一種獸用干擾素誘導劑及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種干擾素誘導劑，具體涉及一種獸用干擾素誘導劑基及其制備方 法。
【背景技術】
[0002] 干擾素（Interferon，IFN)，是一種細胞因子，具有抑制細胞分裂、調節免疫、抗病 毒、抗腫瘤等多種作用。干擾素作為一種廣譜抗病毒劑，并不直接殺傷或抑制病毒，主要是 通過細胞表面受體作用使細胞產生抗病毒蛋白，從而抑制病毒的復制；同時還可增強自然 殺傷細胞（NK細胞）、巨噬細胞和T淋巴細胞的活力，從而起到免疫調節作用，并增強抗病毒 能力。它們在同種細胞上具有廣譜的抗病毒、影響細胞生長，以及分化、調節免疫功能等多 種生物活性。
[0003] 聚肌胞，又稱多聚肌苷酸-胞苷酸，是人工合成的雙鏈RNA聚合物，是干擾素強誘 生劑，除具有廣譜抗病毒的作用，同時還具有抗菌、抗原蟲、抗腫瘤、抗輻射和免疫調節等多 種生物學作用。此外，聚肌胞因其獨特的化學結構，在體內可被降解掉，不會造成殘留，危害 人類健康，具有安全、環保的特點。聚肌胞在實驗動物上的試驗、人醫的I期和II期臨床上 治療疾病的效果已經被證實。目前聚肌胞在人醫臨床上廣泛應用于皰瘆病毒、流感病毒、肝 炎病毒等病毒性疾病和某些腫瘤疾病的防治。在獸醫臨床上主要用于治療病毒性疾病的研 宄。
[0004] 目前的聚肌胞注射液產品中含有卡那霉素作為陽離子穩定劑，而卡那霉素的使用 容易造成抗生素的殘留等問題。殼聚糖雖然可以作為陽離子穩定劑替換卡那霉素，但殼聚 糖是一種氨基多糖，由于分子間的作用力較強，只能溶于某些特殊的酸性溶液，且殼聚糖酸 溶液貯存過程中易發生降解，黏度和分子質量會發生較大變化而影響品質穩定，極大限制 了殼聚糖的廣泛應用。曾有報道利用殼聚糖將聚肌胞包被形成納米微囊，其依據是運用激 光筆檢驗最終制劑的丁達爾現象，由于殼聚糖溶解在酸性溶液中即形成粘性的膠體，在光 照下本身就會出現丁達爾現象，與形成含聚肌胞納米微囊無必然聯系，因此，該法尚不足以 證明聚肌胞被殼聚糖包裹，此外，因為聚肌胞在酸性溶液中容易降解，聚肌胞-殼聚糖酸溶 液并不適合長期保存。
[0005] 鈣離子對穩定聚肌胞的二級結構也有重要的作用，現有技術在合成過程中直接在 反應液中添加氯化鈣粉末，由于氯化鈣本身比較難溶，直接添加粉末會導致高濃度鈣離子 容易與反應體系中的磷酸氫根、游離的聚肌苷酸和聚胞苷酸等成分形成沉淀而影響產品品 質以及合成濃度。
[0006] 此外，現有的聚肌胞制備技術還用到焦亞硫酸鈉、賦形劑等物質，如公開號為 CN101810638A的發明專利申請文件，公開了一種內源干擾素誘導物的注射液和納米微囊化 溶液的制備方法，其中具體公開了：在注射水中加入焦亞磷酸鈉、氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸 二氫鈉，然后加熱20-60攝氏度，接著加入聚胞苷酸攪拌、溶解，保溫lOmin，然后再加入聚 肌苷酸，攪拌、溶解，保溫15-30min。焦亞硫酸鈉、賦形劑等物質易對機體產生不同程度的刺 激，尤其是焦亞硫酸鈉毒性大不可吞食，接觸到人畜眼睛還會產生嚴重傷害，也不利于車間 人員生產操作。上述現有技術制備的聚肌胞產品在給動物注射或者藥浴、拌餌給藥時有出 現副反應以及污染環境的風險，若用于肉用經濟動物還牽涉到食品安全問題，難以推廣。
【發明內容】
[0007] 本發明的目的在于提供一種副反應少、刺激性低、安全性高的獸用干擾素誘導劑， 同時本發明還提供該獸用干擾素誘導劑的制備方法。
[0008] 為解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：
[0009] 一種獸用干擾素誘導劑，其由如下組分制成：pH值為7. 2的氯化鈉-磷酸鹽緩沖 液、濃度為10_80g/L的氯化媽水溶液、濃度為0. l-5g/L的殼聚糖鹽酸鹽水溶液、聚肌苷酸、 聚胞苷酸，所述聚肌苷酸質量與氯化鈉-磷酸鹽緩沖液的體積比為〇. 5-10g/L，所述聚胞苷 酸質量與氯化鈉-磷酸鹽緩沖液的體積比為〇. 5-10g/L，所述氯化鈣水溶液與氯化鈉-磷酸 鹽緩沖液的體積比為2-16 :1000,所述殼聚糖鹽酸鹽水溶液與氯化鈉-磷酸鹽緩沖液的體 積比為984-998 :1000 ;所述氯化鈣水溶液和殼聚糖鹽酸鹽水溶液的總體積與氯化鈉-磷酸 鹽緩沖液的體積比為1:1。
[0010] 本發明中所述pH值為7. 2的氯化鈉-磷酸鹽緩沖液由二水合磷酸二氫鈉、磷酸氫 二鈉、氯化鈉和水混合而成；每IL氯化鈉-磷酸鹽緩沖液中含有0. 262g二水合磷酸二氫 鈉、I. 546g磷酸氫二鈉、8. 768g氯化鈉。
[0011] 本發明中的獸用干擾素誘導劑，其制備方法包括如下步驟：
[0012] a.取聚肌苷酸，然后用1/2體積的所述氯化鈉-磷酸鹽緩沖液（即配方中的氯化 鈉-磷酸鹽緩沖液總體積的一半）溶解，然后在40-70°C的溫度下加熱5-10分鐘；
[0013] b.取聚胞苷酸，然后用1/2體積的所述的氯化鈉-磷酸鹽緩沖液（即配方中的氯 化鈉-磷酸鹽緩沖液總體積的一半）溶解，然后在40-70°C的溫度下加熱5-10分鐘；
[0014] c.將a步驟和b步驟得到的液體混合，然后以10-40轉/分的速度攪拌3-10分 鐘；然后在40-70°C的溫度下反應20-60分鐘，反應過程中保持10-40轉/分的速度攪拌， 得到反應液；
[0015] d.待反應液冷卻至室溫，然后每間隔5-20s逐滴滴加氯化鈣水溶液，所述滴加的 氯化媽水溶液的總體積與氯化鈉-磷酸鹽緩沖液的體積比為2-16:1000,滴加過程保持 10-40轉/分的速度攪拌；
[0016] e.向經過d步驟處理的反應液中緩慢加入配方量的殼聚糖鹽酸鹽水溶液（即上文 限定的殼聚糖鹽酸鹽水溶液與氯化鈉-磷酸鹽緩沖液的體積比為984-998 :1000 ;所述氯化 鈣水溶液和殼聚糖鹽酸鹽水溶液的總體積與氯化鈉-磷酸鹽緩沖液的體積比為1:1)，加入 過程保持10-40轉/分的速度攪拌；
[0017] f.將經過e步驟處理的反應液用孔徑0. 2-0. 45 μm的濾膜過濾，收集濾液，即得。
[0018] 本發明中，優選的方案為所述d步驟中的氯化鈣水溶液由如下步驟制得：根據所 述氯化鈣水溶液的濃度（即10-80g/L)，取氯化鈣溶于水，然后用0. 2-0. 45 μ m的濾膜過濾， 收集濾液，即得。
[0019] 本發明中，優選的方案為所述e步驟中的殼聚糖鹽酸鹽水溶液由如下步驟制得： 根據所述殼聚糖鹽酸鹽水溶液的濃度（即〇. l_5g/L)，取殼聚糖鹽酸鹽溶于水，然后用 0. 2-0. 45 μm的濾膜過濾，收集濾液，即得。
[0020] 與現有技術相比，本發明具有如下優點：
[0021] 1、本發明中使用可溶性殼聚糖鹽酸鹽代替卡那霉素和殼聚糖，具有以下優點：1) 殼聚糖鹽酸鹽對動物機體和環境均無毒副作用，成本低；2