0012] 圖2. Ro 48-8071治療對ERa和ER β蛋白在BT-474乳腺癌細胞中的表達的影 響。
[0013] 圖3.低劑量Ro 48-8071對ERa和ER β表達的影響。
[0014] 圖4. Ro 48-8071刺激ER β在ER a -陰性細胞系（三-陰性）中的表達。
[0015] 圖5.用ER β siRNA的ER β敲除阻斷Ro 48-8071的抗增殖作用。T47-D細胞用 ER^ siRNA (30 和 60 nM ;siER0，Santa Cruz)、雜亂 RNA (siC)或者轉染試劑單獨（C) 處理72h (上方小圖）。在用60 nM siRNA處理的組中，細胞用Ro 48-8071 (10 μΜ)或單 用媒介（C)處理48 h (下方小圖），腫瘤細胞生存力使用如所述的SRB測定法測定。在下 方小圖中，*指示顯著地不同于媒介對照組，和**指示在雜亂RNA組（siRNA-C)和親本細 胞組中顯著地不同于Ro 48-8071處理的樣品（p〈 0.001 ;AN0VA)。這些結果證實，當在乳 腺癌細胞中的ERβ的水平減少時，Ro 48-8071在乳腺癌細胞中的抗增殖作用降低。
[0016] 圖6. ERI3激動劑增強Ro 48-8071降低ΒΤ-474細胞的生存力的能力。ΒΤ-474 細胞用10 μΜ Ro 48-8071 ± 1 μΜ DPN，或者單獨用DPN處理。細胞生存力在48 h后 使用SRB測定法測定。在圖6中，*指示顯著地不同于對照組，和**指示顯著地不同于Ro 48-8071 和 DPN 處理的樣品（p〈0. 001，AN0VA)。
[0017] 圖 7. PHTPP ("PH")，一種 ER β 拮抗劑，阻斷 Ro 48-8071 的抗增殖作用。BT-474 細胞用10 μ M Ro 48-8071處理24 h ± 10或100 nM ΡΗ，或者單獨用PHTPP處理。細胞 生存力如前所述經24 h后測定。在圖7中，*指示顯著地不同于對照，**指示顯著地不同 于Ro 48-8071處理的樣品，和指示顯著地不同于對照（p〈0. 001，AN0VA)。Ro 48-8071 在乳腺癌細胞中的抗增殖作用在其與ERβ拮抗劑組合時減少。
[0018] 詳細描述 因此，本文提供一種在受試者中治療癌癥的方法，該方法包括： i) 給予足以在癌細胞中誘導ERβ s的量的膽固醇生物合成抑制劑；和 ii) 給予治療有效量的選擇性或非選擇性ER β激動劑； 其中這些步驟可順序地或同時地進行。
[0019] 在段落[0018]中公開的方法的某些實施方案中，膽固醇生物合成抑制劑是OSC的 抑制劑。在其它實施方案中，膽固醇生物合成抑制劑是角鯊烯單加氧酶的抑制劑。在其它 實施方案中，膽固醇生物合成抑制劑是角鯊烯合酶的抑制劑。在其它實施方案中，膽固醇生 物合成抑制劑是法呢基焦磷酸合酶的抑制劑。在其它實施方案中，膽固醇生物合成抑制劑 是香葉基焦磷酸合酶、甲羥戊酸-5-焦磷酸脫羧酶、磷酸甲羥戊酸激酶或甲羥戊酸激酶的 抑制劑。
[0020] 在段落[0019]中公開的方法的某些實施方案中，OSC的抑制劑是以下段落
[0083]-[0131]的任何一段公開的式I、II或III的化合物。在某些實施方案中，OSC的抑 制劑選自在下表1中公開的化合物。在進一步的實施方案中，OSC的抑制劑選自在下表1中 公開的具有少于100 ηΜ的IC5tl的化合物。在進一步的實施方案中，OSC的抑制劑選自在下 表1中公開的具有少于40 ηΜ的IC5tl的化合物。在進一步的實施方案中，OSC的抑制劑選 自在下表1中公開的具有少于10 ηΜ的IC5tl的化合物。
[0021] 在段落[0020]中公開的方法的某些實施方案中，OSC的抑制劑是Ro 48-8071。
[0022] 在段落[0018]_[0021]的任何一段中公開的方法的某些實施方案中，癌癥是乳腺 癌。
[0023] 在段落[0022]中公開的方法的某些實施方案中，癌癥是ER-陰性乳腺癌。
[0024] 在段落[0022]中公開的方法的某些實施方案中，癌癥是ERf3 -陰性乳腺癌。
[0025] 在段落[0022]中公開的方法的某些實施方案中，癌癥是三-陰性乳腺癌。
[0026] 在段落[0