一種新型富硒載藥微球的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及載藥微球技術領域，具體地，涉及一種新型富砸載藥微球的制備方法。
【背景技術】
[0002]砸作為一種重要的微量元素，于1817年被瑞典化學家Berzelius發現，以后長達一個多世紀的時間里人們一直認為所有含砸化合物都是有毒物質直到1957年美國營養學家Schwarz和Foltz發現砸可以預防鼠肝壞死和雞滲出性素質后才提出砸是機體不可缺少的微量元素。20世紀70年代以來砸的生物學功能及其在動物生產中的應用受到人們的普遍關注通過廣泛深入的研宄取得了明顯成效。砸參與輔酶A、輔酶Q的合成對蛋白質的合成、糖代謝、生物氧化等都有影響。體內砸一般與蛋白質結合存在，例如:砸重要生理作用是參與谷胱甘肽過氧化物酶GSH- PX的組成部分。近來研宄發現砸是谷胱甘肽過氧化物酶砸酶家族活性部位的輔基，該類酶具有清除過氧化物防止細胞損傷延緩細胞衰老的作用。砸缺乏癥的臨床表現主要為骨骼肌變性、壞死、肝營養不良及心、肝纖維變性等。缺砸飼養的小鼠血中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH- Px)活性明顯降低脂質過氧化物(LPO)含量升高。因此砸的藥理學、生理學和生物化學性質引起了人們的興趣。
[0003]動物補砸制劑中，常用的砸源有無機砸化合物主要有亞砸酸鹽、砸酸鹽，有機砸有父系酵母、砸代蛋氨酸，以及納米砸等新型補砸制劑。大量研宄表明，相對于亞砸酸鹽、砸代蛋氨酸、甲基砸代半胱氨酸等砸產品，納米砸更好的吸收率，低毒性，特有的活性高、生物利用率高和顯著提高動物的免疫力等優點。其次，與無機砸相比，有機砸具有顯著的高效低毒等優點，所以富砸酵母也是目前機體最有效的補砸源之一。目前，國內仍然使用亞砸酸鈉作為商業補砸制劑添加到動物飼料中，歐美國家多采用砸代蛋氨酸作為商業補砸制劑。瑞典要求乳豬料中必須使用有機砸；日本已規定飼料中禁止使用無機砸。砸代蛋氨酸和富砸酵母曾被認為是理想的補砸制劑；然而研宄結果表明，砸代蛋氨酸能夠代替蛋氨酸非特異性的融入蛋白質中，砸代蛋氨酸有在組織中積累至毒性水平的危險。目前已有人和畜禽由于過量攝入含砸代蛋氨酸的食物發生砸中毒現象的相關報道。因此，確定有機砸的添加方式等一些列問題有待解決。但有機砸的成本過高，如酵母砸通常為亞砸酸鹽的幾倍甚至幾十倍，因此要考慮到成本等經濟問題。目前普遍推薦的無機砸源是亞砸酸鋇，主要因為其在動物體內有較長的滯留期，亞砸酸鈉為119天，亞砸酸鋇能達到140天以上，且毒性相對亞砸酸鈉較低，但亞砸酸鋇不溶于水，須做成油狀懸浮液，如俄羅斯的油乳混懸亞砸酸鋇制劑，杰波林和英國的亞砸酸鋇乳劑在實驗中都能達到較長時間的高血砸水平。隨著制劑新工藝的發展與緩釋緩控技術的應用，通過微球特殊的釋放模式來降低無機砸毒性，從而降低給藥量減輕機體負擔。
[0004]聚乳酸(polylactic acid or polylactide，P LA)是以速生資源玉米為主要原料，經發酵制得乳酸，再以乳酸為主要原料聚合得到的聚合物。聚乳酸具有良好的熱塑性和熱固性，同時具有生物相容性和可生物降解性，在人體內最終代謝為水和二氧化碳，是美國食品藥品管理局(FDA)已批準可用于人體的生物降解材料。因此采用以聚乳酸及其共聚物為代表的生物可降解聚合物為骨架材料，包裹多肽、蛋白質藥物制成緩釋微球制劑，成為制劑研宄的熱點。且目前歐美日等發達國家在聚乳酸微球的制備方法、外觀形態、釋放機理等方面已做了大量研宄。國內也出現一批醫學上應用的聚乳酸微球，如伊維菌素聚乳酸微球、利福平聚乳酸微球和明教聚乳酸微球等。
[0005]然而，緩釋微球在獸藥領域的應用并不多，以及在補砸制劑中未見富砸緩釋微球的相關研宄報道。傳統砸制劑多為油乳劑型，通過肌肉注射方式給藥時，由于不能有效控制藥物的釋放速度引起動物機體局部藥物濃度過高，而可能產生炎癥反應，引發疾病產生。
【發明內容】
[0006]本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種新型富砸載藥微球的制備方法。所述富砸載藥微球是以亞砸酸鋇為主藥，采用生物可降解材料聚乳酸作為包覆材料，利用乳化溶液揮發法制備成載藥微球，其載藥量高，且可通過控制工藝條件控制藥物的釋放速度，從而減少亞砸酸鋇使用量，延長藥物的作用時間，降低藥物的毒副作用，提高藥物的療效。
[0007]本發明的目的通過以下技術方案予以實現。
[0008]一種新型富砸載藥微球的制備方法，包括如下步驟:
51.將1~8份亞砸酸鋇粉末微粉化，加入10-25份二氯甲烷中，超聲分散，超聲波功率為100~200W，分散時間為30min ；
52.將4~12份聚乳酸溶于100~300份二氯甲烷中，混合均勻形成溶液；
53.將SI得到的混合物均勻分散于S2所述溶液中，混合均勻形成乳液；
54.將1~100份聚乙烯醇溶于1000~5000份水中，再加入20~100份NaCl，加熱混合均勻形成聚乙烯醇溶液；
55.再將S3形成的乳液加入到S4所述聚乙烯醇溶液中，混合均勻形成S/0/W型乳液；
56.攪拌S5得到的乳液使二氯甲烷揮發，固化成球，再經離心、洗滌、干燥，得到所述富砸載藥微球；
其中，亞砸酸鋇為主藥；所述聚乳酸分子量為100000 ;
所述亞砸酸鋇、二氯甲烷、聚乳酸PLA、聚乙烯醇PVA、NaCl和水的份數均為重量份數。
[0009]由于亞砸酸鋇幾乎不溶于水，現有技術主要是油乳注射液，且劑量較大，而亞砸酸鋇具有一定毒性，會對機體造成一系列不良影響，不利于在補砸制劑中應用。本發明通過亞砸酸鋇的超聲分散預處理，很好的解決亞砸酸鋇在溶劑中分散難的問題，亞砸酸鋇的溶解性決定分散處理方法，通過大量試驗證明使用水溶劑溶解分散效果不佳，為了達到與PLA同步分散效果選用二氯甲烷作為兩者的共用溶劑，采用超聲分散方式避免在分散過程中二氯甲烷揮發造成的傷害；在聚乙烯醇溶液中加入一定量的NaCl，改變分散體系的滲透壓有利于微球迅速形成且表面孔洞較少；并且合理優化制備載藥微球的各組分含量，采用S/0/W的包被工藝，S/0/W難點在于所包被物質在溶劑中的分散度及物質顆粒，需微粉化均勻分散后容易形成微球，利用乳化溶液揮發法制備成富砸載藥微球，其載藥量高，且可通過控制工藝條件控制藥物的釋放速度，從而減少亞砸酸鋇使用量，延長藥物的作用時間，降低藥物的毒副作用，提高藥物的療效。
[0010]優選地，制備得到的富砸載藥微球的平均粒徑為3.52-20.34 μ mo
[0011]優選地，制備得到的富砸載藥微球的載藥量為17.5-25.3%。
[0012]S2、S3、S4、S5所述混合可以采用超聲波分散或者機械攪拌分散。
[0013]采用超聲波分散時，優選地，S3所述混合采用超聲波分散，超聲波功率為100W，分散時間為l~3h。優選地，S2、S5所述混合采用超聲波分散，超聲波功率為100W，分散時間為I?3h0
[0014]采用機械攪拌分散時，優選地，S3所述混合采用機械攪拌，轉速為5000~15000r.mirT1，攪拌時間為30s~lmin。優選地，S2所述混合采用機械攪拌，轉速為300~500r.HiirT1，攪拌時間為20~40min。優選地，S5所述混合采用機械攪拌，轉速為300~500r.min \攬拌時間為6~20h。
[0015]優選地，S6所述洗滌所用的洗滌液為去離子水或/和鹽酸，共洗滌3~5次。
[0016]優選地，S6所述洗滌為分別用去離子水洗滌2~3次，用5%鹽酸洗滌1~2次。
[0017]優選地，S6所述干燥為常溫真空干燥，干燥后將制備得到的載藥微球于4°C避光保存。
[0018]與現有技術相比，本發明具有以下有益效果:
(I)本發明所述富砸載藥微球以亞砸酸鋇為主藥，通過亞砸酸鋇的超聲分散預處理，超聲分散通常使用超聲探針，本方法采用密閉超聲，將所超聲分散物質加入密閉容器中進行超聲，此法能有效避免超聲分散時物質及溶劑揮發造成的不必要傷害；在聚乙烯醇溶液中加入一定量的NaCl，通過改善水相滲透壓促進微球形成，減少由于二氯甲烷揮發造成的微球表面孔洞，有利于微球達到更好的緩釋效果；并且通過合理優化制備載藥微球的各組分含量，采用S/0/W的包被工藝，利用乳化溶液揮發法制備成載藥微球，其載藥量高，且可通過控制工藝條件控制藥物的釋放速度，從而減少亞砸酸鋇使用量，延長藥物的作用時間，降低藥物的毒副作用，提高藥物的療效。
[0019](2)本發明制備方法工藝流程簡單，制備得到的富砸載藥微球的平均粒徑為
3.52-20.34 μ m，載藥量為17.5-25.3%，載藥量大且重復性好。
[0020](3)本發明采用的主藥為無機砸亞砸酸鋇，成本低廉，毒性較低，且在體內滯留時間長，因此制備成載藥微球推廣到獸藥領域，會有良好的社會效益和經濟利益前景。
[0021](4)本發明采用的包裹材料為工業注塑級聚乳酸PLA，原料價格便宜，且制備不需專門昂貴的設備，工藝流程簡單，載藥微球具有良好的生物相容性。
【附圖說明】
[0022]圖1為實施例1亞砸酸鋇載藥微球SEM圖。
[0023]圖2為實施例2亞砸酸鋇載藥微球SEM圖。
[0024]圖3為實施例2亞砸酸鋇載藥微球體外釋放曲線。
[0025]圖4為實施例3亞砸酸鋇載藥微球SEM圖。
[0026]圖5為實施例3亞砸酸鋇載藥微球體外釋放曲線。
[0027]圖6為對比例I亞砸酸鋇載藥微球SEM圖。
[0028]圖7為對比例2亞砸酸鋇載藥微球SEM圖。
[0029]圖8為對比例3亞砸酸鋇載藥微球SEM圖。
[0030]圖9為對比例4亞砸酸鋇載藥微球SEM圖。
[0031]圖10為對比例4亞砸酸鋇載藥微球體外釋放曲線。
【具體實施方式】
[0032]下面結合說明書附圖和具體實施例來進一步詳細闡述本發明。但實施例并不對本發明做任何形式的限定。除非特別說明，本發明采用的試劑、方法和設備為本技術領域常規試劑、方法和設備。
[0033]實施例1
一種新型富砸載藥微球的制備方法，包括如下步驟:
51.將Ig亞砸酸鋇粉末微粉化，加入2~6mL二氯甲烷中，超聲分散，超聲波功率為100W，分散時間為30min ；
52.將1.2g聚乳酸PLA溶于20~50mL二氯甲烷中，超聲波分散，超聲波功率為100W，分散時間為3h，形成溶液；
53.將SI得到的混合物均勻分散于S2所述溶液中，機械攪拌，轉速為15000r攪拌30s，形成乳液；
54.將0.6g聚乙烯醇溶于100~300mL水中，再加入1.5~5gNaCl，加熱混合均勻形成聚乙烯醇溶液；
55.再將S3形成的乳液加入到S4所述聚乙烯醇溶液中，機械攪拌，轉速為15000r.mirT1，攪拌6h，形成S/0/W型乳液；
56.攪拌S5得到的乳液使二氯甲烷揮發，固化成球，再經SOOOrpm離心，去離子水洗滌3次、再用5%鹽酸洗滌2次，常溫真空干燥，得到所述富砸載藥微球，于4°C避光保存；
其中，亞砸酸鋇為主藥；